一種組織培養香桃木的方法
【專利摘要】本發明涉及一種組織培養香桃木的方法，取香桃木春季萌發的幼條去枝葉，依次接種在腋芽誘導培養基、增殖培養基、不定芽壯苗培養基、生根培養基上，經過芽的分化和增殖、不定芽壯苗培養、生根培養、煉苗與移栽步驟組織培養獲得香桃木植株。與現有技術相比，本發明在提高香桃木的繁殖速度和苗的整齊度，采用了不同營養組成成分的培養基，進一步提高了香桃木的增殖系數。
【專利說明】一種組織培養香桃木的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種植物的組織培養方法，尤其是涉及一種組織培養香桃木的方法。
【背景技術】
[0002]香桃木為桃金娘科香桃木屬植物，原產地中海沿岸，常綠灌木，葉革質；花白色，雄蕊多數，較長，花型優美，6-7月；植株自然成型，可修剪造型，枝葉茂密，冬季常綠，色彩鮮亮，觀賞效果好，初夏觀花，生長季觀葉，植株耐修剪，且病蟲害少，可用做彩籬或片植；葉揉碎后有香味，可用做芳香保健園配置。通過組培技術，可提高繁殖速度和苗的整齊度，但是目前來說，能夠很好地進行香桃木組織培養方法的報道尚未見。
[0003]申請號為200910049967.8的中國專利公開了一種花葉香桃木的組織培養方法，包括無菌材料的獲取、芽分化和增殖、壯苗培養、生根培養、煉苗移栽等步驟，通過該方法可以提高花葉香桃木的繁殖速度和苗的整齊度，減少變異，但是，采用該種方法組織培養得到的花葉香桃木，增殖系數沒有有效提高，減少了該種植物的使用場合。
【發明內容】
[0004]本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種提高了增殖系數的組織培養香桃木的方法。
[0005]本發明的目的可以通過以下技術方案來實現:
[0006]一種組織培養香桃木的方法，該方法包括以下步驟:
[0007](I)取香桃木春季萌發的幼條去枝葉，沖洗30分鐘后用75wt%的乙醇浸泡30s，lwt%。升萊浸泡15min,再利用無菌水沖洗5_6次,吸干表面水份,切成Icm長的帶腋芽的節段，接種于腋芽誘導培養基上；
[0008](2)帶腋芽的節段接種于腋芽誘導培養基上培養I個月，腋芽長至3-4cm，切下小芽放入增殖培養基中進行增殖培養；
[0009](3)腋芽經增殖培養誘導出叢生芽，每叢有2-3株伸長，其余處于矮化狀態，將其分成小叢后，轉至不定芽壯苗培養基中培養，不定芽20天后長至2-3cm ；
[0010](4)將不定芽壯苗培養基中植株轉入到生根培養基中誘導生根30天，根系長至lcm，選擇根系發達生長健壯的無菌苗在室內開瓶煉苗7天，然后取出后洗凈根部瓊脂，在大棚中煉苗馴化50天后獲得的香桃木即可移栽或上盆；
[0011]其中，
[0012]腋芽誘導培養基的組成成分包括MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L、MS+6-BA4mg/L+NAA0.4mg/L 或 MS+6_BA5mg/L+NAA0.5mg/L ；
[0013]增殖培養基的組成成分包括MS+6-BAlmg/L+NAA0.lmg/L、MS+6-BA2g/L+NAA0.2mg/L 或 MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L ；
[0014]不定芽壯苗培養基的組成成分包括MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L、MS+6-BAlmg/L+NAA0.lmg/L 或 MS+6_BA2mg/L+NAA0.2mg/L ；
[0015]生根培養基的組成成分包括MS+NAA0.lmg/L、MS+NAA0.2mg/L 或 MS+NAA0.3mg/L。
[0016]作為優選的實施方式，腋芽誘導培養基的組成成分優選MS+6-BA4mg/L+NAA0.4mg/L0
[0017]作為優選的實施方式，增殖培養基的組成成分優選MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
[0018]作為優選的實施方式，不定芽壯苗培養基的組成成分優選MS+6-BAlmg/L+NAA0.lmg/Lο
[0019]作為優選的實施方式，生根培養基的組成成分優選MS+NAA0.2mg/L。
[0020]另外，上述培養基的pH值為5.8，培養基的基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L。
[0021]步驟⑴-⑷中進行組織培養的溫度為24_26°C，組織培養時的光照強度為80 μ mol/m2.S。
[0022]與現有技術相比，本發明在提高香桃木的繁殖速度和苗的整齊度，采用了不同營養組成成分的培養基，進一步提高了香桃木的增殖系數。
【具體實施方式】
[0023]下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明。
[0024]實施例1
[0025]組織培養香桃木的方法，進行組織培養的溫度為24°C，組織培養時的光照強度為80 μ mol/m2.S。該方法包括以下步驟:
[0026](I)春季取萌發的幼嫩的枝條，去枝葉后用自來水沖洗30分鐘后于超凈工班工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s, 1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5-6次,無菌濾紙吸干表面水份，切成Icm長的帶腋芽的節段，接種于腋芽誘導培養基上，采用的培養基的營養組成成分為MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L，基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH值為5.8 ；
[0027](2)芽段接種于腋芽誘導培養基上2周后，腋芽部位開始膨大，出現綠色突起，3周后可見明顯的芽分生組織，培養I個月，腋芽可以長到3-4cm長，切下小芽放入增殖培養基中進行增殖培養，本實施例中采用的增殖培養的營養組成成分為MS+6-BAlmg/L+NAA0.1mg/L，基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH值為5.8，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；
[0028](3)在增殖培養基上，誘導出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，分成小叢后，轉至不定芽壯苗培養基進行壯芽培養，不定芽壯苗培養基的的營養組成成分為MS+6-BA2g/L+NAA0.2mg/L,基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH值為5.8，不定芽迅速伸長，20天后可以長至2-3cm ；
[0029](4)取2_3cm的小植株，轉接入生根培養基中誘導生根，本實施例采用的生根培養基的營養組成成分為MS+NAA0.lmg/L，基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH值為5.8，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm，生根率為90% ；
[0030](5)生根培養30天根系長至Icm左右時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在大棚中煉苗馴化50天后，即可移栽或上盆，移栽成活率為80 %，增殖系數跟普通的香桃木相比，能夠提高30 %，每棵植株上的發芽數平均有30 %的提聞。
[0031]實施例2
[0032]組織培養香桃木的方法，進行組織培養的溫度為25°C，組織培養時的光照強度為80 μ mol/m2.S0該方法包括以下步驟:
[0033](I)春季取萌發的幼嫩的枝條，去枝葉后用自來水沖洗30分鐘后于超凈工班工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s, 1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5-6次,無菌濾紙吸干表面水份，切成Icm長的帶腋芽的節段，接種于腋芽誘導培養基上，采用的培養基的營養組成成分為MS+6-BA4mg/L+NAA0.4mg/L，基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH值為5.8 ；
[0034](2)芽段接種于腋芽誘導培養基上2周后，腋芽部位開始膨大，出現綠色突起，3周后可見明顯的芽分生組織，培養I個月，腋芽可以長到3-4cm長，切下小芽放入增殖培養基中進行增殖培養，本實施例中采用的增殖培養的營養組成成分為MS+6-BAlmg/L+NAA0.1mg/L，基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH值為5.8，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；
[0035](3)在增殖培養基上，誘導出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，分成小叢后，轉至不定芽壯苗培養基進行壯芽培養，不定芽壯苗培養基的的營養組成成分為MS+6-BAlmg/L+NAA0.lmg/L,基本成分還包括鹿糖30g/L、瓊脂6g/L,pH值為5.8,不定芽迅速伸長，20天后可以長至2-3cm ；
[0036](4)取2_3cm的小植株，轉接入生根培養基中誘導生根，本實施例采用的生根培養基的營養組成成分為MS+NAA0.2mg/L，基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH值為5.8，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm，生根率為90% ；
[0037](5)生根培養30天根系長至Icm左右時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在大棚中煉苗馴化50天后，即可移栽或上盆，移栽成活率為80 %，增殖系數跟普通的香桃木相比，能夠提高50 %，每棵植株上的發芽數平均有50 %的提聞。
[0038]實施例3
[0039]組織培養香桃木的方法，進行組織培養的溫度為26°C，組織培養時的光照強度為80 μ mol/m2.S。該方法包括以下步驟:
[0040](I)春季取萌發的幼嫩的枝條，去枝葉后用自來水沖洗30分鐘后于超凈工班工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s, 1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5-6次,無菌濾紙吸干表面水份，切成Icm長的帶腋芽的節段，接種于腋芽誘導培養基上，采用的培養基的營養組成成分為MS+6-BA5mg/L+NAA0.5mg/L，基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH值為5.8 ；
[0041](2)芽段接種于腋芽誘導培養基上2周后，腋芽部位開始膨大，出現綠色突起，3周后可見明顯的芽分生組織，培養I個月，腋芽可以長到3-4cm長，切下小芽放入增殖培養基中進行增殖培養，本實施例中采用的增殖培養的營養組成成分為MS+6-BAlmg/L+NAA0.1mg/L,基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH值為5.8，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現象，在該培養中生長發育良好；
[0042](3)在增殖培養基上，誘導出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態，分成小叢后，轉至不定芽壯苗培養基進行壯芽培養，不定芽壯苗培養基的的營養組成成分為MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L，基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH值為5.8，不定芽迅速伸長，20天后可以長至2-3cm ；
[0043](4)取2_3cm的小植株，轉接入生根培養基中誘導生根，本實施例采用的生根培養基的營養組成成分為MS+NAA0.3mg/L，基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH值為5.8，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm，生根率為90% ；
[0044](5)生根培養30天根系長至Icm左右時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在大棚中煉苗馴化50天后，即可移栽或上盆，移栽成活率為80 %，增殖系數跟普通的香桃木相比，能夠提高35 %，每棵植株上的發芽數平均有35%的提
【權利要求】
1.一種組織培養香桃木的方法，該方法包括以下步驟: (1)取香桃木春季萌發的幼條去枝葉，沖洗30分鐘后用75wt%的乙醇浸泡30s，Iwt%0升汞浸泡15min，再利用無菌水沖洗5-6次，吸干表面水份，切成Icm長的帶腋芽的節段，接種于腋芽誘導培養基上； (2)帶腋芽的節段接種于腋芽誘導培養基上培養I個月，腋芽長至3-4cm，切下小芽放入增殖培養基中進行增殖培養； (3)腋芽經增殖培養誘導出叢生芽，每叢有2-3株伸長，其余處于矮化狀態，將其分成小叢后，轉至不定芽壯苗培養基中培養，不定芽20天后長至2-3cm ； (4)將不定芽壯苗培養基中植株轉入到生根培養基中誘導生根30天，根系長至1cm，選擇根系發達生長健壯的無菌苗在室內開瓶煉苗7天，然后取出后洗凈根部瓊脂，在大棚中煉苗馴化50天后獲得的香桃木即可移栽或上盆； 其特征在于， 所述的腋芽誘導培養基的組成成分包括MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L、MS+6-BA4mg/L+NAA0.4mg/L 或 MS+6_BA5mg/L+NAA0.5mg/L ； 所述的增殖培養基的組成成分包括MS+6-BAlmg/L+NAA0.lmg/L、MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L 或 MS+6_BA3mg/L+NAA0.3mg/L ； 所述的不定芽壯苗培養基的組成成分包括MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L、MS+6_BAlmg/L+NAA0.lmg/L 或 MS+6_BA2mg/L+NAA0.2mg/L ； 所述的生根培養基的組成成分包括MS+NAA0.lmg/L、MS+NAA0.2mg/L或MS+NAA0.3mg/L0
2.根據權利要求1所述的一種組織培養香桃木的方法，其特征在于，所述的腋芽誘導培養基的組成成分優選MS+6-BA4mg/L+NAA0.4mg/L。
3.根據權利要求1所述的一種組織培養香桃木的方法，其特征在于，所述的增殖培養基的組成成分優選MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
4.根據權利要求1所述的一種組織培養香桃木的方法，其特征在于，所述的不定芽壯苗培養基的組成成分優選MS+6-BAlmg/L+NAA0.lmg/L。
5.根據權利要求1所述的一種組織培養香桃木的方法，其特征在于，所述的生根培養基的組成成分優選MS+NAA0.2mg/L。
6.根據權利要求1-5中任一項所述的一種組織培養香桃木的方法，其特征在于，上述培養基的PH值為5.8，培養基的基本成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L。
7.根據權利要求1-5中任一項所述的一種組織培養香桃木的方法，其特征在于，步驟(1)-(4)中進行組織培養的溫度為24-26°C，組織培養時的光照強度為SOymol/m2.S。
【文檔編號】A01H4/00GK104335897SQ201310330297
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2013年7月31日 優先權日:2013年7月31日
【發明者】黃建榮, 沈勤, 陳建華 申請人:上海欣優花木種植專業合作社, 上海上房園藝有限公司