專利名稱：獨角石斛蘭無菌播種和試管育苗技術的制作方法
技術領域：
本發明涉及石斛蘭的無菌播種和組織培養技術。
背景技術：
斛蘭屬約有1000種以上，我國有70多種，多數具有很高的觀賞價值，雜交品種繁多，是世界蘭花產業中最重要的種類之一。獨角石斛是原產越南地原生種，花色艷麗，花型獨特，具有極高的觀賞價值，少數野生植株在市場上極為槍手。目前石斛蘭的商品都要通過人工播種和組培繁殖進行生產，市場需求大，石斛蘭的繁殖多采用分株法，繁殖速度慢，而石斛蘭種子由于胚發育不完全，自然狀態下極難萌發，但在合適人工培養基上可以進行。
本發明采用人工營養液利用無菌播種的方法獲得大量試管苗，并利用無菌播種出的原球莖和小苗進行增殖，通過生根培養能形成完整植株。
發明內容
本發明技術是在開花時選取生長健壯的獨角石斛母株進行人工授粉，授粉后120天，果實基本成熟。將果實取下，用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分種，無菌水沖洗4-5次后切開果實，用接種針將白色粉末狀胚接種到壯苗培養基上壯苗培養。為獲得更多的種苗，利用原球莖或小苗繼代培養在增殖培養基上能形成芽和類原球莖混合組織，這類組織在壯苗培養基上，30天后可形成帶短根的叢生植株，及時將植株分開，接種到新的壯苗培養基上培養壯苗。種子萌發與生根壯苗時蔗糖濃度以2％最佳，繼代培養時以3％最佳。試管苗長到6-8厘米時，轉移到自然光下煉苗10天，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養基，用水苔栽培，保持適當通風和足夠的濕度，移栽的成活率可達90％以上。
本發明所述的技術包括如下的步驟1、材料開花時選取生長健壯的母株進行人工授粉，授粉后果實120天成熟時做為外植體用播種。
2、無菌播種用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分鐘，無菌水漂洗4-5次后切開果實，用接種針將白色粉末狀胚接種到種子萌發培養基上30天左右胚萌發，60天左右形成完整小植株，及時將小植株轉入壯苗培養基。
3、組織培養將無菌播種產生的原球莖或小苗培養在增殖培養基上能形成芽和類原球莖混合組織，在相同的培養基上能進行繼代增殖，將混合組織接種到壯苗培養基上，30天后可形成帶短根的叢生植株，及時將植株分開，接種到新的壯苗培養基上培養壯苗。
4、試管苗壯苗培養60天后(植株約6-8厘米高)，轉移到自然光下煉苗10天，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養基，用水苔種植，保持適當通風和足夠的濕度，移栽成活率可達90％以上。所用培養基pH5.2-5.4，瓊脂0.7％。培養溫度(26±2)℃，光照度1500-2000Ix，光照12小時/天。
本發明所述的無菌播種和試管育苗技術，與現有技術相比，具有萌發率高，出苗快，苗壯，種苗品質好、生長良好等優勢。本發明供試材料有廣泛代表性，可作為其它石斛蘭屬其它屬間雜種的無菌播種和組織培養方法，具有配方簡單有效、投入少，產出高的特點，培養設備簡單，因而有很好的應用前景。
實施例1、材料開花時選取生長健壯的獨角石斛母株母株進行人工授粉，授粉后果實120天成熟時做為外植體用播種。
2、無菌播種取下果實，用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分鐘，無菌水漂洗4-5次后切開果實，用接種針將白色粉末狀胚接種到種子萌發培養基上30天左右胚萌發，60天左右形成完整小植株，及時將小植株轉入壯苗培養基。
3、組織培養將無菌播種產生的原球莖或小苗培養在增殖培養基上能形成芽和類原球莖混合組織，在相同的培養基上能進行繼代增殖，將混合組織接種到壯苗培養基上，30天后可形成帶短根的叢生植株，及時將植株分開，接種到新的壯苗培養基上培養壯苗。
4、試管苗移栽試管苗壯苗培養60天后(植株約6-8厘米高)，轉移到自然光下煉苗10天，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養基，用水苔種植，保持適當通風和足夠的濕度，移栽成活率可達90％以上。所用培養基pH5.2-5.4，瓊脂0.7％。培養溫度(26±2)℃，光照度1500-2000Ix，光照12小時/天。
權利要求
1.一種獨角石斛蘭無菌播種和試管育苗技術，其特征在于開花時選取生長健壯的獨角石斛母株進行人工授粉，授粉后120天，將成熟果實取下，用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分種，無菌水沖洗4-5次后切開果實，用接種針將白色粉末狀胚接種到壯苗培養基上壯苗培養，利用原球莖或小苗繼代培養，在增殖培養基上能形成芽和類原球莖混合組織，這類組織在壯苗培養基上，30天后可形成帶短根的叢生植株，及時將植株分開，接種到新的壯苗培養基上培養壯苗，試管苗長到6-8厘米時，轉移到自然光下煉苗10天，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養基，用水苔栽培，用水苔栽培，形成完整植株。
2.根據權利要求1中所述的獨角石斛無菌播種和試管育苗技術，其特征在于所述種子萌發與生根壯苗時蔗糖濃度為2％，繼代培養時蔗糖濃度為3％。
3.根據權利要求1中所述的獨角石斛無菌播種和試管育苗技術，其特征在于所述試管苗移栽的培養基pH5.2-5.4，瓊脂0.7％，培養溫度(26±2)℃，光照度1500-2000Ix，光照12小時/天。
4.根據權利要求1中所述的獨角石斛無菌播種和試管育苗技術，其特征在于該技術可作為石斛蘭屬其它屬間雜種的無菌播種和組織培養方法。
全文摘要
本發明涉及石斛蘭的無菌播種和組織培養技術。斛蘭屬約有1000種以上，是世界蘭花產業中最重要的種類之一。獨角石斛是原產越南地原生種，花色艷麗，花型獨特，具有極高的觀賞價值，目前石斛蘭的商品都要通過人工播種和組培繁殖進行生產，石斛蘭的繁殖多采用分株法，繁殖速度慢，而石斛蘭種子由于胚發育不完全，自然狀態下極難萌發。本發明采用人工營養液利用無菌播種的方法獲得大量試管苗和小苗進行增殖通過生根培養能形成完整植株，該育苗技術具有萌發率高，出苗快，苗壯，種苗品質好、生長良好等優勢。
文檔編號A01H4/00GK1541518SQ20031011201
公開日2004年11月3日 申請日期2003年11月4日 優先權日2003年11月4日
發明者段俊, 曾宋君, 陳之林, 陳建通, 段 俊 申請人:中國科學院華南植物研究所