一種蟹爪蘭的繁殖方法
【專利摘要】本發明公開了一種蟹爪蘭的繁殖方法，包括如下步驟：（1）選取蟹爪蘭的莖節作為外植體并消毒；（2）將消毒后的外植體接種到芽誘導培養基上，送入培養室進行芽誘導培養；（3）將分化后的外植體轉移到繼代培養基中進行繼代培養；（4）選取健壯的分化苗接種到生根培養基上進行生根培養；（5）煉苗并移栽，得到成品。本發明所述方法增殖系數始終保持在3.0以上，因此培育周期短，為實現通過雜交育種手段選育的蟹爪蘭新品種的快速擴繁，早日上市奠定了基礎。
【專利說明】一種蟹爪蘭的繁殖方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及組織培養【技術領域】，特別是涉及一種采用組織培養技術繁殖蟹爪蘭的方法。
【背景技術】
[0002]蟹爪蘭(Zygocactus truncactus)又稱圣誕仙人掌、蟹爪蓮或仙指花,為仙人掌科蟹爪蘭屬多年生常綠小灌木肉質植物，常生長在半陰、濕潤的環境中，具有扁平的變態莖，分枝極多，節間短、狀如蟹爪。蟹爪蘭花色艷麗，花期正值圣誕節至春節期間，深受人們喜愛。
[0003]蟹爪蘭的繁殖方式主要是扦插繁殖，嫁接繁殖，也可采用播種繁殖。扦插繁殖適用于規模化生產中應用；嫁接繁殖工序較多，適用于小批量生產，制作造型和大型盆栽以及引種繁殖和搶救品種；播種繁殖主要應用于蟹爪蘭雜交育種中的新品種選育。以上方式可以滿足生產需求，但是對于蟹爪蘭雜交育種中選育出的優良新品種，如果要進行大面積推廣，扦插繁殖的年繁殖系數4，如僅依靠傳統的繁殖使已選育出的新品種面市至少需要6-8年才可有一定規模，另外一個品種扦插繁殖多代還會出現退化的現象。因此研究蟹爪蘭快速繁殖的技術和方法，加速蟹爪蘭新品種的推廣，具有重要的理論和現實意義。
【發明內容】
[0004]本發明要解決的技術問題是提供一種簡便的快速大量繁殖蟹爪蘭的方法。
[0005]一種蟹爪蘭的繁殖方法，包括如下步驟:
[0006](I)選取蟹爪蘭的莖節作為外植體并消毒；
[0007](2)將消毒后的外植體接種到芽誘導培養基上，送入培養室進行芽誘導培養；
[0008](3)將分化后的外植體轉移到繼代培養基中進行繼代培養；
[0009](4)選取健壯的分化苗接種到生根培養基上進行生根培養；
[0010](5)煉苗并移栽,得到成品。
[0011]本發明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述外植體為蟹爪蘭的幼嫩莖節。
[0012]本發明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述外植體的消毒方法為:將采集到的外植體先混合洗潔精在流水下沖洗30min，在超凈工作臺上用75%的酒精消毒10_30s，在用無菌水沖洗3-5遍,之后用0.1%升萊消毒IOmin。
[0013]本發明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述芽誘導培養基為MS+6-BA2.0mg.L_1+NAA0.1mg.L—1。
[0014]本發明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中，接種時將整個消毒后的莖節直接接入芽誘導培養基中，其基部先長出3-5條根，根與莖節連接處分化愈傷組織，從愈傷組織中分化出幼嫩莖節，當幼嫩莖節長至2-3個莖節時，進行繼代培養。
[0015]本發明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中，接種時將整個消毒后的莖節直接接入芽誘導培養基中，從所述莖節頂端長出幼嫩莖節，當長出2-3個所述幼嫩莖節時選用所述幼嫩莖節進行繼代培養。
[0016]本發明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中，接種時將整個消毒后的莖節直接接入芽誘導培養基中，其基部先長出3-5條根，根與莖節連接處分化愈傷組織，將所述愈傷組織轉移到成分一致的新的芽誘導培養基中，分化出幼嫩莖節，當長出2-3個所述幼嫩莖節時進行繼代培養。
[0017]本發明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述繼代培養基為MS+6-BA1.0mg.L_1+NAA0.1mg.L—1。
[0018]本發明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述生根培養基為1/2MS+NAA0.1mg.L'
[0019]本發明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述步驟(5)具體為:把生根后的組培苗在煉苗室中開蓋鍛煉3-5d，然后移栽到泥炭:珍珠巖3:1的基質中，得到成品。
[0020]本發明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述培養室的培養溫度為25°C，光照時間為 12h.cf1，光照強度約 25-30 μ mo I.π2.s_1 ；
[0021]所述芽誘導培養基、增殖培養基和生根培養基中均添加3%質量百分比的蔗糖和
0.8%質量百分比的瓊脂，PH為5.8。
[0022]本發明蟹爪蘭的繁殖方法與現有技術不同之處在于:
[0023]本發明采用組織培養的方法，通過消毒外植體，得到無菌系，繼而利用不同種類和不同濃度的外源激素的配比，對組培苗進行繼代增殖、生長及生根進行篩選、調控、最后確定最佳外植體與培養基的配比，使其能應用于工廠化生產。創新點在于本發明的組培配方是將自主選育的蟹爪蘭新品種進行大量擴繁的最佳組合，可以快速大量的繁殖組培苗，以適應花卉市場的需要，尚屬國內首例。
[0024]本發明對多個自主選育的蟹爪蘭新品種的成熟莖節、幼嫩莖節等外植體進行了系列組培快繁研究，取得了較好的結果，但以幼嫩莖節進行組培快繁效果最佳，且取幼嫩莖節不影響植株正常生長。本發明在消毒時間和效果、操作方法和再生效率、生產成本等方面都明顯優于其他植物組培快繁，所以建立的規模化商品生產體系穩定、能夠滿足規模化快繁生產。本發明主要應用于蟹爪蘭新品種的快速擴繁，使其快速走向市場的一種有效途徑，改變國內新品種推出較慢的現狀。
[0025]本發明所述蟹爪蘭莖節的繁殖方法，幼嫩莖節依次通過洗潔精、75%酒精和
0.1ffigCl2溶液浸泡獲得無菌莖節，滅菌效果較好，后續培養污染較少，而莖節死亡率較低，用芽誘導培養基誘導培養形成愈傷組織，再分化形成小莖節，得到蟹爪蘭組培苗，將小莖節轉接到增殖培養基中，莖節頂端分生出幼嫩莖節，一個月可增殖一次；本發明所述方法消毒時可以單個莖節也可以是連著的兩個莖節，消毒后再切開，接種時是整個莖節接入，而不是傳統的將所述莖節切成較小的組織塊后接入，比傳統方法簡便且增殖效果更好，采用傳統方法達不到本發明所述的增殖效果；本發明所述方法增殖系數始終保持在3.0以上，因此培育周期短，為實現通過雜交育種手段選育的蟹爪蘭新品種的快速擴繁，早日上市奠定了基礎。
【專利附圖】
【附圖說明】[0026]圖1A為接入芽誘導培養基的莖段形成的愈傷組織；
[0027]圖1B為愈傷組織中分化出的幼嫩莖節；[0028]圖1C為芽增殖培養后的外植體；
[0029]圖1D為完成增殖的外植體。
【具體實施方式】
[0030]實施例1
[0031]如圖1所示，一種蟹爪蘭的繁殖方法，采用組織培養技術，具體包括如下步驟:
[0032](I)切取蟹爪蘭幼嫩莖節作為組織培養外植體，將采集到的外植體先混合洗潔精在流水下沖洗30min，在超凈工作臺上用75%的酒精消毒10_30s，在用無菌水沖洗3_5遍，之后用0.1%升萊消毒lOmin。
[0033](2)將消毒后的外植體接種到芽誘導培養基上，送入培養室進行無菌培養，培養室的培養溫度為25°C，光照時間為12h.cf1，光照強度約25-30 μ mo I.m_2.s-1 ；
[0034]在這一過程中，根據不同培養基上各外植體分化的情況的不同篩選出芽誘導得較好的外植體種類和培養基類型，效果最好的外植體為幼嫩莖段，芽誘導培養基為MS+6-BA2.0mg-L^+NAA0.1mg -T10接種時將整個消毒后的莖節直接接入芽誘導培養基中，莖芐基部分化需要2-3個月的時間，其基部先長出3-5條根，根與莖節連接處分化愈傷組織(見圖1A)，從愈傷組織中分化出幼嫩莖節(見圖1B)，當幼嫩莖節長至2-3個莖節時，進行繼代培養。
[0035](3)將分化后的外植體繼代到繼代增值培養基上進行繼代培養(有3個以上分化較好的莖節)，增值 系數可達3.0以上(見圖1C和圖1D)，所述繼代培養基為MS+6-BA1.0mg.L_1+NAA0.1mg.L—1。
[0036](4)將生長健壯的分化苗接種到生根培養基上進行生根培養基上，進行生根培養，生根培養基為1/2MS+NAA0.1mg.L'
[0037](5)在生根培養后的分化苗中選擇生根較好的，在煉苗室中打開蓋鍛煉3-5d，然后移栽到泥炭:珍珠巖=3:1的基質中，移栽成活率在95%左右,獲得商品苗。
[0038]所述芽誘導培養基、繼代培養基和生根培養基中均添加3% (質量百分比)的蔗糖和0.8% (質量百分比)的瓊脂，PH為5.8。
[0039]所述培養室的培養溫度為25 °C，光照時間為12h.cf1，光照強度約25-30 μ mo I ^m2-S10
[0040]其中:
[0041 ] 1、MS培養基配方單如下:
[0042]工作液濃度單位mg/L
[0043]大量元素:NH4NO31650、KN031900、CaCl2.2Η20 440、MgSO4.7Η20 370,KH2PO4 170 ；
[0044]微量元素:ΚΙ0.83、H3BO3 6.2、MnSO4.4Η20 22.3、ZnS047H20 8.6、Na2MnO4.2H200.25、CuSO4.5H20 0.025、CoCl2.6H20 0.025。
[0045]鐵鹽:FeS047H2027.8、Na2-EDTA 2H20 37.3。
[0046]有機物質:肌醇100、煙酸0.5、鹽酸毗多醇0.5、煙酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。
[0047]2、NAA為萘乙酸
[0048]3、6_BA為6_芐基嘌呤
[0049]采用本發明所述方法對4個蟹爪蘭品種進行了增殖，試驗結果表明，品種I的增殖系數為3.3，品種2的增殖系數為3.0，品種3的增殖系數為3.5，品種4 (‘早妝’)的增殖系數為3.1，其中品種3莖節較小而致密，豐花型品種，在組培過程中發現其增值系數相對其他品種而言相對較高。
[0050]實施例2
[0051]步驟(2)中接種時將整個消毒后的莖節直接接入芽誘導培養基中，培養2-3個月后從所述莖節頂端長出幼嫩莖節，當長出2-3個所述幼嫩莖節時選用所述幼嫩莖節進行繼代培養。
[0052]其他同實施例1。
[0053]實施例3
[0054]步驟(2)中接種時將整個消毒后的莖節直接接入芽誘導培養基中，其基部先長出3-5條根，根與莖節連接處分化愈傷組織，將所述愈傷組織轉移到成分一致的新的芽誘導培養基中，分化出幼嫩莖節，當長出2-3個所述幼嫩莖節時進行繼代培養。
[0055]其他同實施例1。
[0056]以上所述的實施例僅僅是對本發明的優選實施方式進行描述，并非對本發明的范圍進行限定，在不脫離本發明設計精神的前提下，本領域普通技術人員對本發明的技術方案作出的各種變形和改進，均應落入`本發明權利要求書確定的保護范圍內。
【權利要求】
1.一種蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)選取蟹爪蘭的莖節作為外植體并消毒； (2)將消毒后的外植體接種到芽誘導培養基上，送入培養室進行芽誘導培養； (3)將分化后的外植體轉移到繼代培養基中進行繼代培養； (4)選取健壯的分化苗接種到生根培養基上進行生根培養； (5)煉苗并移栽，得到成品。
2.根據權利要求1所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:所述外植體為蟹爪蘭的幼嫩莖節。
3.根據權利要求1或2所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:所述外植體的消毒方法為:將采集到的外植體先混合洗潔精在流水下沖洗30min，在超凈工作臺上用75%的酒精消毒10-30s,在用無菌水沖洗3-5遍,之后用0.1%升萊消毒lOmin。
4.根據權利要求3所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:所述芽誘導培養基為MS+6-BA2.0mg.L_1+NAA0.1mg.L—1。
5.根據權利要求4所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:接種時將整個消毒后的莖節直接接入芽誘導培養基中，其基部先長出3-5條根，根與莖節連接處分化愈傷組織，從愈傷組織中分化出幼嫩莖節，當幼嫩莖節長至2-3個莖節時，進行繼代培養。
6.根據權利要求4所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:接種時將整個消毒后的莖節直接接入芽誘導培養基中，.從所述莖節頂端長出幼嫩莖節，當長出2-3個所述幼嫩莖節時選用所述幼嫩莖節進行繼代培養。
7.根據權利要求4所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:接種時將整個消毒后的莖節直接接入芽誘導培養基中，其基部先長出3-5條根，根與莖節連接處分化愈傷組織，將所述愈傷組織轉移到成分一致的新的芽誘導培養基中，分化出幼嫩莖節，當長出2-3個所述幼嫩莖節時進行繼代培養。
8.根據權利要求5或6或7所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:所述繼代培養基為 MS+6-BA1.0mg.I^+NAA0.1mg.L'
9.根據權利要求8所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:所述生根培養基為1/2MS+NAA0.1mg.L—1。
10.根據權利要求9所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于: 所述步驟(5)具體為:把生根后的組培苗在煉苗室中開蓋鍛煉3-5d，然后移栽到泥炭:珍珠巖3:1的基質中，得到成品； 所述培養室的培養溫度為25 V,光照時間為12h.cT1，光照強度約25-30 μ mo I.m 2.s 1 ； 所述芽誘導培養基、增殖培養基和生根培養基中均添加3%質量百分比的蔗糖和0.8%質量百分比的瓊脂，PH為5.8。
【文檔編號】A01H4/00GK103461136SQ201310433660
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月18日 優先權日:2013年9月18日
【發明者】趙天榮, 蔡建崗 申請人:寧波市農業科學研究院