一種在蠶桑生產上廣譜殺菌抗病毒多效藥物及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明屬于桑蠶生產【技術領域】，具體涉及一種在桑蠶生產上廣譜殺菌抗病毒多效藥物及其應用。所述藥物為20～100ppm的納米銀溶液。本發明通過實驗室平皿試驗發現，用20～100ppm的納米銀溶液處理家蠶主要病原8小時，納米銀溶液對蠶桑生產的各種病原物具有強烈殺滅作用，能一次性對蠶房、用具、養蠶周圍環境進行徹底消毒，使用方法簡單快捷，容易為廣大蠶農接受，從而達到消毒防病，提高蠶桑生產經濟效益的目的。
【專利說明】一種在蠶桑生產上廣譜殺菌抗病毒多效藥物及其應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于桑蠶生產【技術領域】，具體涉及一種在桑蠶生產上廣譜殺菌抗病毒多效藥物及其應用。
【背景技術】
[0002]目前，蠶桑生產中使用的消毒藥物，均存在殺菌譜不夠，以及無法殺滅病毒病、真菌等不同病原的問題。比如現在廣泛使用的漂白粉，其有效成分為有效氯，存放一段時間后有效成分容易揮發，且殺菌譜比較有限，對病毒病及其他病原物大幅度下降；而且消毒時對棉織品、鐵器等有強烈腐蝕作用。在蠶桑生產上，一般消毒藥物不能達到徹底消毒的效果，因而難以貫徹執行“預防為主，綜合防治”的八字方針。家蠶主要病原多角體病毒、卒倒菌芽孢、黑胸敗血菌芽孢、白僵、綠僵、曲霉孢子等都有強烈的殺滅作用
納米銀(Nanoparticle Silver)就是將粒徑做到納米級的金屬銀單質。納米銀粒徑大多在25納米左右，對大腸桿菌、淋球菌、沙眼衣原體等數十種致病微生物都有強烈的抑制和殺滅作用，而且不會產生耐藥性。但是，納米銀對于家蠶主要病原如多角體病毒、卒倒菌芽孢、黑胸敗血菌芽孢、白僵、綠僵、曲霉孢子及微粒子原蟲等是否具有殺滅作用，至今未有報道。
【發明內容】
[0003]本發明要解決 的技術問題是為了克服蠶桑生產上現有消毒藥物的不足，提供一種在桑蠶生產上廣譜殺菌抗病毒多效藥物，該藥物殺菌譜廣、對家蠶病毒病、真菌均有強烈殺滅作用。
[0004]本發明的目的通過以下技術方案予以實現:
一種在蠶桑生產上廣譜殺菌抗病毒多效藥物，所述藥物為20~IOOppm的納米銀溶液。
[0005]所述20~IOOppm的納米銀溶液的制備方法為:用粒徑小于5nm、有效濃度為1000ppm市售納米銀產品做為母液，按水:母液為9~49:1的比例向母液中加入水，進行稀釋后得20~IOOppm的納米銀溶液。
[0006]本發明通過實驗室平皿試驗發現，用20~IOOppm的納米銀溶液處理家蠶主要病原8小時，納米銀溶液對蠶桑生產的各種病原物具有強烈殺滅作用。因此，本發明提供一種納米銀溶液，可廣泛應用于殺滅家蠶主要病原物藥物。所述家蠶病原物為黑胸敗血菌、卒倒桿菌、金色葡萄球菌、桑樹赤銹病菌、家蠶血液型膿病(NPV)或/和家蠶細胞質型多角體病毒(CPV)。
[0007]本發明的有益效果是:
本發明首次發現，使用20~IOOppm的納米銀溶液對蠶桑生產的各種病原物具有強烈殺滅作用，能一次性對蠶房、用具、養蠶周圍環境進行徹底消毒，使用方法簡單快捷，容易為廣大蠶農接受，從而達到消毒防病，提高蠶桑生產經濟效益的目的。[0008]說明書附圖
圖1.不同濃度的納米銀溶液對各種家蠶細菌性病原物的殺菌譜平皿法測定納米銀的殺菌譜；I為不同濃度納米銀對黑胸敗血病的殺菌作用，II為不同濃度納米銀對卒倒桿菌的殺菌作用；111為不同濃度納米銀對金色葡萄球菌的殺菌作用；IV為不同濃度納米銀對桑樹赤銹病菌的殺菌作用。
[0009]圖2.納米銀溶液對黑胸敗血病的殺菌效果；I為納米銀處理的黑胸敗血病菌照片，在圖1中，A菌體內含有大量納米銀顆粒(顯示為白色)，B為納米銀殺死菌體后的菌殘骸；II為磷酸緩沖液處理的對照。
[0010]圖3.納米銀溶液對家蠶血液型膿病(NPV)的作用效果；I為納米銀處理的NPV照片；II為磷酸緩沖液處理的對照。
[0011]圖4.納米銀溶液對家蠶細胞質型多角體病毒(CPV)的作用效果；I為納米銀處理的CPV照片；II為磷酸緩沖液處理的對照。
[0012]圖5.NPV添食家蠶實驗室飼養情況。
[0013]圖6.納米銀溶液處理血液型膿病添食家蠶的生物學效應檢測；其中圖A證實了經納米銀溶液處理后的NPV致病力大大下降，而圖B對照組證明不經納米銀溶液處理的NPV致病力極高；圖C、D為空白對照,包括Sumerian Silver和蒸懼水對照。
【具體實施方式】
[0014]下面結合說明書附圖和具體實施例進一步詳細說明本發明。除非特別說明，本發明采用的試劑、設備為本【技術領域】常規試劑和設備。
[0015]本發明所用納米銀為烏克蘭市售納米銀產品Sumerian Silver,該產品納米銀粒徑小于5nm ;母液有效濃度為lOOOppm。
[0016]實施例1
1.配置不同濃度的納米銀溶液:納米銀溶液的濃度主要為2.5ppm、5ppm、10ppm、20ppm、IOOppm0
[0017]配置方法為:用烏克蘭市售納米銀產品Sumerian Silver做為母液(該產品粒徑小于5nm，母液有效濃度為1000ppm的無色透明溶液)，分別按母液:水=1:399、1:199、
I:99U:49,1:9的比例，向母液中加入農村井水或自來水，直接稀釋后得2.5ppm、5ppm、10ppm、20ppm、IOOppm 的納米銀溶液。
[0018]2.測定上述納米銀溶液對家蠶主要病原的抗菌譜:以家蠶主要病原如黑胸敗血菌、卒倒桿菌iBacillus金色葡萄球菌{Streptococcus atfreiAs)、桑樹赤銹病菌mori 家蠶血液型膿病(NPV)、家蠶細胞質型多角體病毒(CPV)作為測定對象，具體測定方法為:
細菌和真菌樣品:將各種病原菌分別接種到LB液體培養基，在28~37°C培養8~12小時(真菌樣品置28°C)。計數。以1x1 O8菌/mL作為標準菌液。在超凈臺上向標準培養皿(直徑12mm)內加入5mL溶化的固體培養基，待其溫度降到40°C時加入200μ?標準菌液，未凝固前快速混勻。凝 固后用打孔器打孔。然后，向孔中分別加入不同濃度的納米銀溶液，密封倒置于4°C冰箱，擴散1小時。之后全部置于28~37°C培養箱培養4~8小時，觀察，拍照。[0019]病毒NPV和CPV樣品:病毒多角體濃度均為2 x 108CFU/mL,取ImL樣品用IOOppm納米銀室溫處理8小時，按照電鏡樣品制備方法制備電鏡觀察樣品。
[0020]3.測定結果:將20~IOOppm納米銀作用于家蠶細菌病8小時，對革蘭氏陽性菌和陰性菌都有較強的殺菌效果，結果見圖1、2、3、4。在圖1中，其中I為不同濃度納米銀對黑胸敗血病的殺菌作用，2.5ppm的納米銀溶液顯示出較好的殺菌效果；II為不同濃度納米銀對卒倒桿菌(ifeci77i/5.的殺菌作用,有效濃度在2.5~5ppm之間JII為不同濃度納米銀對金色葡萄球菌aureus)的殺菌作用,有效濃度在5~IOppm之間；IV為不同濃度納米銀對桑樹赤銹病菌mori Barclay)的殺菌作用,有效濃度在20~IOOppm之間。從圖3中，其中I為納米銀處理的NPV照片；II為磷酸緩沖液處理的對照，圖3中的圖1的NPV病毒包涵體內桿狀病毒顆粒與對照比較更為散亂，靠近包涵體四周邊緣，而對照的桿狀病毒顆粒集中在包涵體中央區域。從上述結果可以看出:例如對黑胸敗血病{Bacillus spp.),使用濃度在2.5ppm就能達到實用殺菌效果；IOOppm的納米銀溶液作用于家蠶病毒病8小時，病毒(NPV和CPV)的多角體蛋白發生一定程度的變化，特別是對CPV,外形變化顯著；使用濃度在20~IOOppm可以殺滅桑樹赤銹病mori
這是一種真菌性病害。
[0021]使用20~IOOppm的納米銀溶液對蠶桑生產的各種病原物具有強烈殺滅作用，能一次性對蠶房、用具、養蠶周圍環境進行徹底消毒，使用方法簡單快捷，容易為廣大蠶農接受，從而達到消毒防病，提高蠶桑生產經濟效益的目的。
[0022]實施例2
實施例1所述的納米銀溶液在實驗室小規模飼養試驗，研究納米銀溶液處理血液型膿病(NPV)和質型多角體病毒(CPV)后，添食飼養對家蠶發病的影響。
[0023]實施時間:2013年3月23日至4月22日。
[0024]實施地點:華南農業大學校內，亞太地區蠶桑培訓中心北樓昆蟲生理生化實驗室。
[0025]實施辦法:
家蠶品種:原種7532 ;桑葉:采自華南農業大學桑園，品種為廣東荊桑。
[0026]添食方法:分別用納米銀處理CPV和NPV，連同CPV、NPV進行實驗，并分別設立空白對照。其中，納米銀使用濃度為2ppm。CPV的原始貯存液濃度為IX IO8 CFU/mL,NPV的原始貯存液濃度為2X IO8 CFU/mL，稀釋100倍作為使用濃度。處理組:按照納米銀使用濃度加入到NPV和CPV各IOOmL使用濃度液中，室溫處理8~12h。對照組:NPV和CPV各IOOmL使用濃度，同處理組室溫8~12hr。空白對照組:使用等量無菌水。
[0027]配制好各種處理液后，用噴霧瓶均勻噴到桑葉表面，晾干后用于4齡蠶第三天添含
[0028]分區設計:在4齡蠶時進行分區，對NPV和CPV分別進行實驗，實驗組分別為NPV、CPV、納米銀處理NPV、納米銀處理CPV，每個實驗設三個重復，每個重復設立空白對照(添食等量無菌水)。
[0029]實施結果1:到5齡后期，NPV添食的三個實驗組發現有大量家蠶發病死亡，而經過納米銀處理的NPV實驗組發病率大致與空白對照組相當(表1、圖6)。
[0030]表1納米銀處理NPV實驗統計表
【權利要求】
1.納米銀溶液在制備殺滅家蠶主要病原物藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述應用，其特征在于，所述家蠶病原物為黑胸敗血菌、卒倒桿菌、金色葡萄球菌、桑樹赤銹病菌、家蠶血液型膿病或/和家蠶細胞質型多角體病毒。
3.—種在蠶桑生產上廣譜殺菌抗病毒多效藥物，其特征在于，所述藥物為20~IOOppm的納米銀溶液。
4.根據權利要求3所述藥物，其特征在于，所述20~IOOppm的納米銀溶液的制備方法為:用粒徑小于5nm、有效濃度為1000ppm市售納米銀產品做為母液，按水:母液為9~49:1的比例向母液中加入水，進行 稀釋后得20~IOOppm的納米銀溶液。
【文檔編號】A01P1/00GK103583570SQ201310579002
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月19日 優先權日:2013年11月19日
【發明者】李文楚 申請人:華南農業大學