一種臺灣榿木的組織快繁方法
【專利摘要】本發明提供了一種臺灣榿木組織培養方法，包括莖段無菌體系建立、增殖繼代培養、生根培養、煉苗移栽，增殖繼代培養基包括0.5mg/L6-BA、0.15mg/LKT、0.2mg/LIBA；生根培養的培養基配方包括0.2mg/L的IBA、0.2mg/L的NAA、0.2mg/L的IAA。本發明為臺灣榿木優質種苗的快速繁殖提供一條有效途徑，其增殖系數較高，誘導的不定芽多而健壯，長勢好無玻璃化現象，有利于生根和移栽，本發明的生根率和煉苗成活率等技術參數已能達到很高水平。
【專利說明】一種臺灣榿木的組織快繁方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于組織培養的植物再生領域，特別涉及臺灣榿木的組織培養方法。
【背景技術】
[0002] 近年來，隨著重慶的經濟快速發展和人們對木材產品的消費增加，木材、紙漿等原 料的需求大增，而重慶本地木材原料的供給缺口很大。為了滿足木材加工產業的需要，重慶 一直以引進的速生桉和楊樹為主大力發展短周期工業原料林，但是桉樹原產熱帶，其耐寒 性和對堿性紫色土的適應性較差,渝東南、三峽庫區海拔IOOOm以上和渝西大面積的紫色 土地區不適合發展速生桉樹種；而長期的試驗研究也表明楊樹在重慶的生長受到立地條件 的很大限制，不適合大面積推廣和發展。因此研究開發出鄉土、適生范圍廣、以用材為主要 目的的樹種，成了木材加工業產業鏈攻關任務中的首要環節。
[0003] 臺灣棺木（Alnus formosana. Makino)為樣木科（Betulaceae)棺木屬（Alnus B. Ehm)的落葉闊葉大喬木，為非豆科菌根樹種，原產于中國臺灣，是國際公認的優良工業原 料林樹種。臺灣榿木適應性強、速生、材質好，適應在堿性紫色土環境生長，耐寒性較強，根 系發達且有根瘤，具有較強的固氮能力，種植后還可改良土壤。栽植試驗表明，相同立地條 件下，臺灣榿木和楊樹兩者樹高生長無明顯差異，而榿木平均胸徑比楊樹大1/3以上，臺灣 榿木整體的生產量和生長速度高于楊樹。其優良的特性正好能夠彌補目前我市速封林發展 中的一些不足，在重慶地區將有很大的推廣和發展空間，是一種十分重要的用材樹種，很有 開發利用價值。引種臺灣榿木，不僅可豐富我國南方人工闊葉林種類，改良土壤，治理環境， 而且有較高的經濟價值，具有廣闊的推廣前景。臺灣榿木在重慶、福建、四川等南方廣大地 區得到迅速推廣。目前，臺灣榿木繁殖主要采用實生苗繁殖，其遺傳保守性弱，個體差異大， 育苗受季節限制，且難以對優株進行快速繁殖，已不能滿足市場對優質臺灣榿木種苗的需 求。
【發明內容】
[0004] 單靠實生苗繁殖已不能滿足市場對優質臺灣榿木種苗的需求，本發明的目的在于 提供一種有效方法實現臺灣榿木的規模化育苗。
[0005] 本發明的目的是通過以下措施實現的：
[0006] -種臺灣榿木組織快繁的方法，步驟包括無菌體系建立、增殖培養、生根培養、煉 苗移栽，其特征在于：增殖繼代培養基包括〇. 5mg/L的6-BA(6-芐氨基腺嘌呤）、0. 15mg/L 的KT (激動素）、0. 2mg/L的IBA (吲哚丁酸），pH值為5. 8。進一步地，所述增殖培養基還包 括 MS (Murashige and Skoog Stock)培養基、30g/L 鹿糖和 7g/L 卡拉膠，調節 pH 值至 5. 8。 激素是植物組織培養中的必需物質，同不定芽的誘導密切相關。不同激素組合對不同植株 的不定芽誘導的影響不同。本發明的增殖培養基配方不僅有利于提高榿木的增殖系數，同 時誘導的不定芽多而效果佳，長勢好無玻璃化現象，有利于生根和移栽，提高存活率和存活 質量。
[0007] 上述生根培養的培養基配方包括0. 2mg/L的IBA (吲哚丁酸）、0. 2mg/L的NAA (萘 乙酸）、0. 2mg/L的IAA(卩引哚乙酸）。進一步的，生根培養基還包括1/2MS培養基、30g/L蔗 糖，PH值為5. 8。使植株有效生根，30天生根率可達90%，且生根的條數、粗壯度均良好，根 系平均數量為7. 8條，植株葉片油綠，長勢好。
[0008] 上述無菌體系建立，采用0. 1 %升汞處理7min后，75%酒精處理10s，再1. 5%濃度 的CaCl2處理。外植體滅菌時間和滅菌方式對外植體滅菌成活率影響較大，以無菌CaCl 2 (氯 化鈣）溶液能降低褐化率。本發明組織快繁的外植體為臺灣榿木頂部帶芽莖段，帶芽莖段 長度為〇. 8?I. 5cm。臺灣棺木組培快繁技術的難點在于莖段外植體無菌體系建立。棺木 莖段的表面有絨毛，且有2枚芽鱗，滅菌難度較大。同時，以榿木莖段為外植體易產生褐化， 易造成植株死亡。本發明以春季即將萌動的幼嫩頂芽為最佳外植體，植株的苗齡越小越有 利于后續外植體增殖啟動誘導。
[0009] 本發明所述臺灣榿木的組培快繁方法，是通過對臺灣榿木的離體培養，建立起臺 灣榿木的快速繁殖體系，包括以下步驟：
[0010] (1)外植體無菌體系建立：用枝剪快速剪下〇. 8?I. 5cm頂部帶芽莖段，流水沖洗 15min，備用；在超凈工作臺上滅菌，采用0. 1%升汞處理7min+75%酒精處理lOs+1. 5%濃 度的CaC12沖洗，滅菌后轉接入MS(Murashige and Skoog Stock)空白培養基。莖段外植 體成活率為9. 1%。
[0011] (2)增殖繼代培養：將成活的莖段外植體轉入增殖繼代培養基，增殖繼代培養 基為MS培養基+蔗糖30g/L+卡拉膠7g/L+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤）0. 5mg/L+KT (激動 素）0. 15mg/L+IBA (吲哚丁酸）0. 2mg/L，pH值為5. 8。增殖系數平均為3. 4,葉色正常，植 株無畸形，無玻璃化現象，繼代周期為30天。
[0012] (3)生根培養：將增殖培養獲得的叢生芽轉接入生根培養基，生根培養基為 1/2MS 培養基 + 蔗糖 30g/L+IBA(吲哚丁酸）0· 2mg/L+NAA(萘乙酸）0· 2mg/L+IAA(吲哚乙 酸）0.2mg/L，PH值為5. 8。30天生根率可達90%，根系平均數量為7. 8條。
[0013] (4)煉苗移栽：將生根苗置于溫室中不揭封口薄膜煉苗1周，1周后去掉封口膜， 在瓶內加入少許自來水（為防止長菌），置于通風良好的環境中繼續煉苗4-5天；煉苗結束 后，取出幼苗，用清水洗去根系表面附著的培養基，800倍多菌靈浸泡20min-30min，將生根 苗移栽到輕基質（菇渣：蛭石：珍珠巖=2 : I : 1)中生長，移栽成活率為89. 6%。煉苗 及苗期管護是移栽成功的關鍵。組培培養室溫度為26±2°C，光照時間為12個小時，光照強 度 20001x。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0014] 圖1為滅菌成活的外植體的照片圖
[0015] 圖2為增殖繼代培養階段的照片圖
[0016] 圖3為生根培養階段的照片圖
[0017] 圖4為煉苗移栽成活后植株照片圖 [0018] 有益效果
[0019] 1.本發明為臺灣榿木優質種苗的快速繁殖提供一條有效途徑，其生根率煉苗成活 率及存活質量，短時間內植株的高度、粗度等技術參數已能達到很高水平。
[0020] 2.本發明榿木的增殖系數較高，誘導的不定芽多而健壯，長勢好無玻璃化現象，有 利于生根和移栽，提高存活率和存活質量。植株有效生根，且生根的條數、粗壯度均良好，植 株葉片油綠，長勢好。
【具體實施方式】
[0021] 下面通過實施例對本發明進行具體描述，有必要在此指出的是以下實施例只是用 于對本發明進行進一步的說明，不能理解為對本發明保護范圍的限制，該領域的技術熟練 人員根據上述
【發明內容】
所做出的一些非本質的改進和調整，仍屬于本發明的保護范圍。
[0022] 實施例1
[0023] 1.材料處理
[0024] 選取春季快速生長的頂芽為外植體，用枝剪快速剪下Icm帶芽莖段，流水沖洗 15min，備用；在超凈工作臺上滅菌，采用0. 1 %升汞浸泡處理7min后，75 %酒精浸泡處理 10s，再1. 5%濃度的CaCl2沖洗，滅菌后轉接入MS空白培養基，附加蔗糖30g/L，卡拉膠7g/ L，調節pH值至5. 8。莖段外植體成活率9.1%。
[0025] 接種100瓶，每瓶1株，3次重復。培養室溫度為26±2°C，光照時間為12個小時， 光照強度20001x。培養20天后，統計成活率。滅菌成活的植株如圖1所示。
【權利要求】
1. 一種臺灣榿木組織快繁的方法，步驟包括無菌體系建立、增殖培養、生根培養、煉苗 移栽，其特征在于：增殖繼代培養基包括〇. 5mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、0. 15mg/L激動素、 0· 2mg/L Π引哚丁酸。
2. 如權利要求1所述的臺灣榿木組織快繁的方法，所述增殖培養基還包括MS培養基、 30g/L鹿糖和7g/L卡拉膠，調節pH值至5. 8。
3. 如權利要求1或2所述的臺灣榿木組織快繁的方法，所述生根培養的培養基配方包 括0· 2mg/L的吲哚丁酸、0· 2mg/L的萘乙酸、0· 2mg/ L的吲哚乙酸。
4. 如權利要求3所述的臺灣榿木組織快繁的方法，生根培養基還包括1/2MS培養基、 30g/ L蔗糖，PH值為5.8。
5. 如權利要求1-4任一所述的臺灣棺木組織快繁的方法，采用0. 1%升萊處理7min 后，75%酒精處理10s，再1. 5%濃度的CaCl2處理。
6. 如權利要求1-5任一所述的臺灣榿木組織快繁的方法，所述組織快繁的外植體為 臺灣榿木頂部帶芽莖段，帶芽莖段長度為〇. 8?1. 5cm。
7. 如權利要求1所述的臺灣榿木組織快繁的方法，包括以下步驟： (1) 無菌體系建立：用枝剪快速剪下〇. 8?1. 5cm頂部帶芽莖段，流水沖洗15min，備 用；在超凈工作臺上滅菌，采用〇. 1%升汞處理7min后，75%酒精處理10s，再1.5%濃度的 CaCl2沖洗，滅菌后轉接入MS空白培養基； (2) 增殖繼代培養：將成活的莖段外植體轉入增殖繼代培養基，增殖繼代培養基為MS 培養基、鹿糖30g/ L、卡拉膠7g/L、0.5mg/ L6-節氨基腺噪呤、0.15 mg/L激動素、0.2 mg/ L吲哚丁酸，pH值為5. 8; (3) 生根培養：將增殖培養獲得的叢生芽轉接入生根培養基，生根培養基為1/2MS培養 基+蔗糖30g/L、0. 2mg/L吲哚丁酸、0· 2mg/L萘乙酸、0· 2mg/L吲哚乙酸，PH值為5. 8 ; (4) 煉苗移栽：將生根苗置于溫室中不揭封口薄膜煉苗1周，1周后去掉封口膜，在瓶內 加入少許自來水，置于通風良好的環境中繼續煉苗4-5天；煉苗結束后，取出幼苗，用清水 洗去根系表面附著的培養基，800倍多菌靈浸泡20min-30min，將生根苗移栽到輕基質(菇 渣：蛭石：珍珠巖=2 :1 :1)中生長，培養溫度為26±2°C，光照時間為12個小時，光照強度 2000 lx〇
【文檔編號】A01H4/00GK104285792SQ201410520846
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月30日 優先權日:2014年9月30日
【發明者】張宏, 朱恒星, 馮大蘭, 楊燦 申請人:重慶市林業科學研究院, 張宏