專利名稱：一種河鰻的人工繁殖方法
技術領域：
本發明涉及一種河鰻的人工繁殖的方法，具體地說，是河鰻在人工激素調控下，獲得性成熟的雌鰻和雄鰻，通過人工授精和自然交配獲得大量河鰻受精卵及早期幼苗的方法。
背景技術：
河鰻，學名日本鰻鱺Unguilla japonica),是亞洲最重要的洄游性魚類之一，生活史中經歷數次變態過程，在淡水中生長、育肥，到海洋中產卵、繁殖。目前河鰻養殖所需苗種完全依賴天然捕撈。我國經歷了由上世紀70年代的鰻苗捕撈出口，90年代初部分鰻鱺依靠進口，到90年代末長江口捕苗困難的過程。由于生態資源的破壞，環境的不斷惡化及玻璃鰻的過度捕撈，導致鰻苗資源逐年下降，鰻苗資源枯竭，鰻苗價格飛升，2010年到2011 年，價格甚至達到16-20元/尾。而鰻鱺養殖是我國出口創匯的主要品種之一。鰻鱺苗種短缺極大的限制了鰻鱺養殖業的進一步發展，開展鰻鱺人工繁殖技術研究勢在必行。
河鰻人工繁殖周期相當漫長，長達3-6個月。人工繁殖過程中存在著雌雄發育不同步，催產效率差，受精率低，孵化不穩定，開口餌料無法解決等問題。且長期缺乏其海洋中自然繁育的生態條件的了解認識，河鰻的人工繁殖成為公認的世界難題。2010年日本水產綜合研究中心在長達40多年的研究后，宣布完成了河鰻的全人工繁殖，但繁殖過程中催產率，受精率，孵化率，存活率極低，且高成本的投入(幼苗每尾約100萬日元)，以及實驗化的操作條件遠遠滿足不了大批量生產的需要。得到大量優質的鰻鱺精卵，獲得較高的受精率及孵化率，成為真正實現鰻鱺的全人工繁殖必須解決的首要問題。
上世紀70，80年代，我國就開始河鰻人工繁殖的研究。廈門水產學院(現上海海洋大學)趙長春等在國內首先拿到了河鰻人工幼苗，并養到22-23天。至今國內無人打破此紀錄。之后七五和八五期間作為國家重點課題由上海水產大學(現上海海洋大學)負責，聯合河北省水產研究所、水科院珠江水產研究所、水科院南海水產研究所、復旦大學、浙江省海洋水產研究所、中科院南海海洋研究所等進行了河鰻人工育苗技術的研究，取得了很大進展。
中國專利文獻CN101461334B公開了一種獲得鰻鱺正常成熟精子的方法，其特征是鰻鱺親本在人工養殖環境條件下開口攝食后養殖15天以后進行鹽度馴化，鹽度馴化由低濃度逐步過渡到海水；鰻鱺養殖池水溫控制在18-25°C之間，白天全遮光，夜晚見月光， 晚上進行流水刺激，水中溶氧保持在6mg/l以上，弱堿性水，氨、氮含量不超過0. 02mg/l和 0.05mg/l，鰻鱺雄性自然排精，獲得成熟正常精子。中國專利文獻CN102232363A公開了一種人工誘導花鰻鱺性腺發育成熟的方法，雄性花鰻鱺采用肌肉注射HCG進行催熟，劑量為 500U/kg ·體重，每周注射一次，注射時間為6周；雌性花鰻鱺采用肌肉注射LHRH-A2和鯉魚腦垂體(CPE)勻漿進行催熟，LHRH-A2劑量為250 μ g/kg ·體重，CPE的劑量為4粒/kg ·體重，每7-9天注射一次，注射次數15-18次。但是關于河鰻在人工激素調控下，獲得成熟的雌鰻和雄鰻，通過人工授精和自然交配獲得大量河鰻受精卵及早期幼苗的方法目前還未見報道。 發明內容
本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種河鰻的人工繁殖方法。
為實現上述目的，本發明采取的技術方案是一種河鰻的人工繁殖方法，通過定期注射鯉魚腦垂體勻漿液和HCG，促使親魚達到性成熟，并通過自然產卵或人工授精，獲得受精卵和初孵仔魚，所述的人工繁殖方法包括以下三個步驟a、親魚催熟將收集的降海河鰻親本馴養7天后，引入沉淀過濾的天然海水，鹽度 17%。，用人工海鹽調配，使池水鹽度逐漸上升到20%。，之后每半個月為一周期，鹽度上調 3-4%。，直到鹽度上升到30-35%。；根據魚體體重，親魚背部肌肉注射催熟劑鯉魚腦垂體勻漿液混合HCG，每周注射一次，雄魚在雌魚注射兩周后開始，劑量減半；雌鰻在注射5-7針后， 水溫達到20士0. 5°C時，停止注射；雄魚繼續注射催熟劑，每次注射后第二天按壓腹部檢查生殖孔及收集精子；b、親魚催產雌鰻注射最后一針催熟劑，24h后注射催產劑17α -羥基孕酮混合HCG，并挑選已經可以產精的雄鰻，注射一針催熟劑；翌日凌晨，收集自然產卵的受精卵；未產卵雌鰻，進行半干法人工授精；C、受精卵孵化得到的受精卵立即轉運到孵化桶中進行孵化；曝氣，保證溶解氧充足， 并形成微水流能帶動卵粒浮動；每四小時換一半水體，直至成功孵出魚苗。
所述的催熟劑為0. 5mg/500g ·體重的鯉魚腦垂體勻漿液混合150IU/500g ·體重的HCG，催產劑為5mg/500g ·體重的17 α -羥基孕酮混合150IU/500g ·體重的HCG。
所述的步驟a中環境因子為鹽度17-30%。，水溫16°C -24°C, pH 7. 5-8. 2，溶解氧 4_15mg/L，投放密度為50尾/池，雌雄分開。
所述的步驟b環境因子為鹽度30-35%。，水溫19. 5-22. 5°C, pH 7. 0-8. 0，溶解氧 5_15mg/L，投放密度12尾/池，雌雄比例1 :3。
所述的步驟C中環境因子為鹽度33士0.5%。，水溫21 士0.5，pH 7.2-7. 5，溶解氧 6mg/L以上，氨、氮含量分別不超過0. 02mg/L和0. 05mg/L, Ca2+，Mg2+質量濃度范圍分別為 325-330 mg/L，1160-1165 mg/L。
所述的孵化密度為600-800粒/L。
所述的步驟a中將收集的降海河鰻親本放入搭有遮陽布大棚的池中，池底遮陽網下加覆蓋物。
本發明優點在于1、本發明的突出特點是在人工催熟河鰻條件下，通過適應性馴養，鹽度馴化，人工水質的調控管理，能夠防止麻醉劑及操作損傷，降低激素注射劑量，使雌鰻在后期依靠自身已經調動的生殖機制達到卵巢發育的最后階段，通過人工催產，大量河鰻能自然交配產卵；2、優化人工授精前雌鰻挑選程序，利用已經具有產卵行為的雌鰻，能有計劃有把握的完成人工授精；3、嚴格控制孵化環境因子，能得到大量初孵幼苗，提高了人工繁殖河鰻得到優質受精卵和初孵魚苗的水平。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明提供的具體實施方式
作詳細說明。
實施例1親魚催熟環境因子鹽度17-30%。，水溫160C -24°C,pH 7. 5-8. 2，溶解氧4_15mg/L，投放密度為 50尾/池，雌雄分開。
對收到的降海河鰻親本進行適應期馴化。將收集的降海河鰻親本放入搭有半邊遮陽布大棚的水泥池中(IOmX 3mX 1. 2m)，馴養7天適應人工環境后，引入沉淀過濾的天然海水(17%。)，用人工海鹽調配，使池水鹽度逐漸上升到20%。，之后每半個月為一周期，鹽度上調3-4%。，直到鹽度上升到30-35%。。池底遮陽網下加瓦片、PVR管等覆蓋物，白天時魚體躲于覆蓋物中，晚上會在沒有遮陽網下的區域活動，達到白天避光，晚上見月光的效果。
其中催熟處理利用河鰻體型及畏光特性，對魚體進行催熟處理操作時不用麻醉劑，使用人工親本網控制(參見中國專利申請CN201733718U —種魚類人工繁殖親本控制網)，稱量魚體體重，親魚背部肌肉注射催熟劑，所述的催熟劑為鯉魚腦垂體勻漿液(CPE) (0. 5mg/500g ·體重，即 0. 5mg/500g · Bff)混合 HCG (150IU/500g · BW)，每周注射一次，雄魚在雌魚注射兩周后開始，劑量減半。雌鰻在注射5-7針后，水溫達到20士0. 5°C時，停止注射。已經開始發育的雌鰻利用自身的生殖調控，經過1-2周能達到性腺發育最后的水和作用階段。此時雄魚繼續注射催熟劑，每次注射后第二天按壓腹部檢查生殖孔及收集精子。
實施例2親魚催產環境因子鹽度30-35%。，水溫19. 5-22. 5°C, pH 7. 0-8. 0，溶解氧5_15mg/L，投放密度 12尾/池，雌雄比例1 :3。
2-3周后，已經開始發育的雌鰻利用自身的生殖調控，達到卵巢發育最后的水和作用階段。根據雌鰻的生殖孔狀態(突起并少許紅腫)，腹圍變化程度(適量變大但不膨大)，挑選魚體，雌鰻在第一天上午注射最后一針催熟劑，24h后注射催產針，催產劑為17 α -羥基孕酮(OHP) (5mg/500g · Bff)混合HCG(150IU/500g · Bff)。并挑選已經可以產精的雄鰻，注射一針CPE (0. 5mg/500g · Bff)混合HCG (150IU/500g · Bff)。催產后投放入池，密度12尾/ 池，雌雄比例1 :3。
其中自然產卵部分，在翌日凌晨3-4點，觀察水體表面追逐的雌雄鰻鱺。在雌雄鰻鱺完成自然交配后用100目紗絹收集受精卵。
其中人工授精部分，捕撈由于雄魚未追逐或者效應時間差，長時間在水體表面游動的未產卵雌鰻，捕撈后進行半干法人工授精。
實施例3受精卵孵化環境因子嚴格控制鹽度33士0.5%。，水溫21 士0.5，pH 7. 2-7. 5，溶解氧6mg/L以上， 氨、氮含量不超過0. 02mg/L和0. 05mg/L，Ca2+，Mg2+質量濃度范圍為325 330 mg/L, 1160 1165 mg/L。
得到的受精卵立即轉運到特制的50L圓形錐底的孵化桶中進行孵化。少量曝氣， 保證溶解氧充足，并形成微水流能帶動卵粒浮動。孵化密度600-800粒/L。從底部虹吸換水，每四小時換一半水體，36-3 成功孵出魚苗。
實施例4河鰻人工繁殖方法每年11月中下旬將收集的降海河鰻親本放入搭有半邊遮陽布大棚的水泥池中(10mX3mXl. 2m)，馴養7天適應人工環境后，引入沉淀過濾的天然海水(17%。)，用人工海鹽調配，使池水鹽度逐漸上升到20%。，之后每半個月為一周期，鹽度上調3-4%。，直到池水鹽度上升到30-35%。。池底遮陽網下加瓦片、PVR管等覆蓋物，白天時魚體躲于覆蓋物中， 晚上會在沒有遮陽網下的區域活動，達到白天避光，晚上見月光的效果。其間水體鹽度 17-30%。，水溫16°C-M°C，pH 7. 5-8. 2，溶解氧4_15mg/L，投放密度為50尾/池，雌雄分開。
人工親本網控制，稱量魚體體重，親魚背部肌肉注射CPE (0. 5mg/500g)+HCG(150IU/500g)，每周注射一次，雄魚在雌魚注射兩周后開始，劑量減半。 雌鰻在注射5-7針后，水溫達到20士0. 5°C時，停止注射。此時雄魚繼續注射催熟針，每次注射后第二天按壓腹部檢查生殖孔及收集精子。
2-3周后，已經開始發育的雌鰻利用自身的生殖調控，達到卵巢發育最后的水和作用階段。根據雌鰻的生殖孔狀態(突起并少許紅腫)，腹圍變化程度(適量變大但不膨大)，挑選魚體，雌鰻在第一天上午注射最后一針催熟針，24h后注射催產針OHP (5mg/500g · Bff)混合HCG(150IU/500g · Bff)。并挑選已經可以產精的雄鰻，注射一針CPE (0. 5mg/500g)+HCG(150IU/500g)。催產后投放入池，密度12尾/池，雌雄比例1 :3。在翌日凌晨3-4點，觀察水體表面追逐的雌雄鰻鱺。在雌雄鰻鱺完成自然交配后用100目紗絹收集受精卵。其中長時間在水體表面游動的未產卵雌鰻，捕撈后進行半干法人工授精。
得到的受精卵立即轉運到特制的50L圓形錐底的孵化桶中進行孵化。嚴格控制鹽度33士0.5 %。，水溫21 士0.5，pH 7. 2-7. 5，溶解氧6mg/L以上，氨、氮含量不超過0. 02mg/L 和 0. 05mg/L，Ca2+，Mg2+質量濃度范圍為 325 330 mg/L, 1160 1165 mg/L。少量曝氣， 保證溶解氧充足，并形成微水流能帶動卵粒浮動。孵化密度600-800粒/L。從底部虹吸換水，每四小時換一半水體，36-3 成功孵出魚苗。
2011年6月4日，人工授精獲得受精卵55萬粒，受精率33%，6月5日孵出魚苗11 萬尾；2011年6月12日，自然產卵獲得受精卵90萬粒，受精率96. 4%，獲得河鰻初孵魚苗 80萬尾。
本發明的突出特點是在人工催熟河鰻條件下，通過適應性馴養，鹽度馴化，人工水質的調控管理，防止麻醉劑及操作損傷，降低激素注射劑量，雌鰻在后期依靠自身已經調動的生殖機制達到卵巢發育的最后階段；通過人工催產，大量河鰻能自然交配產卵；優化人工授精前雌鰻挑選程序，利用已經具有產卵行為的雌鰻，能有計劃有把握的完成人工授精。 嚴格控制孵化環境因子，能得到大量初孵幼苗。其中催熟率95%以上，催產率達到80%以上， 人工授精受精率達到70%，孵化率80% ；自然產卵受精率達到96. 5%，孵化率90%。提高了人工繁殖河鰻得到優質受精卵和初孵魚苗的水平。
以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員，在不脫離本發明方法的前提下，還可以做出若干改進和補充，這些改進和補充也應視為本發明的保護范圍。
權利要求
1.一種河鰻的人工繁殖方法，通過定期注射鯉魚腦垂體勻漿液和HCG，促使親魚達到性成熟，并通過自然產卵或人工授精，獲得受精卵和初孵仔魚，其特征在于，所述的人工繁殖方法包括以下三個步驟a、親魚催熟將收集的降海河鰻親本馴養7天后，引入沉淀過濾的天然海水，鹽度 17%。，用人工海鹽調配，使池水鹽度逐漸上升到20%。，之后每半個月為一周期，鹽度上調 3-4%。，直到鹽度上升到30-35%。;根據魚體體重，親魚背部肌肉注射催熟劑鯉魚腦垂體勻漿液混合HCG，每周注射一次，雄魚在雌魚注射兩周后開始，劑量減半；雌鰻在注射5-7針后， 水溫達到20士0. 5°C時，停止注射；雄魚繼續注射催熟劑，每次注射后第二天按壓腹部檢查生殖孔及收集精子；b、親魚催產雌鰻注射最后一針催熟劑，24h后注射催產劑17α -羥基孕酮混合HCG，并挑選已經可以產精的雄鰻，注射一針催熟劑；翌日凌晨，收集自然產卵的受精卵；未產卵雌鰻，進行半干法人工授精；C、受精卵孵化得到的受精卵立即轉運到孵化桶中進行孵化；曝氣，保證溶解氧充足， 并形成微水流能帶動卵粒浮動；每四小時換一半水體，直至成功孵出魚苗。
2.根據權利要求1所述的人工繁殖方法，其特征在于，所述的催熟劑為0.5mg/500g 體重的鯉魚腦垂體勻漿液混合150IU/500g 體重的HCG，催產劑為5mg/500g 體重的17 α -羥基孕酮混合150IU/500g ·體重的HCG。
3.根據權利要求1所述的人工繁殖方法，其特征在于，所述的步驟a中環境因子為鹽度17-30%。，水溫16°C -24°C, pH 7. 5-8. 2，溶解氧4_15mg/L，投放密度為50尾/池，雌雄分開。
4.根據權利要求1所述的人工繁殖方法，其特征在于，所述的步驟b環境因子為鹽度 30-35%。，水溫19. 5-22. 5°C, pH 7. 0-8. 0，溶解氧5_15mg/L，投放密度12尾/池，雌雄比例 1 :3。
5.根據權利要求1所述的人工繁殖方法，其特征在于，所述的步驟c中環境因子為鹽度 33士0. 5%。，水溫21 士0. 5，pH 7. 2-7. 5，溶解氧6mg/L以上，氨、氮含量分別不超過0. 02mg/ L 和 0. 05mg/L, Ca2+，Mg2+ 質量濃度范圍分別為 325-330 mg/L, 1160-1165 mg/L。
6.根據權利要求1所述的人工繁殖方法，其特征在于，所述的孵化密度為600-800粒/L0
7.根據權利要求1所述的人工繁殖方法，其特征在于，所述的步驟a中將收集的降海河鰻親本放入搭有遮陽布大棚的池中，池底遮陽網下加覆蓋物。
全文摘要
本發明涉及一種河鰻人工繁殖方法，包括a、親魚催熟將收集的降海河鰻親魚馴養7天后，逐步提高水體鹽度，并對親魚進行背部肌肉注射催熟劑鯉魚腦垂體勻漿液及HCG；b、親魚催產雌鰻注射催產針17α-羥基孕酮和HCG，可以產精的雄鰻注射CPE混合HCG；翌日收集自然產卵的受精卵；未產卵雌鰻，進行半干法人工授精；c、受精卵孵化受精卵立即轉運到特制的孵化桶中進行孵化；少量曝氣；每四小時換一半水體，直至成功孵出魚苗。本發明優點在于能夠防止麻醉劑及操作損傷，降低激素注射劑量；通過人工催產，大量河鰻能自然交配產卵；能有計劃有把握的完成人工授精；提高了人工繁殖河鰻得到優質受精卵和初孵魚苗的水平。
文檔編號A01K61/00GK102511424SQ201110437068
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月23日 優先權日2011年12月23日
發明者劉利平, 吳嘉敏, 王磊, 蔣天寶, 趙長春, 陳文銀 申請人:上海海洋大學