一種毛茛鐵線蓮組培快繁的方法
【專利摘要】本發明提供一種毛茛鐵線蓮組培快繁的方法，經過獲取無菌原材料、對芽進行誘導、不定芽增殖培養、生根培養及植株煉苗與移栽，最終獲得毛茛鐵線蓮植株。本方法能快速繁殖毛茛鐵線蓮，育苗周期短，能快速得到毛茛鐵線蓮植株，成活率高達90%以上，繁殖系數高，而且不受外界條件的限制，四季皆可進行，節約育苗占地面積，可在短期內形成大量優良試管苗，可進行規模化生產。
【專利說明】一種毛茛鐵線蓮組培快繁的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種植物組培快繁的方法，尤其是一種毛茛鐵線蓮組培快繁的方法， 屬于植物組織培養【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 毛茛鐵線蓮（67ra/wflcWoiofes Franclx )為毛茛科草質藤本植物，分布于 我國西南地區。花朵密集，紫紅色，花期9月至10月，正值國慶中秋開放，具有較高觀賞性， 可作為盆栽花卉或攀援綠化植物。同時，全草入藥，可治療多種疾病。因此，毛茛鐵線蓮是 極具開發價值的藥用觀賞植物。
[0003] 然而，現有技術中，毛茛鐵線蓮多為自然生長繁育，尚未見到公開報道有關毛茛鐵 線蓮組培快繁的方法。若要高效、快速得到這一具有藥用價值的毛茛鐵線蓮，有必要研發毛 茛鐵線蓮組培快繁的技術，以實現毛茛鐵線蓮育苗周期短，快速得到毛茛鐵線蓮植株，同時 保持母本優良性狀等優點。
【發明內容】
[0004] 為解決毛茛鐵線蓮的自然繁育周期長，難以適應藥用需求，本發明提供一種毛茛 鐵線蓮組培快繁的方法，以實現毛茛鐵線蓮的育苗周期短，使人們能快速得到毛茛鐵線蓮 植株。
[0005] 本發明通過下列技術方案完成：一種毛茛鐵線蓮組培快繁的方法，其特征在于經 過下列各步驟： (1) 切取毛茛鐵線蓮的嫩芽，用水沖洗lh，再依次用體積濃度為75%的乙醇浸泡25? 35s、用濃度為1%。的升汞浸泡5?lOmin，然后用無菌水沖洗3?5次后吸干表面水分，取 嫩芽基部切成lcm，再接種于芽誘導培養基上：MS+6-BA 1. 5?2. 5mg/L+NAA 0. 4?0. 6mg/ L+AgN03 2. 5?3. 5mg/L，在溫度為22?26°C、光照強度為1500?2000Lx、相對濕度為65? 75%的條件下進行培養； (2) 待步驟（1)嫩芽的芽基部開始膨大并出現黃綠色突起時，再繼續培養20?25天后 出現明顯的愈傷組織，然后繼續培養30?35天，直至愈傷組織長出小芽； (3) 切下步驟（2)帶芽的愈傷組織接種于不定芽增殖培養基上：MS+BA 1. 5?2. 5mg/ L+NAA 0. 04?0. 06mg/L，在溫度為22?26°C、光照強度為1500?2000Lx、相對濕度為 65?75%的條件下進行培養，使不定芽增殖，直至不定芽長到2?3cm ; (4) 取步驟（3)高為2?3cm、生長健壯的不定芽植株，將其轉接入生根培養基中： 1/2MS+IBA 0· 4 ?0· 6mg/L+NAA 0· 9 ?1. lmg/L+AC 0· 1 ?0· 25g/L，在溫度為 22 ?26°C、 光照強度為1500?2000Lx、相對濕度為65?75%的條件下進行誘導生根，30天后植株幼 苗的基部分化出白色的根原基，直至根原基長至3?5cm，得到生根苗； (5) 取步驟（4 )生長健壯的生根瓶苗于室內揭開封口膜過渡3?8天，取出后洗凈根 部，移栽于大棚中馴化25?35天，然后再移栽至室外并給予適當肥水管理，即得到毛茛鐵 線蓮植株。
[0006] 本發明與現有技術相比具有下列優點和效果：本方法能快速繁殖毛茛鐵線蓮，育 苗周期短，能快速得到毛茛鐵線蓮植株，成活率高達90%以上，繁殖系數高，而且不受外界 條件的限制，四季皆可進行，節約育苗占地面積，可在短期內形成大量優良試管苗，可進行 規模化生產。
【具體實施方式】
[0007] 下面結合實施例對本發明做進一步描述。
[0008] 實施例1 (1) 切取毛茛鐵線蓮的嫩芽，用水沖洗lh，在超凈工作臺上依次用體積濃度為75%的乙 醇浸泡25s、用濃度為1%。的升汞浸泡5min，然后用無菌水沖洗3次后吸干表面水分，取嫩 芽基部切成lcm，污染率為92%，再接種于芽誘導培養基上：MS+6-BA 1. 5mg/L+NAA 0. 5mg/ L+AgN03 3mg/L，在溫度為24°C、光照強度為1500Lx、相對濕度為70%的條件下進行培養； (2) 待步驟（1)嫩芽的芽基部開始膨大并出現黃綠色突起時，再繼續培養20天后出現 明顯的愈傷組織，然后繼續培養30天，直至愈傷組織長出小芽，誘導率64% ; (3) 切下步驟（2)帶芽的愈傷組織接種于不定芽增殖培養基上：MS+BA 1. 5mg/L+NAA 0. 05mg/L，在溫度為26°C、光照強度為1800Lx、相對濕度為75%的條件下進行培養，使不定 芽增殖，直至不定芽長到2?3cm，20d的增殖率為6. 8倍； (4) 取步驟（3)高為2?3cm、生長健壯的不定芽植株，將其轉接入生根培養基中： 1/2MS+IBA 0.5mg/L+NAA lmg/L+AC 0.1g/L，在溫度為 26°C、光照強度為 1500x、相對濕度 為65%的條件下進行誘導生根，30天后植株幼苗的基部分化出白色的根原基，直至根原基 長至3?5cm，得到生根苗，生根率35% ; (5) 取步驟（4 )生長健壯的生根瓶苗于室內揭開封口膜過渡5天，取出后洗凈根部，移 栽于塑料大棚中馴化30天，然后再移栽至室外并給予適當肥水管理，即得到毛茛鐵線蓮植 株，成活率92%。
[〇〇〇9] 實施例2 (1) 切取毛茛鐵線蓮的嫩芽，用水沖洗lh，再依次用體積濃度為75%的乙醇浸泡30s、用 濃度為1%。的升汞浸泡8min，然后用無菌水沖洗4次后吸干表面水分，取嫩芽基部切成lcm， 污染率為32. 5%，再接種于芽誘導培養基上：MS+6-BA 2mg/L+NAA 0· 4mg/L+AgN03 3. 5mg/L， 在溫度為22°C、光照強度為1700Lx、相對濕度為65%的條件下進行培養； (2) 待步驟（1)嫩芽的芽基部開始膨大并出現黃綠色突起時，再繼續培養22天后出現 明顯的愈傷組織，然后繼續培養33天，直至愈傷組織長出小芽，誘導率83% ; (3) 切下步驟（2)帶芽的愈傷組織接種于不定芽增殖培養基上：MS+BA 2mg/L+NAA 0. 04mg/L，在溫度為24°C、光照強度為1500Lx、相對濕度為70%的條件下進行培養，使不定 芽增殖，直至不定芽長到2?3cm，20d的增殖率為11. 5倍； (4) 取步驟（3)高為2?3cm、生長健壯的不定芽植株，將其轉接入生根培養基中： 1/2MS+IBA 0.4mg/L+NAA 1. lmg/L+AC 0.15g/L，在溫度為 24°C、光照強度為 1700Lx、相對 濕度為70%的條件下進行誘導生根，30天后植株幼苗的基部分化出白色的根原基，直至根 原基長至3?5cm，得到生根苗，生根率60% ;
【權利要求】
1. 一種毛茛鐵線蓮組培快繁的方法，其特征在于經過下列各步驟： (1) 切取毛茛鐵線蓮的嫩芽，用水沖洗lh，再依次用體積濃度為75%的乙醇浸泡25? 35s、用濃度為1%。的升汞浸泡5?lOmin，然后用無菌水沖洗3?5次后吸干表面水分，取 嫩芽基部切成lcm，再接種于芽誘導培養基上：MS+6-BA 1. 5?2. 5mg/L+NAA 0. 4?0. 6mg/ L+AgN03 2. 5?3. 5mg/L，在溫度為22?26°C、光照強度為1500?2000Lx、相對濕度為65? 75%的條件下進行培養； (2) 待步驟（1)嫩芽的芽基部開始膨大并出現黃綠色突起時，再繼續培養20?25天后 出現明顯的愈傷組織，然后繼續培養30?35天，直至愈傷組織長出小芽； (3) 切下步驟（2)帶芽的愈傷組織接種于不定芽增殖培養基上：MS+BA 1. 5?2. 5mg/ L+NAA 0. 04?0. 06mg/L，在溫度為22?26°C、光照強度為1500?2000Lx、相對濕度為 65?75%的條件下進行培養，使不定芽增殖，直至不定芽長到2?3cm ; (4) 取步驟（3)高為2?3cm、生長健壯的不定芽植株，將其轉接入生根培養基中： 1/2MS+IBA 0· 4 ?0· 6mg/L+NAA 0· 9 ?1. lmg/L+AC 0· 1 ?0· 25g/L，在溫度為 22 ?26°C、 光照強度為1500?2000Lx、相對濕度為65?75%的條件下進行誘導生根，30天后植株幼 苗的基部分化出白色的根原基，直至根原基長至3?5cm，得到生根苗； (5) 取步驟（4 )生長健壯的生根瓶苗于室內揭開封口膜過渡3?8天，取出后洗凈根 部，移栽于大棚中馴化25?35天，然后再移栽至室外并給予適當肥水管理，即得到毛茛鐵 線蓮植株。
【文檔編號】A01H4/00GK104082152SQ201410379137
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年8月4日 優先權日:2014年8月4日
【發明者】李葉芳, 李枝林, 關文靈, 牛紅彬 申請人:云南農業大學