專利名稱：一種大型溞儲備保種培養方法
技術領域：
本發明屬于浮游動物培養領域，涉及一種生態型大型潘儲備保種培養方法。
背景技術：
大型潘OfeMflia ffl^TKO生活于自然水域，屬于浮游甲殼類動物，是世界種。它具 有生活周期短、繁殖快、經濟、對毒物敏感等優點，在水域生態系統中具有重要的作用，可以 用于綜合評價工業廢水的毒性、農藥毒性及新化學物質毒性等。大型潘是國際公認的標準 試驗生物，被廣泛應用于水生生物毒理試驗。隨著大型潘毒理試驗研究的發展，各國相繼建立了大型潘毒性測定的標準方法， 對試驗型大型潘的培養條件做了相關的規定，而針對于大型潘的保種培養卻未有提及。試 驗潘的來源可以從實驗室已有的純培養中挑選、引種，也可以從野外采集。野外采集的潘要 經分離、鑒定、純化，耗時費力。如何簡便地在實驗室進行保種培養，免去野外采集的煩瑣工 作，是亟待解決的問題。大型潘的適宜繁殖的條件為溫度22°C左右、pH = 6. 5 8. 5、培養用水可選用經 自然曝氣三天以上的自來水或人工配置的稀釋水。在該條件下，大型潘能健康快速繁殖，因 此需頻繁投喂餌料，更換水源，定期移除過量的大型潘，另外，也長期占用培養箱的空間資 源。通常情況下大型潘采用單性孤雌生殖方式，在適宜條件下培養的大型潘會大量繁殖，造 成培養液中密度太大，導致孤雌生殖停止而進行有性生殖。根據國際標準組織ISO規定，進 行毒性實驗的大型潘必需是敏感純種的生物株，因此大型潘的繁殖需約束在孤雌生殖的狀 態下。大型潘的實驗室保種若采用試驗培養的方法，操作繁瑣，工作量較大，且不利于純種 的保存。
發明內容
本發明克服了現有技術的缺陷，提供了一種操作簡單，費用少，水質穩定的生態型 大型潘儲備保種培養方法。本發明通過以下技術方案實現
一種大型潘儲備保種培養方法，其特征在于建立潘一藻一螺一魚水生生態系統。上述水生生態系統中的藻為斜生柵藻Ji為環棱螺；魚為青苔鼠。水生生態系統中斜生柵藻的密度為4X IO3飛X IO3個/L ；幼潘、環棱螺、青苔鼠在 系統中的數量關系為150150 :2 3:1 2 :1。上述水生生態系統的建立包括以下步驟①在裝有清水的容器中按照 4 X 1(T4. 5 X IO3個/L的密度接種柵藻；②接種幼潘40-50個；③放入1-2個環棱螺和1_2 條青苔鼠魚；④將容器置于無陽光直射的環境；溫度保持在10-35°C之間；水體pH保持在 6. 5-8. 5之間；每隔7-10天更換8-10%容器體積的曝氣后自來水；⑤每周投喂餌料1_2次。步驟①所述容器為圓形容器，便于攪動水體，將殘雜集中于容器中央，用吸管將雜 質吸走；容器為玻璃質地，便于觀察；容器大小為5L。
步驟①所述清水是自來水放于陽光下曝氣三天以上，除去水中殘余氯氣。步驟⑤所述餌料為斜生柵藻，其投喂量為每周投喂2(T30ml的1 X IO6個/L柵藻1次。上述水生生態系統建立方法的優選方案如下
(1)在5L圓形玻璃缸中加入自來水，自來水曝氣三天以上，除去水中殘余氯氣。(2)在玻璃缸中接種IX IO6個/L左右的柵藻。(3)接種幼潘50個。(4)放入1 2枚環棱螺(徹和1-2條清潔玻璃缸底部和四壁的青苔鼠 (Acantopsis choirorhynchos).青苔鼠是水草缸及小型魚缸最常配養的食藻魚，價格便 宜，能清除玻璃缸底部和四壁貼壁生長的藻類，使水缸保持光亮。青苔鼠還能攪動玻璃缸中 水體，促進水體中柵藻的繁殖。(5)將玻璃缸至于室內，無陽光直射。溫度在10_35°C范圍內即可。每隔7-10天 換水10%。(6)除偶爾添加大型潘的餌料斜生柵藻外，不再添加任何營養鹽或其他餌料。潘一藻一螺一魚水生生態系統的建立為大型潘的長期穩定保種提供了可能性。原 因如下
1.斜生柵藻作為餌料，被大型潘、環棱螺以及青苔鼠所食，大型潘褪下的殼以及環棱 螺、青苔鼠的排泄物又可以為柵藻繁殖提供N、P等營養物質，因此可以減少餌料柵藻的投
喂數量。2.大型潘與環棱螺、青苔鼠不構成捕食關系，大型潘的數量不會因被捕食而銳減。 在混養系統中，通過與其他物種共用資源且受混養系統的綜合性影響，從而保證了大型潘 的孤雌生殖。3.該水生生態系統的建立，使柵藻和大型潘生長穩定，水質良好，無需頻繁換水。 系統能夠自給自足、廢物再利用，不用經常性照料，充分利用了自然生態系統的循環性和穩 定性。本發明的有益效果為
1、生態型大型潘儲備保種培養方法能在室內條件下長年保種大型潘，為實驗室提供充 足的健康純種大型潘。2、操作簡單，費用少。材料來源廣，無需特殊技術和設備。一個生態型大型潘保種 培養系統的建立約需20元左右(玻璃缸15元，青苔鼠3元/條)。3、持續時間長，南方地區可實現室內常溫(10_35°C)狀態下長年保種培養。隨時 提供實驗材料。4、成功解決了傳統培養中大型潘大量繁殖導致孤雌生殖停止而進行有性生殖、需 頻繁換水、需頻繁清理培養系統雜質、占用培養箱空間難題。傳統培養中每周需換3次水， 要經常性移除過量的大型潘，防止密度過高。生態型培養方法中換水周期為7-10天，換水 量為10%，大型潘的密度保持穩定，無需經常性清除數量過多的大型潘及培養過程中產生的 廢物，大大減少了工作量。5、系統穩定，大型潘、柵藻、環棱螺以及青苔鼠能共存。5L的玻璃缸能提供250個 左右的大型潘。PH維持在6. 5 8之間。氧溶量可維持在:3mg/L以上。
6、在該保種生態系統中，大型潘以柵藻為食，青苔鼠和環棱螺攝食貼壁生長的 藻類以及沉淀于玻璃缸底部的碎屑和大型潘褪皮遺下的甲殼。青苔鼠、環棱螺和大型潘不 構成捕食關系，對水體可以起到一定的攪拌作用，其排泄物有利于柵藻的生長，從而可以相 輔相成，保持該水生生態系統水質的穩定性。生態型大型潘儲備保種培養方法采用簡單的生態系統構造，操作簡單，費用少，水 質穩定，節省換水時間，無需恒溫培養箱，能在室內長期保證大型潘的生長和繁殖。目前，大 型潘已被眾多實驗室廣泛利用，生態型大型潘保種培養方法能為實驗室提供隨取隨用的試 驗材料，免去前期煩瑣的選育工作，節約時間，減少工作量，保證試驗順利進行。大型潘的毒理試驗廣泛應用，需隨時提供大型潘作為試驗材料。采用構建簡單的 水生生態系統的方法，操作簡單，費用少，大型潘能穩定生長和繁殖，無需經常性的野外采 種，免去一般培養中頻繁的人工換水、投喂餌料、清除雜質廢物的麻煩，達到簡便的實驗室 長期保種的目的。
圖1是潘類一藻類一螺一魚水生生態系統，其中1是青苔鼠，2是環棱螺，3是大 型潘，4是斜生柵藻。
具體實施例方式
實例1 1、試驗材料
1條青苔鼠、2個環棱螺、5L圓形玻璃缸、50個左右大型潘、1 X IO6個左右柵藻、4L曝氣 3天的自來水、70cm虹吸管、1個玻璃棒、1個吸管。2、試驗過程
時間:2010. 01 — 2010. 12. 溫度10-；35 °C
(1)曝氣后的自來水倒入5L的圓形玻璃缸中，依次接種1 X IO6個/L左右的柵藻、大型 潘幼潘50個、放入2枚環棱螺和1條青苔鼠。放置于試驗臺上，無陽光直射，室溫培養。觀 察系統無異常現象。(2)每周投喂20ml的1 X IO6個/L柵藻1次，以補充大型潘對柵藻的消耗。使該 生態系統中各種生物保持在以下關系柵藻的密度為4X IO3飛X IO3個/L左右。(3)每7-10天換水一次，換水量為8-10%。(4)當玻璃缸水體雜質殘余稍多時，可用玻璃棒攪動水體，使玻璃缸水體環流起 來，此時，殘余雜質等將集中于玻璃缸底中央，待水體靜止時，用吸管吸走這些殘余雜質，以 減輕水體的負荷。(5)柵藻和大型潘生長情況記錄。3、試驗結果
(1)隨著室溫的變化，大型潘的數量也會消長起伏，但總個體數基本能穩定在120-300 個左右，無需移除大型潘。(2)換水周期為7-10天，水質良好。柵藻、環棱螺和青苔鼠生長情況良好，培養系 統穩定。
(3)在為期一年的實驗中，大型潘能保持孤雌生殖，無水質惡化現象，可達到為實 驗室長期提供優良純種的目的。
權利要求
1.一種大型潘儲備保種培養方法，其特征在于建立潘一藻一螺一魚水生生態系統。
2.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于所述水生生態系統中的藻為斜生柵藻， 螺為環棱螺，魚為青苔鼠。
3.如權利要求2所述的培養方法，其特征在于所述斜生柵藻的密度為4X103飛X IO3個 /L ；大型潘、環棱螺、青苔鼠在系統中的數量關系為15(Γ250:2 3:廣2。
4.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于所述水生生態系統的建立包括以下步 驟①在裝有清水的容器中按照4X10，4.5X IO3個/L的密度接種柵藻；②接種幼潘 40-50個；③放入1-2個環棱螺和1-2條青苔鼠魚；④將容器置于無陽光直射的環境；溫度 保持在10-35°C之間；水體pH保持在6. 5-8. 5之間；每隔7_10天更換8-10%容器體積的曝 氣后自來水；⑤每周投喂餌料1-2次。
5.如權利要求4所述的培養方法，其特征在于步驟①所述容器為圓形容器。
6.如權利要求4所述的培養方法，其特征在于步驟①所述容器為玻璃質地。
7.如權利要求4所述的培養方法，其特征在于步驟①所述清水是自來水放于陽光下曝 氣三天以上，除去水中殘余氯氣。
8.如權利要求4所述的培養方法，其特征在于步驟④所述環境為室內環境。
9.如權利要求4所述的培養方法，其特征在于步驟⑤所述餌料為斜生柵藻，其投喂量 為每周投喂2(T30ml的1 X IO6個/L斜生柵藻1次。
全文摘要
本發明屬于浮游動物培養領域，涉及一種生態型大型溞儲備保種培養方法。生態型大型溞儲備保種方法需建立簡單的溞－藻－螺－魚水生生態系統，讓大型溞在生態系統中穩定生長和繁殖，定期更換少量培養用水和添加少量餌料，保證大型溞長年穩定在系統中。大型溞的毒理試驗廣泛應用，需隨時提供大型溞作為試驗材料。采用構建簡單的水生生態系統的方法，操作簡單，費用少，大型溞能穩定生長和繁殖，無需經常性的野外采種，免去一般培養中頻繁的人工換水、投喂餌料、清除雜質廢物的麻煩，達到簡便的實驗室長期保種的目的。
文檔編號A01K61/00GK102138542SQ20111004730
公開日2011年8月3日 申請日期2011年2月28日 優先權日2011年2月28日
發明者竇碧霞, 黃建榮 申請人:中山大學