專利名稱：薄殼山核桃組培芽微型嫁接方法
技術領域：
本發明涉及一種以薄殼山核桃組培的不定芽嫁接至薄殼山核桃一年生實生苗新枝的微型嫁接方法。
背景技術：
薄殼山核桃[Carya illinoinensis (ffangehn. )K. Koch.]又名美國山核桃、長山核桃，為胡桃科山核桃屬落葉喬木，原產美 國南部和墨西哥北部，是世界上著名的油料干果樹種之一，同時也是果、木兼用的優良經濟樹種，能適應較大范圍的土壤酸堿度，在自然環境下，薄殼山核桃靠種子繁殖。薄殼山核桃干果可加工成各種特色風味食品、保健品，其種仁含油率高達70% 72%，富含不飽和脂肪酸，含粗蛋白7. 8% 9. 6%和含K、Ca、Mg、Na等人體所必須的礦質元素。薄殼山核桃木質堅硬、紋理美、抗腐蝕，在軍工、船舶和建筑業用途廣泛，是我國一種十分優良的經濟樹種。我國引種栽培薄殼山核桃已有上百年歷史，浙江省于19世紀60年代開始引種。薄殼山核桃作為重要的南方特色干果，是經濟效益最好、最受山區農民歡迎的樹種之一，更是適合石灰巖山地栽培的優良生態經濟樹種，已經成為浙江、安徽、云南、福建、湖南、江西等我國南方亞熱帶地區適宜推廣省份重要的山地經濟樹種。目前，薄殼山核桃已成為我國南方山區造林的首選經濟樹種之一。然而，由于早期大都通過種子引進，現有投產林大都為實生樹，且栽培零星分散，品種良莠不齊，隨著南方干果產業結構調整和經濟林的蓬勃發展，目前薄殼山核桃品種退化分離明顯、結果遲，產量低，品質差，加上樹體高大，采摘不方便，作為果品生產，推廣困難。雖然近年來云南、江蘇、浙江、湖南、廣西、四川、江西、甘肅、河南、貴州、河北等地區較大面積推廣種植，但薄殼山核桃在栽培中由于優質苗木數量極少，以致造林成活率低、造林不成林、生長緩慢、投產周期長、單位面積產量低、低產低效林面積大、優良接穗來源少、苗木繁殖系數低及優質壯苗培育技術缺乏等問題日益突出，嚴重制約了薄殼山核桃產業的快速健康發展。林學界，眾多學者對薄殼山核桃的繁殖作了許多新的探索和嘗試，如李俊南等先生的薄殼山核桃單芽腹接技術、常君等的薄殼山核桃根段育苗技術，楊國榮等的薄殼山核桃以苗繁苗快速擴繁技術等，各對社會作出了有益的貢獻。經檢索，至今未發現通過薄殼山核桃優株一年生枝條經試管培育不定芽經微型嫁接，繁殖生根育成植株的方法的相關報道。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種以薄殼山核桃一年生枝條為外植體，誘導形成不定芽、不定芽伸長培養，并將伸長的不定芽嫁接至薄殼山核桃一年生實生苗新技的微型嫁接方法。本發明的技術問題通過如下技術方案解決本薄殼山核桃組培芽微型嫁接方法按如下步驟進行
一、接穗組培芽誘導與增殖(I)外植體采集與消毒選取健壯的薄殼山核桃優株I年生健壯新枝，依次進行自來水沖洗2h，超凈工作臺上用75%乙醇滅菌3min，無菌水沖洗3 4次，濃度為0. 525%的NaClO滅菌20min并抽真空，無菌水沖洗5次后，用滅菌濾紙吸干表面水分，切下帶頂芽和腋芽長度為I 1. 5cm的枝段待用；(2)不定芽誘導培養基的配制WPM附加蔗糖20 30g/L、瓊脂A 6. 5 8. 5g/L、6-BA即6-氨基腺嘌呤0. 5 2. Omg/L, IBA即吲哚丁酸0.1 0. 5mg/L，pH值5. 7 ;(3)不定芽誘導將初代培養后胚根發育良好的幼芽接入前述(2)的不定芽誘導培養基中，經過21d的誘導，獲得不定芽；用微電腦時控開關控制培養室每日光照時間，每日光暗周期為光16h/暗8h，光照強度為40 50iimol hTY1，培養溫度為25±2°C ；
(4)不定芽增殖培養基的配制WPM附加蔗糖20 30g/L、瓊脂A 6. 5 8. 5g/L、6-BA即6-氨基腺嘌呤1. 0 3. Omg/L, IBA即吲哚丁酸0. 05 0. lmg/L, pH值5. 7 ;(5)不定芽增殖培養將獲得的不定芽在前述(4)的不定芽增殖培養基上進行增殖培養，21天繼代I次，共繼代3次，增殖系數為5 8 ;光照培養，光暗周期為光16h/暗8h，光照強度為40 50iimol m—Y1，培養溫度為25±2°C ；二、薄殼山核桃砧木培育選擇當年充分成熟的薄殼山核桃作站木種子，在大棚(6m 30m)中設置苗床,苗床長度與寬度分別為Im和10m，苗床底部按每平方米IOOW的標準布地熱線，溫度由控溫議控制；用1000mg/L濃度的赤霉素浸泡種子2 3天，撈出后直接將種子擺放在苗床上，薄殼山核桃縫合線與土表垂直，一般每平方米擺放700 800粒，于薄殼山核桃上覆沙土 8 10cm，澆透水再覆地膜，控制溫度在25±2°C ；三、組培芽嫁接于大棚中從苗床取出18 20cm高的種子苗做砧木，在子葉著生處以上2 3cm處剪斷砧苗，沿髓心稍偏縱切，深Icm ;剪下3. 0 3. 5cm長的健壯組培芽，插入砧木的縱切口，用微膜(0. 5cm * 10cm)包扎，并移栽植于育苗容器中，在育苗容器外罩透明塑料袋保溫保濕；一周后，逐漸剪開透明塑料袋的袋角，直至全部剪開并去除套袋；四、管理微型嫁接后，接穗和砧木愈合期大棚溫度控制在25±2°C，濕度控制在85%±2%，避免陽光直射，直至接穗和砧木完全愈合，嫁接苗成活。本發明的有益效果是應用薄殼山核桃組培不定芽誘導并進行組培芽嫁接，能使新生植株保持母本的優良性狀，有效地提高薄殼山核桃優株的繁殖系數，為薄殼山核桃良種快繁打下良好的基礎。與播種繁殖相比，優株不定芽誘導能保持母本優良的生物學特性，優株不定芽嫁接能有效避免不定芽瓶內不易生根的難題，育苗周期短。與扦插繁殖或常規嫁接繁殖相比，在一個為期6個月的生長周期內組織培養法的繁殖系數為扦插繁殖或常規嫁接繁殖的50 60倍。
具體實施例方式本發明下面結合實施例作進一步詳述本薄殼山核桃組培芽微型嫁接方法的接穗不定芽誘導與增殖培養基中，選用基本培養基是WPM培養基(其成分是公知公用的)，不細述，這是經過用MS、1/2MS、WPM、DKff四種基本培養基各自均附加蔗糖20 30g/L、瓊脂A
6.5 8. 5g/L、6_BA 即 6-氛基腺嘿呤 0. 5 3. Omg/L, IBA 即H引噪丁酸 0. 05 0. 5mg/L, pH值5. 7，進行試驗，每組重復3次，每種基本培養基有20個外植體的對比試驗得出的、因WPM培養基中處理21天后，不定芽發育最好，誘導的不定芽數量最多，質量最好。培育站木用1000mg/L濃度的赤霉素浸泡種子2-3天,薄殼山核桃縫合線與土表垂直，一般每平方米擺放700 800粒，于薄殼山核桃上覆沙土 8 10cm，澆透水再覆地膜，控制溫度在25±2°C ;從苗床取出適合種子苗做砧木，在子葉柄以上2 3cm處剪斷砧苗，沿髓心稍偏縱切，深約Icm ;經處理的組培芽削成楔形，插入砧木的縱切口，用微膜包扎，栽植于育苗容器，外罩透明塑料袋保濕，適時剪角去袋，最后做好接穗和砧木愈合期的大棚管理工作。總之，本發明所公開的培養基各原料的配比值也可分別采用本發明最 佳方案定值的接近值取代。下面給出的是本發明的最佳實施例。本薄殼山核桃組培芽微型嫁接方法，包括不同誘導時期的兩種培養基，兩種培養基的原料及其附加量分別是(I)不定芽誘導培養基WPM附加蔗糖25g/L、瓊脂A7. 5g/L、6_BA即6_氨基腺嘌呤 2. Omg/L, IBA 即吲哚丁酸 0. 3mg/L，pH 值 5. 7 ;(2)不定芽增殖培養基WPM附加蔗糖25g/L、瓊脂A7. 5g/L，6-BA即6_氨基腺嘌呤1. 0mg/L, IBA 即吲哚丁酸 0. lmg/L, pH 值為 5. 7 ；用上述培養基進行薄殼山核桃不定芽誘導及增殖方法經過下列步驟首先是外植體采集與消毒選取健壯的薄殼山核桃優株I年生健壯新枝，依次進行自來水沖洗2h，超凈工作臺上用75 %乙醇滅菌3min，無菌水沖洗3 4次，濃度為0. 525%的NaClO滅菌20min并抽真空，無菌水沖洗5次后，用滅菌濾紙吸干表面水分，切下帶頂芽和腋芽的枝段(I 1. 5cm)待用；其次是不定芽誘導將步驟(I)無菌條件下取出的幼胚接入前述的初代培養基中，培養21d,光暗周期為光16h/暗8h的條件下培養,光照強度40 50iimol nT2s'培養溫度為25±2°C ;最后是不定芽增殖將獲得的不定芽長至0. 5cm左右聞時，從莖基部切下并接種到前述的不定芽增殖培養基中培養，21天繼代I次，共繼代3次，每次增殖系數為5 8。光照培養，光暗周期為光16h/暗8h，光照強度為40 50iimol hTY1，培養溫度25±2°C。
權利要求
1.一種薄殼山核桃組培芽微型嫁接方法，其特征是按如下步驟進行一、接穗組培芽誘導與增殖；(1)外植體采集與消毒選取健壯的薄殼山核桃優株I年生健壯新枝，依次進行自來水沖洗2h，超凈工作臺上用75%乙醇滅菌3min，無菌水沖洗3 4次，濃度為O. 525%的NaClO 滅苗20min并抽真空，無菌水沖洗5次后，用滅菌濾紙吸干表面水分，切下帶頂芽和腋芽長度為I 1. 5cm的枝段待用；(2)不定芽誘導培養基的配制WPM附加蔗糖20 30g/L、瓊脂A6. 5 8. 5g/L、6_BA 即6-氨基腺嘌呤O. 5 2. Omg/L, IBA即吲哚丁酸O.1 O. 5mg/L，pH值5. 7 ;(3)不定芽誘導將初代培養后胚根發育良好的幼芽接入前述(2)的不定芽誘導培養基中，經過21d的誘導，獲得不定芽；用微電腦時控開關控制培養室每日光照時間，每日光暗周期為光16h/暗8h，光照強度為40 50μπιΟ1 HT2s-1,培養溫度為25±2°C ；(4)不定芽增殖培養基的配制WPM附加蔗糖20 30g/L、瓊脂A6. 5 8. 5g/L、6_BA 即6-氨基腺嘌呤1. O 3. Omg/L, IBA即吲哚丁酸O. 05 O. lmg/L，pH值5. 7 ;(5)不定芽增殖培養將獲得的不定芽在前述(4)的不定芽增殖培養基上進行增殖培養，21天繼代I次，共繼代3次，增殖系數為5 8 ;光照培養，光暗周期為光16h/暗8h，光照強度為40 50 μ mo I HT2s-1,培養溫度為25±2°C ；二、薄殼山核桃砧木培育選擇當年充分成熟的薄殼山核桃作砧木種子，在大棚中設置苗床，苗床長度與寬度分別為Im和10m，苗床底部按每平方米100W的標準布地熱線，溫度由控溫儀控制；用IOOOmg/ L濃度的赤霉素浸泡種子2 3天，撈出后直接將種子擺放在苗床上，薄殼山核桃縫合線與土表垂直，每平方米擺放700 800粒、于薄殼山核桃上覆沙土 8 10cm，澆透水再覆地膜， 控制溫度在25±2°C ;三、組培芽嫁接于大棚中從苗床取出18 20cm高的種子苗做砧木，在子葉著生處以上2 3cm處剪斷砧苗，沿髓心稍偏縱切，深Icm ;剪下3. O 3. 5cm長的健壯組培芽，插入砧木的縱切口， 用0. 5cm * IOcm的微膜包扎，并移栽植于育苗容器中，在育苗容器外罩透明塑料袋保濕；一周后，逐漸剪開透明塑料袋的袋角，直至全部剪開并去除套袋；四、管理嫁接后，接穗和砧木愈合期大棚溫度控制在25±2°C，濕度控制在85% ± 2 %，避免陽光直射，直至接穗和砧木完全愈合，嫁接苗成活。
全文摘要
一種薄殼山核桃組培芽微型嫁接方法，按如下四大步驟進行一是接穗組培芽的誘導與增殖，經外植體采集與消毒、不定芽誘導培養基的配制、不定芽誘導、不定芽增殖培養基的配制和不定芽增殖培養五個工作環節。二是薄殼山核桃砧木的培育，三是組培芽的嫁接，四是嫁接和愈合期的管理。用本方法培育薄殼山核桃，具有保持母本特性、結果早、抗逆性強、繁殖速率高等優點。
文檔編號A01G1/00GK103004593SQ20121053755
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月11日 優先權日2012年12月11日
發明者張啟香, 王正加, 劉力, 胡恒康, 施娟娟, 武麗萍 申請人:浙江農林大學