一種快速生產輪蟲及其休眠卵的方法
【專利摘要】本發明涉及一種利用淡水魚類浸出液快速生產淡水輪蟲及其休眠卵的方法。該方法是利用魚類浸出液快速生產輪蟲及其休眠卵，所述魚類浸出液為淡水魚類尸體或內臟廢棄物經過曝氣自來水自然腐爛潰解后的濾液。采用曝氣自來水自然光照和室溫人工配制魚類浸出液、按照浸出液比例配制餌料微藻和輪蟲液體通用培養基、輪蟲食物為淡水小球藻。連續充氣、持續光照方法，快速生產淡水輪蟲和休眠卵。該方法能方便，快速，經濟的收集到大量的淡水輪蟲及其休眠卵，用于魚類開口餌料和其他研究。適合實驗室研究和水產開口生物餌料生產。該方法簡方便，快速，經濟，便于使用。
【專利說明】-種快速生產輪蟲及其休眠卵的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于水產學科生物【技術領域】，具體是涉及一種利用淡水魚類尸體或其內臟 制備浸出液用W快速生產輪蟲的方法。
【背景技術】
[0002] 輪蟲（rotifer)是淡水生態系統主要功能群，95% W上魚類和郵蟹類苗種期間早 期開口生物巧料，也是環境污染風險評價最適受試動物。目前漁業生產上培育輪蟲主要采 用有機服先期培服水質的方法生產輪蟲作為育苗開口生物巧料，輪蟲產量穩定性和輪蟲高 峰期維持時間難W控制，制約了輪蟲商品化發展。本發明利用淡水魚類尸體殘骸或其內臟 廢棄物制備浸出液替代有機服快速生產輪蟲及其休眠卵的方法。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的是提供一種快速生產輪蟲及其休眠卵的方法。
[0004] 本發明所提供的快速生產輪蟲及其休眠卵的方法，是利用魚類浸出液快速生產輪 蟲及其休眠卵；包括；魚類浸出液的制備、透明玻璃水族箱、淡水輪蟲克隆挑選、輪蟲巧料 微藻培養、輪蟲的生產和休眠卵的收集。魚類浸出液制備所指魚類為淡水魚類或魚類內臟、 淡水輪蟲為彎花臂尾輪蟲、藻類為小球藻。
[0005] 本發明中所指魚類浸出液；具體如下；淡水魚類尸體50kg，在自來水中漂洗干凈 后，放入10化的自來水，放置透明玻璃水槽中，加入4ppm敵百蟲防止禍姐發生，加透明玻 璃蓋密閉，在28-35C下曝曬20-30天。每天攬動2-3次。待魚組織自然腐爛潰解后，利用 200目篩絹或篩網過濾，剔除有型固體，沉淀2化，取上清，在12CTC下滅菌，再靜置12h，取上 清液，常溫、密閉、避光保存。
[0006] 本發明中所指淡水輪蟲的快速生產。特征如下；魚類浸出液和自來水l:50(v/v) 稀釋，W升為單位，另加入過磯酸巧30g/m 3、硫酸饋lOg/m3和尿素lOg/m3。用HC1和化OH調 節抑值7. 0-7. 5左右。接入小球藻，密度為IxlO6個細胞/毫升、接種輪蟲，密度1. 0個/ ml。常溫、連續充氣、自然光照培養液。7化后通過200目篩絹收集輪蟲成體。
[0007] 本發明所指生產輪蟲休眠卵的方法。特征為；輪蟲生產經過12化后，當輪蟲培養 液泛黃，小球藻消耗殆盡時，通過200目篩絹，過濾收集輪蟲成體后，再將水族箱底下藻類 和休眠卵混合物殘渣經過雙層300目篩絹過濾收集，混合物經自來水流水反復沖洗，刮取 網中休眠卵。休眠卵經自然風干，4C下避光保存。
[0008] 本發明的原理為；魚類浸出液經強光暴曬處理，有機物轉化為無機物，作為輪蟲巧 料微藻食物，直接生產輪蟲巧料微藻，保證巧料微藻的營養需求，達到快速生產輪蟲生殖所 需營養。快速增加的輪蟲密度達到一定密度后，誘發輪蟲有性生殖，形成休眠卵，實現快速 生產輪蟲和輪蟲休眠卵目的。該方法操作簡便，快速，經濟，便于應用。
【具體實施方式】
[0009] 在本發明中所使用的術語，除非有另外說明，一般具有本領域普通技術人員通常 理解的含義。
[0010] 下面結合具體實施例，并參照數據進一步詳細地描述本發明。應理解，該些實施例 只是為了舉例說明本發明，而非W任何方式限制本發明的范圍。
[0011] 在W下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。 所用試劑的來源、商品名W及有必要列出其組成成分者，均在首次出現時標明，其后所用相 同試劑如無特殊說明，均W首次標明的內容相同。
[0012] 實施例中所說的輪蟲是從養殖水體挑選的單個體，室內"克隆"培養分離培養獲 得。
[0013] 實施例一：側魚浸出液制備快速生產輪蟲
[0014] 1.淡水纏魚尸體50kg，在自來水中漂洗干凈后，放入10化的自來水，放置透明玻 璃水槽中，加入4ppm敵百蟲防止禍姐發生，加透明玻璃蓋密閉，在28-35C下曝曬20-30天。 每天攬動2-3次。待魚組織自然腐爛潰解后，利用200目篩絹或篩網過濾，剔除有型固體， 沉淀2化，取上清，在12CTC下滅菌，再靜置12h，取上清液，常溫、密閉、避光保存。
[0015] 2.輪蟲培養液配制備；取魚類浸出液，按照1:100 (v/v)配制魚類浸出液稀釋液。 添加過磯酸巧30g/m3、硫酸饋lOg/m3和尿素lOg/m 3。
[001引 3.輪蟲單個體"克隆"系培養；96孔培養板，每孔加入輪蟲培養液1. 5ml，息浮液藻 類密度lxl06個細胞/毫升。池塘揚取輪蟲，挑選1個攜帶非混交雌體個體，轉移到微孔板 中。連續光照，25 °C培養36小時。
[0017] 4."克隆"系擴大培養：從3中挑取一個無有性生殖個體形成的克隆個體，轉移到 加有75ml培養基和藻類息浮液的100ml H角燒瓶中擴大培養。
[0018] 5.輪蟲快速培養：取化H角燒瓶，加入化人工配制的無機培養液EPA作為對照， EPA 配方每升含有 N址C〇396mg、CaS〇4. 2&0 60mg、M拆〇4. 7&0 123mg、KCl 4mg。根據需要利 用肥1和化0H調節抑值7. 5左右。另取化H角燒瓶，加入化魚類浸出液配制的輪蟲培 養液。接種輪蟲起始密度均為1.0個/ml。自然光照，室溫。
[001引表1 ;輪蟲種群密度（個/mU
[0020]
【權利要求】
1. 一種快速生產輪蟲及其休眠卵的方法，其特征在于，利用魚類浸出液快速生產輪蟲 及其休眠卵，所述魚類浸出液為淡水魚類尸體或內臟廢棄物經過曝氣自來水自然腐爛潰解 后的濾液。
2. 根據權利1要求所說的快速生產輪蟲及其休眠卵的方法，其特征在于，所述魚類浸 出液的制備方法為：淡水魚類或魚類內臟50kg，用自來水中漂洗干凈后，放入100L曝氣過 的自來水，放置透明玻璃水槽中，加入4ppm敵百蟲防止蠅蛆發生，加透明玻璃蓋密閉；在 28-35°C下自然光照曝曬，每天攪動2-3次；20天后，剔除固體殘骸，經300目篩絹過濾，煮 沸，常溫避光保存。
3. 根據權利1要求所說的快速生產輪蟲及其休眠卵的方法，其特征在于，透明玻璃水 族箱中加入經過稀釋的魚類浸出液和曝氣自來水1:100 (v/V)，添加過磷酸鈣30g/m3、硫 酸銨10g/m3和尿素10g/m3制備餌料微藻和輪蟲通用培養液；利用HC1和NaOH調節pH值 7. 0-7. 5 ;接入餌料微藻；接種輪蟲，常溫、連續充氣、自然光照培養。
4. 根據權利2要求所說的快速生產輪蟲及其休眠卵的方法，其特征在于，輪蟲休眠卵 快速生產特征為：餌料微藻和輪蟲同容器培養120h，當培養液顏色泛黃，小球藻消耗殆盡 時，通過200目篩絹，過濾收集輪蟲成體，獲得活體輪蟲；將水族箱底下藻類和休眠卵混合 物殘渣移出，放在雙層300目篩絹網中，自來水流水反復沖洗，刮取網中休眠卵；休眠卵經 自然風干，4°C下避光保存。
【文檔編號】A01K67/033GK104396896SQ201410750964
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年12月9日 優先權日:2014年12月9日
【發明者】楊家新 申請人:南京師范大學