專利名稱：一種角膜中期保存液及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種角膜中期保存液及其制備方法。
背景技術：
角膜保存是眼庫的重要技術之一，分為活性和非活性保存兩種，活性保存根據角膜內皮細胞活性的保存時間分為短期、中期、長期3種保存。短期保存是將全眼球消毒無菌處理后濕房4°C保存24小時。中期保存一般采用角膜片組織營養液4°C保存，目前世界范圍內最常使用Dexsol、0ptisol和Optisol-GS,保存時間可達14天。長期保存方法有器官培養法和超低溫冷凍保存法。1965年，Capella和Kaufman用超低溫保存法有效地延長了角膜保存的時間最長至I年，但由于設備復雜，操作麻煩，故難以推廣。器官培養法保存角膜用于臨床角膜移植一般在保存4周內、最長保存至7周。但由于方法復雜，所需設備昂貴，一般眼庫和基層醫院難于開展此項工作。鑒于短期保存的保存時間過于短暫以及長期保存法的不易推廣應用，角膜保存液研制的熱點集中于中期保存液。目前國際上最常用的Dexsol和Optisol雖然在保持角膜內皮細胞活性方面功能顯著，但價格昂貴，不適合我國國情。根據我國角膜供體材料來源嚴重匱乏，又缺少足夠數量的正規眼庫，因此，研制理想的新型角膜中期保存液以最大限度的利用有限的供體材料是亟待解決的研究課題。
發明內容
本發明的目的是提供一種角膜中期保存液及其制備方法。本發明所提供的一種角膜中期保存液，以IOOOmL計，所述中期保存液的組成如下:低限量基礎培養基4 5克，組織培養基199 4 5克，低分子右旋糖酐10 20克，硫酸軟骨素20 30克，丙酮酸鈉100 150毫克，HEPES 3 4克，小牛血清20 40暈升，非必需氨基酸10 20暈升，硫酸慶大霉素I 2暈升,堿性成纖維細胞生長因子100 200微升,和余量的雙蒸水。以IOOOmL計，所述中期保存液的組成具體可為:
低限量基礎培養基4克
組織培養基 1994克低分子右旋糖酐10克
硫酸軟骨素20克
丙酮酸鈉100毫克
Hepes3 克
小牛血清20毫升
非必需氨基酸10毫升
硫酸慶大霉素I毫升
堿性成纖維細胞生長因子100微升
雙蒸水約950毫升；或者
低限量基礎培養基5克
組織培養基1995克
低分子右旋糖酐20克
硫酸軟骨素30克
丙酮酸鈉150毫克
HEPES4克
小牛血清40毫升
非必需氨基酸20毫升
硫酸慶大霉素2毫升
堿性成纖維細胞生長因子200微升
雙蒸水約950毫升。上述的角膜中期保存液中，所述非必需氨基酸具體可為美國生命技術公司提供的
商品目錄號為11140-050的氨基酸，其組成和配方如表I中所示。表I非必需氨基酸的組成和配方
權利要求
1.一種角膜中期保存液，其特征在于:以IOOOmL計，所述中期保存液的組成如下: 低限量基礎培養基4 5克，組織培養基199 4 5克， 低分子右旋糖酐10 20克，硫酸軟骨素20 30克， 丙酮酸鈉100 150毫克，HEPES 3 4克， 小牛血清20 40暈升，非必需氨基酸10 20暈升， 硫酸慶大霉素I 2暈升,堿性成纖維細胞生長因子100 200微升,和余量的雙蒸水。
2.根據權利要求1所述的中期保存液，其特征在于:所述中期保存液的PH值為7.2 7.6，滲透壓為 330 390m0sm/Kg。
3.權利要求1或2所述中期保存液的制備方法，包括如下步驟: (1)將所述低限量基礎培養基、組織培養基199、低分子右旋糖酐、硫酸軟骨素、丙酮酸鈉和HEPES溶于所述雙蒸水中，經除菌后得到基礎液； (2)將所述小牛血清、非必需氨基酸、硫酸慶大霉素和堿性成纖維細胞生長因子加入至所述基礎液中得到全液 ，即為所述角膜中期保存液。
全文摘要
本發明公開了一種角膜中期保存液及其制備方法。以1000mL計，所述中期保存液的組成如下低限量基礎培養基4～5克，組織培養基1994～5克，低分子右旋糖酐10～20克，硫酸軟骨素20～30克，丙酮酸鈉100～150毫克，HEPES3～4克，小牛血清20～40毫升，非必需氨基酸10～20毫升，硫酸慶大霉素1～2毫升，堿性成纖維細胞生長因子100～200微升，和余量的雙蒸水。本發明具有促進角膜內皮細胞損傷的修復，細胞形態的重建，調節細胞膜表面各種整合素的表達，促進細胞的黏附生長，刺激內皮細胞的增殖等作用，對中期保存角膜有減少細胞凋亡和維持細胞形態及活性的作用。
文檔編號A01N1/02GK103190392SQ20131010408
公開日2013年7月10日 申請日期2013年3月28日 優先權日2013年3月28日
發明者靳瑛, 洪晶, 馬志中 申請人:北京大學第三醫院