專利名稱：：一種微生物發酵液制成的組合制劑的制作方法
技術領域：
：本發明涉及微生物發酵液在植物保護和促進植物生長方面的新用途,屬于徼生物學，化學和農業
技術領域：
，涉及微生物學，化學，農學和生物化學等。二.
背景技術：
：隨著化學工業的發展和農藥肥料使用范圍的擴大，化學農藥的數量和品種都在不斷增加，現在世界化學農藥總產量(以有效成分計)超過300萬噸。由于化學農藥和化肥的長期大量施用，已帶來了嚴重的環境污染和病蟲抗藥性的不斷增加。許多國家都投入了大量資金研究開發能夠替代或減少化學農藥和化肥的新制劑，以保持農業生產的可持續發展。農藥化肥造成的環境污染和農藥殘留在我國更為嚴重。我國有1.2億公頃耕地，化學農藥總施用量達l31.2萬噸，平均每畝施用931.3克，蔬菜和瓜果更達到6.67公斤/畝。我國的化肥用量則占了全球用量的1/3，由此帶來了嚴重的河流湖泊以及地下水富營養化污染。導致我國化肥農藥的大量施用一方面由于種植者片面追求產量，另一方面是由于缺少能夠有效減少肥料和農藥的使用但能保證作物產量和品質的方法和產品。前期的研究發現一些徼生物能夠分泌調節植物生長發育的植物激素，如引哚乙酸，脫落酸，赤霉素等，還有一些微生物的代謝產物可以誘導植物抗性(CN1456059A)，如幾丁質，聚氨基葡糖等。而大量存在于自然界中的脂肪酸也被注意到具有一定的殺細菌和殺真菌活性，高濃度的壬酸有很強的植物毒性還被用作除草劑。S.D.薩瓦格等人將脂肪酸施用到植物的病害部位直接殺真菌和細菌取得了很好的效果(CN1069391A)，他們的研究強調了脂肪酸通過殺真菌和細菌治療植物病害的治療效果，但作出陳述脂肪酸的濃度很低就沒有活性，過高則對植物造成傷害，并且脂肪酸和它的鹽或衍生物對植物病害沒有預防活性。在他們給出的實驗結果中，脂肪酸和它的鹽或衍生物是直接施用到植物的病害部位才起到治療作用的，而且脂肪酸和它的鹽或衍生物施用到植物上的最低有效濃度為0.125%a.i.(1250毫克/升)，濃度低至0.063%時所用的脂肪酸或它的鹽或衍生物就沒有控制病菌侵染的效果了。本發明涉及用微生物發酵液配制的用于調節植物生長發育和防治植物病害的多效制劑。通過徼生物發酵液與無機酸或有機酸和無機鹽或有機鹽的組合，取得了在促進植物生長，增加植物產量上的優秀效果，而且這種組合物還能有效預防多種植物病害。這種多效制劑中含有的特征成分脂肪酸的存在非常明顯,盡管含量低于薩瓦格等人提出的能夠殺菌的最低有效脂肪酸濃度1250毫克/升。多效制劑實現了促進植物生長，增加植物產量，防治植物病害的多重效果，這對于減少大量施用化肥和農藥在農產品和環境中的污染有非常積極的意義。三.
發明內容要解決的技術問題本發明的目的一是提供一種用微生物發酵液與無機酸或有機酸和無機鹽或有機鹽的組合制成的多效制劑配方，這種多效制劑實現了促進植物生長，增加植物產量，防治植物病害的多重效果，是一個既能促進植物生長，提高植物產量，對植物病害既有預防效果又有治療效果的多效制劑。本發明的目的二是制成的制劑可以施用于植物的種子，葉，根，莖或果實，以及植物附著的土壤和培養液等，制劑的施用方法為噴施，澆灌，浸種和浸果。技術方案本
技術領域：
的技術人員知道，微生物在發酵過程產生的代謝產物中有許多有用的成分，包括植物激素，誘導抗性素等。這些成分常常需要復雜的程序提取收集，再制成制劑用于生產實踐。本發明的主要方法是將微生物發酵液與無機酸或有機酸和無機鹽或有機鹽直接組合制成的一種制劑配方，通過發酵液與無機酸或有機酸和無機鹽或有機鹽的協同作用，使制劑獲得了促進植物生長，提高植物產量，對植物病害既有預防效果又有治療效果的多重功能。所述的發酵液的主要成分包括但不局限于從C5到C24的飽和或不飽和的脂肪酸，脂肪酸包括但不局限于棕櫚酸，棕櫚烯酸，硬脂酸，亞油酸，油酸，葵酸，月桂酸，肉豆蔻酸，壬酸，花生四烯酸等，或脂肪酸的鹽或衍生物，包括但不局限于由鉀，鈉，銨等離子或含有胺基的基團等組合成的脂肪酸鹽或衍生物。所述無機酸或有機酸包括但不局限于硫酸，醋酸，磷酸，硝酸，鹽酸，亞磷酸，亞硫酸，硼酸，甲酸，乙酸，冰乙酸，丁酸，鄰苯二甲酸，對苯二甲酸，丁二酸，腐植酸，水楊酸，對氨基苯甲酸，鄰氨基苯甲酸，苯甲酸等。所述無機鹽或有機鹽包括但不局限于氯化鈣，氯化鈉，氯化鉀，過磷酸鈣，三磷酸鈉，多磷酸鈉，磷酸二氫鉀，磷酸氫二鉀，硫酸鈉，硫酸鉀，碳酸鈣，碳酸氫鈣，硫酸鈣，硝酸銬，葡萄糖轉等。本發明的實施步驟為1)取葡萄糖和麥芽提取粉各20克，加5克酵母提取粉，5克海藻糖氨鈣，瓊脂15克，加水至1升。經滅菌消毒冷卻后，倒入培養皿中制成培養基(GMYM)。以選自假單孢菌屬的有關菌種PseudomonasglatheiTP06在培養基上劃線培養48小時培養獲得菌種。2)將菌種從培養基轉到含GMYAB培養液(葡萄糖和麥芽提取粉各20克，加5克酵母提取粉，5克海藻糖氨鈣，加水至1升)，在溫度30°C，轉速125rpm的條件下于搖床上培養72小時。3)以10%的接種量將培養的菌種轉入到發酵罐以與種子罐相同培養液在30°C通氣發酵培養72小時，制得發酵液。4)取100毫克硝酸鈣加入到120毫升10%的鹽酸溶液中，充分攪拌，加入10毫升含20%的三磷酸鈉溶液，充分攪拌后加入到上述培養的l升發酵液中，充分攪拌，即制成含發酵液的多效制劑。具體實施例方式實例l.1)葡萄糖和麥芽提取粉各20克，加5克酵母提取粉，5克海藻糖氨鈣，瓊脂15克，加水至1升。經滅菌消毒冷卻后，倒入培養皿中制成培養基(GMYM)。以選自假單孢菌屬的有關菌種PseudomonasglatheiTP06在培養基上劃線培養48小時培養獲得菌種。2)菌種從培養基轉到含GMYAB培養液(葡萄糖和麥芽提取粉各20克，加5克酵母提取粉，5克海藻糖氨鈣，加水至l升)，在溫度30°C,轉速125rpm的條件下于搖床上培養72小時。3)以10%的接種量將培養的菌種轉入到發酵罐以與種子罐相同培養液在30°C通氣發酵培養72小時，制得發酵液。4)取100毫克硝酸鈣加入到120毫升10%的鹽酸溶液中，充分攪拌，加入10亳升含20%的三磷酸鈉溶液，充分攪拌后加入到上述培養的l升發酵液中，充分攪拌，即制成含發酵液的多效制劑。實例2.多效制劑中脂肪酸的含量以氣相色譜一質譜法按下述條件測定。1.儀器AgilentTechnologiesGC/MS5975i2.色譜柱HP-5ms(30mx250umx0.25um)5%PhenyMethylSiloxane3.色譜柱溫度程序IOO'C保持lmin，然后以30°C/min程序升溫至13(TC，再以5'C/min程序升溫至25(TC，再以10。C/min程序升溫至300。C，保持5min;4.載氣氦氣，純度》99.999%，流速為1.2mL/min;5.進樣口溫度290°C;6.進樣量:2WL;7.進樣方式無分流進樣；8.電子轟擊源70eV;9.四極桿溫度150t:;10.離子源溫度230°C;1LGC—MS接口溫度:280°C;全譜掃描；質量掃描范圍m/z:50到550U;溶劑延遲3min。測得的結果如表l。表l多效制劑中部分主要脂肪酸的含量<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實例3.多效制劑在促進植物生長，增加產量上的效果取多效制劑100亳升，加水稀釋100倍，均勻噴灑到田間新移栽的茄子葉片上，每隔15天噴灑一次，不使用任何化學殺菌劑和追肥，相鄰地塊以噴化學農藥和追肥的常規管理作對照。結果如表2，多效制劑顯著促進作物生長，并獲得了高達42%的增產效果。表2多效制劑促進茄子生長和增產效果的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注、同列數字后不同字母表示處理和對照的顯著差異。實例4.在已知連續三年發生桃樹黃化病的地塊按隨機區組設計田間試驗。引起桃樹黃化病的原因尚未作出定論，但初步調査認為可能是由于缺鐵引起的生理病害或由一種類病毒侵染引起的病理性黃化，或是這兩種原因的混合作用引起的桃樹黃化。將試驗分為兩組，一組為桃樹出現黃化前即開始處理，另一組在桃樹葉片已出現黃化癥狀后才開始處理。處理取多效制劑IOO毫升，加水稀釋100倍，均勻噴灑到桃樹的葉片上，每隔15天噴灑一次，不使用任何化學農藥和追肥，以噴化學農藥和追肥的常規管理作對照。處理和對照各5株，重復3次。調査結果如表3。表3多效制劑在控制桃樹黃化病上的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實例5.將發生根腐病危害的新移栽蓮花白幼苗地塊按隨機區組設計分為處理和對照，處理取多效制劑100毫升，加水稀釋100倍，均勻噴灑到新移栽的蓮花白幼苗上，每隔7天噴灑一次。對照噴灑化學農藥根腐靈。每處理30株苗，重復3次。噴3次后調査結果如表4，對照地塊的幼苗幾乎全部受病菌侵染死亡，而多效制劑顯著減少了根腐病的危害，對蓮花白幼苗根腐病的防治效果達到95%。表4、多效制劑防治蔬菜根腐病的效果處理幼苗發病死亡率％多效制劑12.3a1對照95.7b注、同列數字后不同字母表示處理和對照的顯著差異。實例6.取多效制劑100毫升，加水稀釋100倍，均勻噴灑到種于溫室中受白粉病嚴重危害的五色梅上，處理和對照各10株，重復3次。每隔7天噴灑一次。噴清水作對照。噴2次后調査結果如表5，多效制劑對植物白粉病有非常顯著的防治效果。表5、多效制劑防治植物白粉病的效果處理發病率％多效制劑21.3a對照98.2b注、同列數字后不同字母表示處理和對照的顯著差異。實例7.葡萄幼苗種于溫室中，以保存在活體植株上的霜霉病菌接種后，置于髙濕環境中培育24小時。取多效制劑100毫升，加水稀釋100倍，整株均勻噴灑接種后培育了24小時的葡萄苗上，噴清水作對照。處理和對照各5株，重復3次。7天后調査結果如表6，多效制劑對葡萄霜霉病有非常顯著的防治效果。表6、多效制劑防治葡萄霜霉病的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注、同列數字后不同字母表示處理和對照的顯著差異。權利要求1.一種用微生物發酵液制成的調節植物生長發育和防治植物病害的多效制劑。其特征在于選自一種微生物發酵液與選自一種或多種無機酸或有機酸和選自一種或多種無機鹽或有機鹽組合制成的調節植物生長發育，增加植物產量，對植物病害既有預防效果又有治療效果的多效制劑。2.如權利要求1所述的微生物發酵液的有效成分包括但不局限于:從C5到C24的飽和或不飽和的脂肪酸或脂肪酸的鹽或衍生物，一種或多種胺或酰胺類的化合物，一種或多種氨基酸類的化合物,或一種或多種多肽類的化合物。3.如權利要1所述無機酸或有機酸包括但不局限于硫酸，醋酸，磷酸，硝酸，鹽酸，亞磷酸，亞硫酸，硼酸，甲酸，乙酸，冰乙酸，丁酸，鄰苯二甲酸，對苯二甲酸，丁二酸，腐植酸，水楊酸，對氨基苯甲酸，鄰氨基苯甲酸，苯甲酸等。4.如權利要求1所述無機鹽或有機鹽包括但不局限于氯化鈣，氯化鈉，氯化鉀，過磷酸鈣，三磷酸鈉，多磷酸鈉，磷酸二氫鉀，磷酸氫二鉀，硫酸鈉，硫酸鉀，碳酸鈣，碳酸氫鈣，硫酸鈣，硝酸銬，葡萄糖轉等。5.如權利要求1所述制劑，其特征在于所述制劑可以只含有一種脂肪酸或脂肪酸的鹽或衍生物作為特征成分。6.如權利要求1所述制劑，其特征在于更優選的是所述制劑含有兩種或多種脂肪酸與脂肪酸或脂肪酸的鹽或衍生物的組合物作為特征成分。7.如權利要求1所述制劑，其特征在于所述制劑可以施用到的目標部位包括但不局限于植物的種子，葉，根，莖或果實，或植物附著的任何固態的或液態的物體。8.如權利要求1所述制劑，其特征在于所述制劑用水稀釋后施用到目標部位上時的液體中所含脂肪酸的質量濃度為0.001毫克/升-20克/升。9.如權利要求1所述制劑，其特征在于更優選的所述制劑用水稀釋后施用到目標部位上時的液體中所含脂肪酸的質量濃度為0.01毫克/升-1249.9999毫克/升。10.如權利要求1所述，其特征在于制劑所述無機酸或有機酸的質量濃度為0.00001-50%,所述無機鹽或有機鹽的質量濃度為0.00001-50%。11.如權利要求1所述微生物發酵液，其特征在于:制備方法是通過選自假單孢菌屬的有關菌種PseudomonasglatheiTP06經GMYAA培養基培養獲得菌種，將菌種從培養基轉到三角瓶內(含GMYAB培養液)在溫度30°C，轉速125rpm的條件下于搖床上培養72小時，以10%的接種量將培養的菌種轉入到發酵罐以相同培養液在30。C通氣發酵培養72小時，制得微生物發酵液。12.如權利要求1所述制劑，其特征在于:制備方法是直接向徼生物發酵液中加入無機酸或有機酸和無機鹽或有機鹽，充分攪拌,即制成所述的多效制劑。13.如權利要求1所述植物病害，其特征在于包括但不局限于由真菌，細菌，病毒，類病毒，線蟲等侵染引起的病理性植物病害，或由于缺氮，磷，鉀，釣，鎂，硫，鐵，鋅，鎮，硼等營養元素引起的生理性植物病害。14.如權利要求2所述脂肪酸，其特征在于包括但不局限于棕櫚酸，棕櫚烯酸，硬脂酸，亞油酸，油酸,葵酸，月桂酸，肉豆蔻酸，壬酸，花生四烯酸等。15.如權利要求2所述脂肪酸的鹽或衍生物包括但不局限于由鉀，鈉，銨等離子或含有胺基的基團等組合成的脂肪酸鹽或衍生物。16.如權利要求6所述，其特征在于所述脂肪酸在制劑的總油脂中的比例為棕櫚酸0-95%,硬脂酸0-20%,亞油酸O-85%，油酸0-90%,葵酸0-20%,月桂酸0-25%,肉豆蔻酸0-20%，壬酸0-20%。全文摘要一種用微生物發酵液組合制成的多效制劑。用微生物發酵液與無機酸或有機酸和無機鹽或有機鹽的組合制成的多效制劑配方，這種組合制劑中含有非常明顯的特征成分脂肪酸。多效制劑實現了促進植物生長，增加植物產量，防治植物病害的多重效果，是一個既能促進植物生長，提高植物產量，對植物病害既有預防效果又有治療效果的多效制劑。文檔編號A01N63/02GK101167480SQ20061002209公開日2008年4月30日申請日期2006年10月23日優先權日2006年10月23日發明者永黃申請人:永黃