一種生產全雌泥鰍的方法
【專利摘要】本發明公開一種生產全雌泥鰍的方法，包括如下步驟：1）人工催產和人工授精；2）性逆轉：魚苗用雄性激素溶液浸泡過的鹵蟲幼體作餌料，魚苗中大部分XX♀雌魚性逆轉成為XX♂生理雄魚，XY♂雄魚不變，飼養至可區分雌雄時剔除XX♀雌魚；3）測交：將XX♂生理雄魚、XY♂雄魚飼養至性成熟，然后分別與XX♀雌魚交配，將子代為100%XX♀雌魚的父本，即XX♂生理雄魚保留；4）擴群：XX♂生理雄魚與XX♀雌魚交配產生100%XX♀雌魚苗，取一部分雌魚苗按步驟2）性逆轉成為XX♂生理雄魚；5）種群的建立：XX♀雌魚和XX♂生理雄魚交配生產100％XX♀雌魚，重復步驟4）和5），可規模化持續生產全雌泥鰍。
【專利說明】一種生產全雌泥鰍的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及魚類的人工性別控制技術，屬于一種魚類生理遺傳繁殖的方法，是以人工性逆轉、測交篩選、擴群等技術控制單性魚類繁育的【技術領域】，具體涉及一種生產全雌泥鰍的方法。
【背景技術】
[0002]泥鰍是淡水養殖的重要魚類。在相同的養殖條件下，雌性泥鰍比同胞雄魚的生長快、增重量大。養殖全雌泥鰍將顯著提高養殖產量和經濟效益。
[0003]生產單性雌魚有幾種方法可供選擇:如人工選擇、雌性激素直接誘導性逆轉、雌核發育和性別特異的DNA探針技術等。人工選擇方法因勞動強度大，而且不能準確區分雌雄魚，不適合單性雌魚的規模化生產。雌性激素直接誘導性逆轉方法可以規模化使雄性魚性逆轉成為雌性魚，但這種方法不能達到全雌的目的，且有性激素殘留的危險，不利于安全生產，早已被許多國家禁用。目前，利用雌核發育產生全雌魚的方法已經應用于養殖生產，但這種方法最大的困難是二倍體出現頻率低，仔幼魚階段成活率低，個體差異大，能達到性成熟的個體不多。再者，在雌核發育產生的子代中也可能出現雄性魚。
【發明內容】
[0004]為了解決上述技術問題，本發明提供了一種生產全雌泥鰍的方法。
[0005]本發明提供的生產全雌泥鰍的方法，包括如下步驟:
1)人工催產和人工授精:挑選體表無傷、性腺發育良好的泥鰍雌魚和雄魚，進行人工催產、授精，把受精卵置于生化培養箱中`恒溫孵育成雄性和雌性魚苗；
2)性逆轉:待卵黃吸收后，魚苗用雄性激素溶液浸泡過的鹵蟲幼體作為開口餌料，連續投喂40-60天，經雄性激素處理后存活的魚苗中大部分XX早雌魚性逆轉成為XX ^生理雄魚，XY ?雄魚不變，然后將用雄性激素溶液浸泡過渡的鹵蟲幼體喂養過的所有幼魚轉移至水泥池之后，飼料中不再拌合雄性激素，轉為正常飼養至可按胸鰭形狀區分雌雄時剔除XX早雌魚，保存XX ^生理雄魚、XY ^雄魚備用；
3)測交:將XXt生理雄魚、XY t雄魚飼養至性成熟，然后分別與XX早雌魚交配，將子代為100% XX早雌魚的父本，即XX ^生理雄魚保留；
4)擴群:取步驟3)中已被確認的XX^生理雄魚與XX早雌魚交配產生100% XX早雌魚苗，在魚苗開口時，取一部分按步驟2)用雄性激素誘導性逆轉成為XX ^生理雄魚；
5)全雌泥鰍繁育種群的建立:取步驟4)得到的XX早雌魚和XX?生理雄魚交配，可持續生產100% XX早雌魚，重復步驟4)和步驟5)，建立全雌泥鰍繁育種群，即可規模化持續生產全雌泥鰍。
[0006]作為優選技術方案，步驟I)中人工催產、受精的步驟為:用地歐酮和魚用促黃體釋放激素類似物2號一次注射，劑量為雌魚:地歐酮5mg +魚用促黃體釋放激素類似物2號5ug/kg，雄魚減半，當親鰍發情劇烈時，將親鰍捕起，用手輕輕擠壓雌雄鰍腹部，擠出卵子和精子，取卵子與精子混合進行干法人工受精。
[0007]作為優選技術方案，步驟I)中受精卵置于27°C的生化培養箱中恒溫孵育成雄性和雌性魚苗。
[0008]優選地，步驟2)所述雄性激素為甲基睪丸酮。
[0009]作為優選技術方案，步驟2)中鹵蟲幼體先在200~400 IU的甲基睪丸酮中浸泡I小時，再抽濾取出富集雄性激素的鹵蟲幼體投喂已開口 4天的人工繁殖泥鰍魚苗，每天上午、下午和晚上各投喂一次，投喂量以30分鐘內吃完為準，連續投喂40-60天。 [0010]本發明具有以下有益效果:
1.因省略了雌核發育步驟，可以降低人工誘導雌核發育對受精卵遺傳物質的損傷，提高了 XX早雌魚的獲得率。
[0011]2.有明顯的經濟和社會效益:由于采用了 XX早雌魚和XX ^生理雄魚交配法，可以迅速獲得100% XX早雌魚，產品可規模化生產，進行全雌泥鰍養殖，可提高產量和商品質量。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0012]圖1為本發明建立全雌泥鰍繁育種群的方法技術原理圖。
[0013]圖2為本發明的生產全雌泥鰍的方法步驟流程方框圖。
【具體實施方式】
[0014]下面結合附圖和具體實施例對本發明作進一步說明，以使本領域的技術人員可以更好的理解本發明并能予以實施，但所舉實施例不作為對本發明的限定。
[0015]附圖1示出了建立全雌泥鰍繁育種群的方法技術原理圖，附圖2示出了建立規模化生產全雌泥鰍的方法步驟流程方框圖，結合附圖1和2，具體論述本發明的生產全雌泥鰍的方法具體如下:
步驟1、人工催產與人工授精:根據實驗或工業化生產的需要，取若干數量成熟的泥鰍親本，按常規方法進行人工催產。用地歐酮(DOM)和魚用促黃體釋放激素類似物2號(LRH-A2) —次注射，劑量為雌魚(DOM 5mg+ LRH-A2 5ug)/kg，雄魚減半。當親鰍發情劇烈時，將親鰍捕起，用手輕輕擠壓雌雄鰍腹部，擠出卵子和精子。根據需要取一定量的卵子與精子混合進行干法人工受精，受精卵在27°C生化培養箱中恒溫孵育至魚苗全部出膜，得到的雄性和雌性魚苗，即為H)。待卵黃吸收后，魚苗用鹵蟲幼體作為開口餌料。
[0016]步驟2、性逆轉:將普通XX早雌魚泥鰍性逆轉成XX ^生理雄魚，以鹵蟲幼體作為雄激素載體，將其先在200~400 IU的甲基睪丸酮(MT ；sigma)溶液中浸泡I小時，再抽濾取出富集雄激素的鹵蟲幼體投喂已開口 4天的人工繁殖泥鰍魚苗，每天上午、下午和晚上各投喂一次，投喂量以30分鐘內吃完為準，連續投喂40-60天，實驗證明魚苗存活率為60%以上，性逆轉率達95%以上，由于泥鰍是雄性配子異型的魚類，其性別體制是XX早雌魚/ XY ?雄魚，雌雄魚的比例近似為1:1。所以，經性激素處理后成活的魚苗中，約有50%是XX早雌魚性逆轉成XX ?生理雄魚，將經激素性逆轉后的幼魚(包括XX ?生理雄魚、XY ?雄魚和XX早雌魚)一并轉移至水泥池中，養至可按胸鰭形狀區分雌雄時(雌魚胸鰭短而圓，雄魚胸鰭長而尖)，剔除XX早雌魚泥鰍，保存雄性泥鰍(XX ?生理雄魚和XY ?雄魚)備用。[0017]步驟3、性逆轉魚的測交篩選:將XX ^生理雄魚、XY ^雄性泥鰍飼養至性成熟，然后分別與普通XX早雌魚交配，將子代為100% XX早雌魚的父本，即XX ^生理雄性泥鰍保留備用。
[0018]步驟4、擴群:取步驟3中已被確認的XX ^生理雄魚與普通的XX早雌魚交配，產生100%XX早雌魚(即Fl )，當魚苗開口 4天時，取一部分XX早雌魚魚苗按步驟2，用MT誘導性逆轉成為XX ^生理雄魚。
[0019]步驟5、全雌泥鰍繁育種群的建立:取步驟4中XX早雌魚和XX ^生理雄魚交配，可持續生產XX早雌魚(即F2)，重復步驟4和步驟5，建立全雌泥鰍繁育種群，可規模化生產全雌泥鰍。
[0020]至此，即形成了全雌泥鰍的持續規模化生產過程以及它們的繁育體系。
[0021]以上所述實施例僅是為充分說明本發明而所舉的較佳的實施例，本發明的保護范圍不限于此。本【技術領域】的技術人員在本發明基礎上所作的等同替代或變換，均在本發明的保護范圍之內。本發明的 保護范圍以權利要求書為準。
【權利要求】
1.一種生產全雌泥鰍的方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)人工催產和人工授精:挑選體表無傷、性腺發育良好的泥鰍雌魚和雄魚，進行人工催產、授精，把受精卵置于生化培養箱中恒溫孵育成雄性和雌性魚苗； 2)性逆轉:待卵黃吸收后，魚苗用雄性激素溶液浸泡過的鹵蟲幼體作為開口餌料，連續投喂40-60天，經雄性激素處理后存活的魚苗中大部分XX早雌魚性逆轉成為XX ^生理雄魚，XY ?雄魚不變，然后將用雄性激素溶液浸泡過渡的鹵蟲幼體喂養過的所有幼魚轉移至水泥池之后，飼料中不再拌合雄性激素，轉為正常飼養至可按胸鰭形狀區分雌雄時剔除XX早雌魚，保存XX ^生理雄魚、XY ^雄魚備用； 3)測交:將XXt生理雄魚、XY t雄魚飼養至性成熟，然后分別與XX早雌魚交配，將子代為100% XX早雌魚的父本，即XX ^生理雄魚保留； 4)擴群:取步驟3)中已被確認的XX^生理雄魚與XX早雌魚交配產生100% XX早雌魚苗，在魚苗開口時，取一部分按步驟2)用雄性激素誘導性逆轉成為XX ^生理雄魚； 5)全雌泥鰍繁育種群的建立:取步驟4)得到的XX早雌魚和XX^生理雄魚交配，可持續生產100% XX早雌魚，重復步驟4)和步驟5)，建立全雌泥鰍繁育種群，即可規模化持續生產全雌泥鰍。
2.根據權利要求1所述的生產全雌泥鰍的方法，其特征在于，步驟I)中人工催產、受精的步驟為:用地歐酮和魚用促黃體釋放激素類似物2號一次注射，劑量為雌魚:地歐酮5mg+魚用促黃體釋放激素類似物2號5ug/kg，雄魚減半，當親鰍發情劇烈時，將親鰍捕起，用手輕輕擠壓雌雄鰍腹部，擠出 卵子和精子，取卵子與精子混合進行干法人工受精。
3.根據權利要求1所述的生產全雌泥鰍的方法，其特征在于，步驟I)中受精卵置于27°C的生化培養箱中恒溫孵育成雄性和雌性魚苗。
4.根據權利要求1所述的生產全雌泥鰍的方法，其特征在于，步驟2)所述雄性激素為甲基睪丸酮。
5.根據權利要求1所述的生產全雌泥鰍的方法，其特征在于，步驟2)中鹵蟲幼體先在200~400 IU的甲基睪丸酮中浸泡I小時，再抽濾取出富集雄性激素的鹵蟲幼體投喂已開口 4天的人工繁殖泥鰍魚苗，每天上午、下午和晚上各投喂一次，投喂量以30分鐘內吃完為準，連續投喂40-60天。
【文檔編號】A01K61/00GK103548740SQ201310546649
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月7日 優先權日:2013年11月7日
【發明者】劉漢勤, 徐江, 侯昌春, 陳麗慧 申請人:武漢百瑞生物技術有限公司