紅椿組織培養培養基的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種紅椿組織培養培養基，該培養基包括繼代培養基和生根培養基。首次采用組織培養的方式進行種苗無性繁殖，采用本發明的技術比通過種子繁殖快，更能有效保持母本的優良性狀，保證了種苗的質量。
【專利說明】紅椿組織培養培養基
【技術領域】
[0001]本發明涉及組織培養基，尤其涉及一種紅椿組織培養培養基。
【背景技術】
[0002]紅椿(Toona ciliata Roem.)又名紅楝子、印度椿、麥榮,楝科香椿屬，半常綠喬木，國家II級重點保護野生植物，是我國熱帶、亞熱帶地區的珍貴速生用材樹種，主要分布于廣東、廣西、云南、貴州和安徽等省區。1973年在皖南涇縣首次發現有少量天然分布，其木材為上等家具用材，素有“中國桃花心木”之稱。紅椿還是一種尚未被開發利用的藥用植物。近年來的研究發現，紅椿提取物具有抗菌、抗病毒、滅螺及抗瘧等多種生物活性。目前該樹種自然資源現存稀少，且人為破壞較為嚴重，若不加以保護，將陷于瀕臨滅絕的境地。
[0003]目前紅椿的常規繁育以種子繁殖為主，難以保持母本的優良性狀，且其種子易喪失活力，繁殖速度較慢。通過組織培養的方法可以解決其優質種苗繁殖問題。目前，還未見有紅椿組織培養方面的相關報道。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種紅椿組織培養培養基基配方，該培養基包括繼代培養基和生根培養基，其中:
[0005]每升(L)繼代培養基的組分及各組分的含量如下:
[0006](I)大量元素:硝酸鉀1267mg/L、硝酸銨1100mg/L、二水氯化鈣293mg/L、七水硫酸鎂247mg/L、磷酸二氫鉀113mg/L、七水硫酸亞鐵27.8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L ；
[0007](2)微量元素:四水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水鑰酸鈉0.25mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L ；
[0008](3)有機物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸吡口多醇(VB6) 0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸硫胺素(VBl) 0.lmg/L ；
[0009](4)植物生長調節劑:6_芐基腺嘌呤0.4-0.8mg/L、萘乙酸0.1-0.3mg/L、赤霉素0.6-1.0mg/L ；
[0010]余量為蒸餾水。
[0011]每升(L)生根培養基的組分及各組分的含量如下:
[0012](I)大量元素:硝酸鉀950mg/L、硝酸銨825mg/L、二水氯化鈣220mg/L、七水硫酸鎂185mg/L、磷酸二氫鉀85mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L、七水硫酸亞鐵27.8mg/L ；
[0013](2)微量元素:四水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水鑰酸鈉0.25mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L ；
[0014](3)有機物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸吡口多醇(VB6) 0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸硫胺素(VBl) 0.1mg/ ；
[0015](4)植物生長調節劑:吲哚乙酸0.4-0.8mg/L ；
[0016]余量為蒸餾水。[0017]本發明紅椿組織培養基中的繼代、生根培養基的配制方法為:
[0018]I母液的配制與保存
[0019]1.1為便于取樣，宜先配制各種母液，分為大量元素母液、微量元素母液、有機物母液和各種植物生長調節劑母液。蔗糖、瓊脂不宜配成母液，需要時直接稱樣；
[0020]1.2大量元素母液濃度成100倍溶液，有機物、微量元素母液配成200倍溶液，植物生長調節試劑母液的濃度配成lmg/ml ；
[0021]1.3母液選用無菌的蒸餾水、去離子水或超純水配制，大量生產時用煮沸過的水；
[0022]1.4配制大量元素母液時，每個組分應單獨溶解，后按氮、鈣、鎂、磷的順序逐個混合，否則容易引起沉淀；
[0023]1.5微量元素、有機物、植物生長調節劑母液應用棕色瓶裝好并置于冰箱中保存；
[0024]1.6母液配制后應及時使用，貯存時間不宜超過I個月；
[0025]1.7發現母液有沉淀，或有微生物生長，或有藻類生長，應廢棄不用。
[0026]2培養基的配制
[0027]2.1依照培養基配方，按比例量取各種母液；
[0028]2.2在定量容器內放入準備配制培養基總量的約1/2以上的純凈水，并加入適量的糖，然后邊攪拌邊逐一加入所需量的母液；
[0029]2.3瓊脂可加熱熔化后加入，如有攪拌設備時也可直接加入瓊脂粉，然后用純凈水補足所需配制培養基的總量，攪拌均勻即可；
[0030]2.4培養基中的糖，在大量組培苗生產中，一般可用市售白砂糖，但最好是用蔗糖而不要用甜菜糖；
[0031 ] 2.5用1.0摩爾/升的鹽酸或1.0摩爾/升的氫氧化鈉調節培養基的pH值至5.8 ;
[0032]2.6配制好的培養基要盡快分裝到培養容器中，以免培養基凝固或變稠而難以分裝；
[0033]2.7分裝培養基時應注意避免培養基粘在瓶口上，如果粘有培養基，在蓋瓶蓋或瓶塞前必須用干凈紗布擦凈瓶口。
[0034]3培養基消毒滅菌
[0035]3.1將分裝好的培養基裝于高壓滅菌鍋內消毒；
[0036]3.2加熱初期，當消毒鍋消毒室的氣壓達0.05MPa時，打開冷凝閥，排盡消毒室內冷空氣；
[0037]3.3當消毒室內氣壓達到0.llMPa、溫度達121°C時，開始計時，保持溫度與壓力消毒15-20分鐘；
[0038]3.4關閉加熱電源開關，按慢排氣方式排放熱氣，待消毒室內的氣壓降至大氣壓時打開消毒鍋蓋或門，取出培養基；
[0039]3.5培養基應置于空氣少流動和少灰塵的干凈環境冷卻，否則在降溫進氣過程中導致霉菌孢子進入培養器皿，產生霉菌污染。
[0040]4培養基儲藏
[0041]4.1培養基應盡量現配現用；
[0042]4.2可在空氣干凈且不流動的環境短時間儲藏培養基，但儲藏超過I個月的培養基應廢棄不用。[0043]本發明紅椿組織培養的方法為:
[0044]1.無菌芽的獲取
[0045]選取顆粒飽滿的紅椿種子，在超凈工作臺上用0.1%氯化汞溶液浸泡消毒lOmin，再用無菌水沖洗4-5次。將經消毒處理的種子接種在誘導培養基上進行初始培養，誘導種子發芽以獲取無菌材料。外植體初次培養時，需全暗培養10天左右，再放到弱光下進行培養，大約經過15天左右的種子開始萌芽，然后再移至見光的地方培養。
[0046]2.芽的增殖培養
[0047]將誘導獲得的無菌芽接種至繼代培養基上進行芽的繼代增殖，一般30天左右繼代一次，繼代材料均放在培養室內培養，培養室溫度為(25±2) °C ,光照12h.0-1，光照度20001χο
[0048]3.生根的誘導
[0049]芽條長至約2_3cm時，將較健壯的芽苗由叢生芽上單個切下轉至生根培養基上誘導生根，其余芽苗轉至繼代培養基上繼續進行增殖培養。生根培養需要在弱光下培養15天左右，此時小苗的基部形成白色突起，并逐漸伸長，20天后可形成明顯根系，逐漸長成完整的小植株，此時期宜逐步增加光照使小苗變得粗壯。
[0050]4.生根苗的移栽
[0051]待生根小苗充 分木質化，葉片舒展，葉色濃綠，莖軸伸長，苗高約3_4cm時即可進行大棚移栽。移栽時先取出小苗，洗凈基部的培養基后，移栽于經0.1%高錳酸鉀消毒過用營養袋裝好的育苗基質上，移栽后澆透定根水，保持一定的溫度和濕度，并要定期進行噴藥進行防病處理。
[0052]本發明的優點是:
[0053]1、首次采用組織培養的方法對紅椿進行無性繁殖，該技術比常規通過種子繁殖更快，更能有效保持母本的優良性狀，保證了種苗的質量；
[0054]2、以繼代培養基進行紅椿增殖培養，培養溫度保持在25-28 °C左右，繼代苗年繁殖系數為2.512，繼代苗分化芽多，芽健壯，生長整齊，葉色濃綠；
[0055]3、用生根培養基進行生根苗培養生根率達90.0%，溫度為25-28°C時，培養20天左右可出根，根系發達，平均出根量有4-6條,35天可移栽,移栽成活率達85.0%。
【具體實施方式】
[0056]下面以實施例對本發明作進一步說明，但本發明并不局限于這些實施例。
[0057]實施例1:
[0058]紅椿組織培養的培養基配方，該培養基包括繼代培養基和生根培養基，其中:
[0059]每升(L)繼代培養基的組分及各組分的含量如下:
[0060](I)大量元素:硝酸鉀1267mg/L、硝酸銨1100mg/L、二水氯化鈣293mg/L、七水硫酸鎂247mg/L、磷酸二氫鉀113mg/L、七水硫酸亞鐵27.8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L ；
[0061](2)微量元素:四水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水鑰酸鈉0.25mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L ；
[0062](3)有機物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸吡口多醇(VB6) 0.5mg/L、煙酸
0.5mg/L、鹽酸硫胺素(VBl) 0.lmg/L ；[0063](4)植物生長調節劑:6-芐基腺嘌呤0.4mg/L、萘乙酸0.lmg/L、赤霉素0.6mg/L ；
[0064]余量為蒸懼水。
[0065]每升(L)生根培養基的組分及各組分的含量如下:
[0066](I)大量元素:硝酸鉀950mg/L、硝酸銨825mg/L、二水氯化鈣220mg/L、七水硫酸鎂185mg/L、磷酸二氫鉀85mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L、七水硫酸亞鐵27.8mg/L ；
[0067](2)微量元素:四水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水鑰酸鈉0.25mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L ；
[0068](3)有機物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸吡口多醇(VB6) 0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸硫胺素(VBl) 0.1mg/ ；
[0069](4)植物生長調節劑:吲哚乙酸0.4mg/L ；
[0070]余量為蒸餾水。
[0071]實施例2:
[0072]紅椿組織培養的培養基配方，該培養基包括繼代培養基和生根培養基，其中:
[0073]每升(L)繼代培養基的組分及各組分的含量如下:
[0074](I)大量元素: 硝酸鉀1267mg/L、硝酸銨1100mg/L、二水氯化鈣293mg/L、七水硫酸鎂247mg/L、磷酸二氫鉀113mg/L、七水硫酸亞鐵27.8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L ；
[0075](2)微量元素:四水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水鑰酸鈉0.25mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L ；
[0076](3)有機物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸吡口多醇(VB6) 0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸硫胺素(VB1) 0.lmg/L ；
[0077](4)植物生長調節劑:6_芐基腺嘌呤0.6mg/L、萘乙酸0.2mg/L、赤霉素0.8mg/L ；
[0078]余量為蒸餾水。
[0079]每升(L)生根培養基的組分及各組分的含量如下:
[0080](I)大量元素:硝酸鉀950mg/L、硝酸銨825mg/L、二水氯化鈣220mg/L、七水硫酸鎂185mg/L、磷酸二氫鉀85mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L、七水硫酸亞鐵27.8mg/L ；
[0081](2)微量元素:四水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水鑰酸鈉0.25mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L ；
[0082](3)有機物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸吡口多醇(VB6) 0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸硫胺素(VB1) 0.1mg/ ；
[0083](4)植物生長調節劑:吲哚乙酸0.5mg/L ；
[0084]余量為蒸餾水。
[0085]實施例3:
[0086]紅椿組織培養的培養基配方，該培養基包括繼代培養基和生根培養基，其中:
[0087]每升(L)繼代培養基的組分及各組分的含量如下:
[0088](I)大量元素:硝酸鉀1267mg/L、硝酸銨1100mg/L、二水氯化鈣293mg/L、七水硫酸鎂247mg/L、磷酸二氫鉀113mg/L、七水硫酸亞鐵27.8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L ；
[0089](2)微量元素:四水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水鑰酸鈉0.25mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L ；
[0090](3)有機物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸批口多醇(VB6) 0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸硫胺素(VB1) 0.lmg/L ；
[0091](4)植物生長調節劑:6_芐基腺嘌呤0.8mg/L、萘乙酸0.3mg/L、赤霉素1.0mg/L ；
[0092]余量為蒸餾水。
[0093]每升(L)生根培養基的組分及各組分的含量如下:
[0094](I)大量元素:硝酸鉀950mg/L、硝酸銨825mg/L、二水氯化鈣220mg/L、七水硫酸鎂185mg/L、磷酸二氫鉀85mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L、七水硫酸亞鐵27.8mg/L ；
[0095](2)微量元素:四水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水鑰酸鈉0.25mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L ；
[0096](3)有機物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸吡口多醇(VB6) 0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸硫胺素(VB1) 0.1mg/ ；
[0097](4)植物生長調節劑:吲哚乙酸0.8mg/L ；
[0098]余量為蒸餾水。
[0099]通過以上實施例對紅椿進行組培繁殖，用繼代培養基進行增殖培養，培養溫度保持在25-28°C左右，繼代苗年繁殖系數為2.512，繼代苗分化芽多，芽健壯，生長整齊，葉色濃綠；用生根培養基進行生根苗培養生根率達90.0%，溫度為25-28°C時，培養20天左右可出根，根系發達，平均出根量有4-6條，35天可移栽，移栽成活率達85.0%。采用本發明的技術比通過種子繁殖快，更能有效保持母本的優良性狀，保證了種苗的質量。
【權利要求】
1.一種紅椿組織培養的培養基，該培養基包括繼代培養基和生根培養基，其特征在于: 每升(L)繼代培養基的組分及各組分的含量如下: Cl)大量元素:硝酸鉀1267mg/L、硝酸銨1100mg/L、二水氯化鈣293mg/L、七水硫酸鎂,247mg/L、磷酸二氫鉀113mg/L、七水硫酸亞鐵27.8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L ； (2)微量元素:四水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水鑰酸鈉,0.25mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L ； (3)有機物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸批P多醇(VB6)0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸硫胺素(VBI) 0.lmg/L ； (4)植物生長調節劑:6-芐基腺嘌呤0.4-0.8mg/L、萘乙酸0.1-0.3mg/L、赤霉素,0.6-1.0mg/L ； 余量為蒸餾水； 每升(L)生根培養基的組分及各組分的含量如下: Cl)大量元素:硝酸鉀950mg/L、硝酸銨825mg/L、二水氯化鈣220mg/L、七水硫酸鎂,185mg/L、磷酸二氫鉀85mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L、七水硫酸亞鐵27.8mg/L ； (2)微量元素:四水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水鑰酸鈉,0.25mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L ； (3)有機物:肌醇100mg /L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸批P多醇(VB6)0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸硫胺素(VB1) 0.1mg/ ； (4)植物生長調節劑:吲哚乙酸0.4-0.8mg/L ； 余量為蒸餾水。
【文檔編號】A01H4/00GK103798144SQ201410071750
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年2月28日 優先權日:2014年2月28日
【發明者】何貴整, 陳麗文, 陳乃明, 蔡林, 梁剛, 時群, 樊東函, 鐘煥禎, 王華宇, 楊利平, 韋冬玲 申請人:欽州市林業科學研究所