利用蘭花根菌栽培公石松的方法
【專利摘要】本發明提供利用蘭花根菌栽培公石松的方法，將蘭花菌根用自來水清洗干凈，用75%的酒精進行表面消毒，在超凈工作臺上切取瘤狀組織，移入真菌平板培養基待菌絲長出，提取菌絲移入相同平板培養基進行提純培養；在25?30℃培養7?8天菌絲長滿平板培養基，切割平板上菌絲塊接種到混合菌培養菌袋；在24?28℃條件下培養35?40天待菌絲長透菌袋；將菌絲長透菌袋與種植過蘭花的基料混合，作為公石松栽培基質；再將公石松組織培養苗接種到基質中進行培養。本發明以野生公石松經過組織培養的苗，采用種植過蘭花基料加入人工培養的內生真菌混合基質栽培公石松，能明顯的促進植株增高增重和提高產品質量，從而更好地開發利用公石松的藥用價值。
【專利說明】
利用蘭花根菌栽培公石松的方法
技術領域
[0001]本發明屬于植物栽培領域，具體涉及一種利用蘭花根菌栽培公石松的方法。
【背景技術】
[0002]公石松:蘭科植物血葉蘭Ludisia discolor ( Ker-Gawl.) A.Rich.，是閩南民間頗具地方特色的一味草藥。具有清熱涼血、生津降火、利水通絡、止咳等功效，可用于治療高燒不退、咽喉腫痛、無名腫痛、脾胃病和炎癥等。《中華本草》記載其功效潤肺、健脾、安神，主治肺結核咳血、神經衰弱、食欲不振”。公石松對生長環境要求較苛刻，常常生長在陰濕的巖石縫中，生長地多為較豐富的內生真菌。其生長過程需要與真菌形成共生關系。
[0003]人工栽培情況根據部分經銷商對公石松鮮活植株進行人工試種栽培的調查情況，因公石松對生長環境要求較苛刻，沒有較權威的成熟技術可以參考，很少有人進行栽培試種研究人工種植技術.市面銷售的公石松一般是通過進貨鮮活植株，以沙培、水培、土培三種形式進行短期栽培.沙培以其透氣性好、礦質營養充分、積水少不會爛根等優點而為多數人使用，但普遍技術含量低，生物產量增長不明顯.且沙培并不是用來規模化育苗，而主要是用來適當延長新鮮植株生命周期，根據銷量安排鮮活植株的供貨，以保證能長期不問斷供貨.在生產實踐中，目前還沒有對其運用扦插、組織培養等無性繁殖技術進行規模化育苗的先例。
[0004]由于公石松自然繁殖力差，我們采用組培技術快繁種苗，因組培苗處于無菌狀態下生長，在移植栽培時不能很好地利用自身根部來吸收土壤中營養物質，生長緩慢，利用種植過蘭花基料(其基料比較適合內生真菌繁殖)加入人工培養的內生真菌混合基質栽培公石松，真菌侵入公石松根部后可形成一個共生的菌根系統，為公石松的生長發育提供相關的營養物質，本發明以野生公石松經過組織培養的苗，采用種植過蘭花基料加入人工培養的內生真菌混合基質栽培公石松，能明顯的促進植株增高增重和提高產品質量，從而更好地開發利用公石松的藥用價值。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于提供一種利用蘭花根菌栽培公石松的方法，本發明以野生公石松經過組織培養的苗，采用種植過蘭花基料加入人工培養的內生真菌混合基質栽培公石松，能明顯的促進植株增高增重和提高產品質量，從而更好地開發利用公石松的藥用價值。
[0006]為實現上述目的，本發明采用如下技術方案:
利用蘭花根菌栽培公石松的方法，包括如下步驟:
(I)共生菌分離培養;蘭花菌根用自來水清洗干凈，用體積分數為75%的酒精進行表面消毒，在超凈工作臺上切取瘤狀組織，移入真菌平板培養基待菌絲長出，提取菌絲移入相同平板培養基進行提純培養;在25-30 °C培養7-8天菌絲長滿平板培養基，切割平板上菌絲塊接種到混合菌培養菌袋;在24-28Γ條件下培養35-40天待菌絲長透菌袋;將菌絲長透菌袋與種植過蘭花的基料混合，作為公石松栽培基質； (2)公石松種植栽培；當公石松組織培養苗長自3-3.5cm從培養瓶取出，用自來水把根部培養基沖洗干凈;在公石松栽培基質上面鋪一層Icm黃土壤，把洗凈的公石松組織培養苗種植在基質上，澆透水放在沒有陽光直射的地方，保持85%濕度;經過50-60天栽培，根部明顯看到根瘤狀菌根。
[0007]所述的混合菌培養菌袋成分為:木肩87-88%、玉米粉2-3%、石灰粉0.5-1%、麥皮麩7_8%、蔗糖0.5-1%。步驟(I)中菌絲長透菌袋與種植過蘭花的基料混合的重量比例為1:30。
[0008]所述的真菌平板培養基成分為:蛋白胨5.0g/L、牛肉膏3.0g/L、瓊脂20.0g/L。
[0009]本發明的優點在于:
本發明以野生公石松經過組織培養的苗，采用種植過蘭花基料(目前大規模種植文心蘭主要采用小石頭和樹皮混合基質(圖5)，種植過程需要定期更換基料)加入人工培養的內生真菌混合基質栽培公石松。這樣本發明能夠充分利用廢物種植公石松，大大降低種植成本。有效地快繁和規模栽培公石松，從而更好地開發利用公石松的藥用價值。
[0010]該發明實現了無菌條件下的種苗快繁和高效栽培，成活率達到90%以上，種植120天單株重比普通基質提高30%左右。克服普通基質容易爛根現象，從而解決了公石松自然繁殖力差所導致的自然界野生資源匱乏的問題。讓這具有悠久應用歷史、藥效確切的中草藥更好地開發利用，填補了無性繁殖技術和高效栽培的技術研究。為公石松人工栽培開辟一條全新模式。
【附圖說明】
[0011]圖1內生真菌菌絲。
[0012]圖2公石松菌根切片可見內生真菌。
[0013]圖3公石松菌根。
[0014]圖4混合基料栽培的公石松。
[0015]圖5小石頭和樹皮混合基質種植的文心蘭。
[0016]圖6上面鋪一層黃土壤下層混合基質。
【具體實施方式】
[0017]實施例1
利用蘭花根菌栽培公石松的方法，包括如下步驟:
(1)共生菌分離培養;蘭花菌根用自來水清洗干凈，用體積分數為75%的酒精進行表面消毒，在超凈工作臺上切取瘤狀組織，移入真菌平板培養基待菌絲長出，提取菌絲移入相同平板培養基進行提純培養;在25 °C培養7天菌絲長滿平板培養基，切割平板上菌絲塊接種到混合菌培養菌袋;在24°C條件下培養35天待菌絲長透菌袋;將菌絲長透菌袋與種植過蘭花的基料混合(1:30),作為公石松栽培基質；
(2)公石松種植栽培；當公石松組織培養苗長自3cm從培養瓶取出，用自來水把根部培養基沖洗干凈;在公石松栽培基質上面鋪一層Icm黃土壤，把洗凈的公石松組織培養苗種植在基質上，澆透水放在沒有陽光直射的地方，保持85%濕度;經過50天栽培，根部明顯看到根瘤狀菌根。
[0018]所述的混合菌培養菌袋成分為:木肩87%、玉米粉3%、石灰粉1%、麥皮麩8%、蔗糖1%。步驟(I)中菌絲長透菌袋與種植過蘭花的基料混合的重量比例為1:30。
[0019]所述的真菌平板培養基成分為:蛋白胨5.0g/L、牛肉膏3.0g/L、瓊脂20.0g/L。
[0020]該發明實現了無菌條件下的種苗快繁和高效栽培，成活率達到96%，種植120天單株重比普通基質提高35%。
[0021]實施例2
利用蘭花根菌栽培公石松的方法，包括如下步驟:
(1)共生菌分離培養;蘭花菌根用自來水清洗干凈，用體積分數為75%的酒精進行表面消毒，在超凈工作臺上切取瘤狀組織，移入真菌平板培養基待菌絲長出，提取菌絲移入相同平板培養基進行提純培養;在30 °C培養8天菌絲長滿平板培養基，切割平板上菌絲塊接種到混合菌培養菌袋;在28°C條件下培養40天待菌絲長透菌袋;將菌絲長透菌袋與種植過蘭花的基料混合(1:30),作為公石松栽培基質；
(2)公石松種植栽培；當公石松組織培養苗長自3.5cm從培養瓶取出，用自來水把根部培養基沖洗干凈;在公石松栽培基質上面鋪一層Icm黃土壤，把洗凈的公石松組織培養苗種植在基質上，澆透水放在沒有陽光直射的地方，保持85%濕度;經過60天栽培，根部明顯看到根瘤狀菌根。
[0022]所述的混合菌培養菌袋成分為:木肩88%、玉米粉2%、石灰粉0.5%、麥皮麩7%、蔗糖
0.5%。步驟(I)中菌絲長透菌袋與種植過蘭花的基料混合的重量比例為I:30。
[0023]所述的真菌平板培養基成分為:蛋白胨5.0g/L、牛肉膏3.0g/L、瓊脂20.0g/L。
[0024]該發明實現了無菌條件下的種苗快繁和高效栽培，成活率達到96%，種植120天單株重比普通基質提高35%。
[0025]實施例3
利用蘭花根菌栽培公石松的方法，包括如下步驟:
(1)共生菌分離培養;蘭花菌根用自來水清洗干凈，用體積分數為75%的酒精進行表面消毒，在超凈工作臺上切取瘤狀組織，移入真菌平板培養基待菌絲長出，提取菌絲移入相同平板培養基進行提純培養;在28 °C培養8天菌絲長滿平板培養基，切割平板上菌絲塊接種到混合菌培養菌袋;在25°C條件下培養38天待菌絲長透菌袋;將菌絲長透菌袋與種植過蘭花的基料混合(1:30),作為公石松栽培基質；
(2)公石松種植栽培；當公石松組織培養苗長自3.5cm從培養瓶取出，用自來水把根部培養基沖洗干凈;在公石松栽培基質上面鋪一層Icm黃土壤，把洗凈的公石松組織培養苗種植在基質上，澆透水放在沒有陽光直射的地方，保持85%濕度;經過55天栽培，根部明顯看到根瘤狀菌根。
[0026]所述的混合菌培養菌袋成分為:木肩87%、玉米粉3%、石灰粉1%、麥皮麩8%、蔗糖1%。步驟(I)中菌絲長透菌袋與種植過蘭花的基料混合的重量比例為1:30。
[0027]所述的真菌平板培養基成分為:蛋白胨5.0g/L、牛肉膏3.0g/L、瓊脂20.0g/L。
[0028]該發明實現了無菌條件下的種苗快繁和高效栽培，成活率達到96%，種植120天單株重比普通基質提高35%。
[0029]以上所述僅為本發明的較佳實施例，凡依本發明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應屬本發明的涵蓋范圍。
【主權項】
1.利用蘭花根菌栽培公石松的方法，其特征在于:所述方法包括如下步驟: (1)共生菌分離培養;蘭花菌根用自來水清洗干凈，用體積分數為75%的酒精進行表面消毒，在超凈工作臺上切取瘤狀組織，移入真菌平板培養基待菌絲長出，提取菌絲移入相同平板培養基進行提純培養;在25-30 °C培養7-8天菌絲長滿平板培養基，切割平板上菌絲塊接種到混合菌培養菌袋;在24-28Γ條件下培養35-40天待菌絲長透菌袋;將菌絲長透菌袋與種植過蘭花的基料混合，作為公石松栽培基質； (2)公石松種植栽培；當公石松組織培養苗長自3-3.5cm從培養瓶取出，用自來水把根部培養基沖洗干凈;在公石松栽培基質上面鋪一層Icm黃土壤，把洗凈的公石松組織培養苗種植在基質上，澆透水放在沒有陽光直射的地方，保持85%濕度;經過50-60天栽培，根部明顯看到根瘤狀菌根。2.根據權利要求1所述的利用蘭花根菌栽培公石松的方法，其特征在于:所述的混合菌培養菌袋成分為:木肩87-88%、玉米粉2-3%、石灰粉0.5-1%、麥皮麩7-8%、蔗糖0.5-1%。3.根據權利要求1所述的利用蘭花根菌栽培公石松的方法，其特征在于:步驟(I)中菌絲長透菌袋與種植過蘭花的基料混合的重量比例為1:30。4.根據權利要求1所述的利用蘭花根菌栽培公石松的方法，其特征在于:所述的真菌平板培養基成分為:蛋白胨5.0g/L、牛肉膏3.0g/L、瓊脂20.0g/L。
【文檔編號】A01G1/00GK105961010SQ201610400150
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年6月8日
【發明人】林成輝, 吳祖建, 潘賢, 廖琳琳
【申請人】福建農林大學