一株提高丹參產量及總酚酸含量的鏈格孢屬真菌的制作方法
【專利摘要】一株提高丹參產量及酚酸類成分含量的真菌，它是保藏編號為CGMCC?No.6380的鏈格孢(Alternaria?sp.)，菌株名稱：11775-42-Zl，簡稱42#。栽培丹參時在每株丹參幼苗根部分別施予固體培養的42#菌材0.5-1.5g，經與丹參幼苗共生栽培4-6月，能提高收獲期時丹參的產量和丹參總酚酸及丹酚酸A和丹酚酸B的含量。該技術方法簡單易行，無污染，用于丹參的人工種植，能有效提高藥材的產量和質量，具有良好的應用前景。
【專利說明】一株提高丹參產量及總酚酸含量的鏈格孢屬真菌
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物【技術領域】，涉及一株提高丹參產量和有效成分含量的真菌。
【背景技術】
[0002]藥用丹參為唇形科植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根莖,始載于《神農本草經》，位居上品，具有活血、涼血、清心除煩的功效，臨床上廣泛用于冠心病的治療。丹參制劑也是我國心腦血管病的基本治療藥物。因療效確切，丹參已成為我國用量大，銷售額多的中藥。
[0003]丹酚酸類成分是丹參的水溶性成分，對心、腦、肝、腎、胃等多個器官具有保護作用。丹酚酸B是其中的主要成分和活性成分，在心臟保護、抗動脈粥樣硬化、抗肝纖維化、腦保護等方面都有顯著的藥理活性，被廣泛地用于臨床。
[0004]內生真菌是指那些在其生活史的全部或某一時期生活在植物組織內，沒有引起植物組織明顯病害癥狀的真菌。研究發現，幾乎所有健康植物的組織器官內都有內生真菌的存在。內生真菌與植物共生不僅可以提高植物對高溫、干旱、鹽化、病原菌等逆境脅迫的適應能力，還可以提高藥 用植物有效成分的含量，從而提高藥材品質。內生真菌的這些作用對藥用植物資源的開發與保護，以及對藥用植物有效成分的積累等有著重要的意義。
[0005]本發明利用生物技術，從丹參中分離、篩選出能夠提高丹參總酚酸含量的內生真菌；將菌株用于丹參的栽培中，實現提高收獲期丹參產量，以及提高丹參總酚酸、丹酚酸A和丹酚酸B含量的目的。該發明對丹參資源的開發與保護、丹參中酚酸類成分的應用生產等都有著重要的意義。該技術方法操作簡單，綠色環保，具有廣泛的應用前景，目前國內外尚未見利用真菌與丹參共生栽培，提高丹參藥材產量和酚酸類成分含量的研究報道。
【發明內容】
[0006]本發明的目的在于，為丹參的人工栽培提供一株能提高丹參產量及酚酸類成分含量的菌株。菌株名稱為11775-42-Z1，以下簡稱42#，經鑒定為鏈格孢(Alternaria sp.)。該菌株2012年07月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，保藏號CGMCC N0.6380。菌株42#是一株丹參的內生真菌，經與丹參幼苗共生栽培4-6月后，與相同栽培環境下未接菌的丹參相比，能提高丹參藥材產量和酚酸類成分含量。
[0007]為了實現上述目的，本發明采取如下的技術:
[0008](1)42#的固體培養:培養基組成按重量比計算為:麥麩:10% -17%,木屑:15% -17%, KH2PO4:0.2% -0.3%, MgSO4:0.1% -0.2%, CaSO4:0.07% -0.10%，葡萄糖:
1.40% -2.20%，玉米芯:2.00% -4.00%，玉米碎顆粒:3.00% -5.00%，其余成分為水。稱取各種組分，混勻后分裝，122°C滅菌140min，放涼備用。取在PDA培養基上培養的42#菌片，放置在固體培養基的中部，25°C暗室培養至42#菌長至瓶中培養基的2/3處即可使用。
[0009](2)菌苗共生栽培:春季栽培丹參時,取出芽后20-30天的丹參苗,在每株丹參幼苗根部分別施予固體培養的42#菌材0.5-1.5g，用土覆蓋后栽于溫室內或大田里，常規方法進行種植管理。
[0010](3)菌株42#經與丹參幼苗共生栽培4-6月后,與相同栽培環境下未接菌的丹參相t匕，丹參干重，以及總酚酸、丹酚酸A和丹酚酸B的含量均有不同程度的提高。
【具體實施方式】
[0011]實施例1
[0012]42# 的固體培養:麥麩:100g，木屑:150g, KH2PO4:2g, MgSO4:lg, CaSO4:0.7g，葡萄糖:14g,玉米芯:20g,玉米碎顆粒:30g,加水混合均勻，分裝于瓶內，122°C滅菌140min,放涼備用。取在PDA培養基上培養的42#菌片，放置在固體培養基的中部，25°C暗室培養至42#菌長至瓶中培養基的2/3處即可使用。
[0013]菌苗共生栽培:用溫室盆栽的方法，在春季栽培丹參時，取出芽后20-30天的丹參苗，在每株丹參幼苗根部分別施予固體培養的42#菌材0.5g，每盆I株，用土覆蓋后盆栽于溫室里，常規方法進行種植管理，6個月后收獲。
[0014]稱量干重,測總酹酸及丹酹酸A和丹酹酸B的含量。與42#菌共生栽培的丹參，每株根干重平均為18g，根部總酚酸含量平均為8.1 %，丹酚酸B含量平均為3.0 %，丹酚酸A含量平均為0.018%。未接菌的丹參，每株根干重平均為10g，根部總酚酸含量平均為3.6%,丹酚酸B含量平均為2.5%，丹酚酸A含量平均為0.01%。
[0015]實施例2
[0016]42# 的固體培養:麥麩:170g，木屑:170g, KH2PO4:3g,MgSO4:2g, CaSO4:lg，葡萄糖:22g,玉米芯:40g,玉米碎顆粒:50g,加水混合均勻，分裝于瓶內，122°C滅菌140min,放涼備用。取在PDA培養基上培養的42#菌片，放置在固體培養基的中部，25°C暗室培養至42#菌長至瓶中培養基的2/3處即可使用。
[0017]菌苗共生栽培:用田間栽培的方法，春季栽培丹參時，取出芽后20-30天的丹參種子苗，在每株丹參幼苗根部分別施予固體培養的42#菌材1.0g，用土覆蓋后栽于田內，常規方法進行田間種植管理，4個月后收獲。
[0018]測總酚酸及丹酚酸A和丹酚酸B的含量。與42#菌共生栽培的丹參，根部總酚酸含量平均為12.4%，丹酚酸B含量平均為5.8%，丹酚酸A含量平均為0.014%。未接菌的丹參，根部總酚酸含量平均為10.5 %，丹酚酸B含量平均為2.7 %，丹酚酸A含量平均為0.01%。
[0019]實施例3
[0020]42# 的固體培養:麥麩:135g,木屑:160g, KH2PO4:2.5g，MgSO4:1.5g，CaSO4:
0.85g，葡萄糖:18g，玉米芯:30g，玉米碎顆粒:40g，加水混合均勻，分裝于瓶內，122°C滅菌140min，放涼備用。取在PDA培養基上培養的42#菌片，放置在固體培養基的中部，25°C暗室培養至42#菌長至瓶中培養基的2/3處即可使用。 [0021]菌苗共生栽培:用田間栽培的方法，春季栽培丹參時，取出芽后20-30天的丹參種子苗，在每株丹參幼苗根部分別施予固體培養的42#菌材1.5g，用土覆蓋后栽于田內，常規方法進行田間種植管理，6個月后收獲。
[0022]稱量干重，測總酚酸及丹酚酸A和丹酚酸B的含量。與42#菌共生栽培的丹參，每株根干重平均為20g，根部總酚酸含量平均為8.9%，丹酚酸B含量平均為3.6%，丹酚酸A含量平均為0.019%。未接菌的丹參，每株根干重平均為15g，根部總酚酸含量平均為
4.3%,丹酚酸B含量平均 為2.4%，丹酚酸A含量平均為0.015%。
【權利要求】
1.提高丹參產量及酚酸類成分含量的一株真菌，它是保藏編號為CGMCCN0.6380的鏈格孢(Alternaria sp.)，菌株名稱:11775_42_Z1，簡稱42# ;該菌株可在栽培丹參時使用。
2.如權利要求1所述的真菌，其固體培養的培養基組分按重量計為:麥麩:10 % -17 %，木屑:15 % -17 %，KH2PO4:0.2 % -0.3 %, MgSO4:0.1 % -0.2 %, CaSO4:0.07 % -0.10 %，葡萄糖:L40 % -2.20 %，玉米芯:2.00 % -4.00 %，玉米碎顆粒:3.00% -5.00%，其余成分為水。
3.如權利要求1所述的真菌，其使用方法為:栽培丹參時，取出芽后20-30天的丹參苗，在每株丹參幼苗根部分別施予固體培養的42#菌材0.5-1.5g，用土覆蓋，栽于溫室內或大田里，定期施水 ，常規方法進行種植管理，4-6個月后收獲。
【文檔編號】A01P21/00GK103992951SQ201310050774
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2013年2月16日 優先權日:2013年2月16日
【發明者】郭順星, 唐坤, 王春蘭, 李標, 陳曉梅 申請人:中國醫學科學院藥用植物研究所