專利名稱：一種多皺軟磺酸在抗hiv－1病毒中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及抗HIV-1病毒活性的化合物，具體地說是一種從海綿(多皺軟海綿)中分離出的多皺軟磺酸在抗HIV-1病毒中的應用。
背景技術：
獲得性免疫缺陷綜合癥(Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS)，又稱愛滋病，是由人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)引起的廣泛流行的致死性傳染病。從天然資源中尋找新的抗AIDS藥物或先導化合物的研究，是當前國內外新藥創制中重要的研究方向和非常活躍的領域，至今已經發現數百種天然化合物具有抗HIV的活性。
多硫酸、多磺酸類化合物是目前研究較多的一類HIV病毒吸附抑制劑，這類化合物干擾HIV囊膜糖蛋白gp120與T細胞表面HIV的主要受體CD4分子的相互作用，抑制病毒吸附到宿主細胞，同時抑制HIV誘導的合胞體形成。硫酸類化合物又可與其它藥物(如AZT，DDI，DDC)協同作用，同時可對其它藥物(如AZT，TIBO)引起的HIV變異株具有活性，因此是非常重要的一類HIV病毒抑制劑(文獻1Michael J.R.，Micheal S.K.，Peters K，Science 2001，291884-888)。特別是小分子的硫酸類化合物不僅具有吸收好的方式，最重要的是結構明確的小分子化合物可以通過化學合成或生物培養等方式得到，具有穩定的藥源保證(文獻2Mark J Biscone，Theodore CPierson，Robert W Doms，Current Opinion in Pharmacoloty 2002，2529-533)。
發明內容
本發明的目的是提供一種多皺軟磺酸在抗HIV-1病毒中的應用。
為實現上述目的，本發明以所述多皺軟磺酸為抑制HIV-1病毒活性的有效成份。新結構的多皺軟磺酸具有對HIV-1誘導C8166病變的抑制活性。
其抑制HIV-1(1型人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virustype I，HIV-1))病毒誘導C8166病變的活性如下1)多皺軟磺酸對C8166的細胞毒性檢測CC50(50％CytotoxicConcentration)大于200μg/ml。
2)對HIV-1誘導C8166細胞病變具有明顯的抑制作用，50％有效抑制濃度為EC50(50％Effective Concentration)28.99μg/ml。
多皺軟磺酸為一種胍基硫酸化合物(參見中國專利申請，申請號200410050754.4)，中文名稱為2-(N-甲基-胍基)-乙烷硫酸，簡稱多皺軟磺酸，英文名稱為2-(N-methyl-guanidino)-ethanesulfonic acid，多皺軟磺酸為白色晶體結構，易溶于水，分子量181；其結構式如下
多皺軟磺酸分離自多皺軟海綿(Halichondria rugosa Ridley&Dendy)；多皺軟海綿采自中國南海，Demospongiae尋常海綿綱；Halichondrida軟海綿目；Halichondriida軟海綿科。
本發明與現有技術相比，具有如下有益效果1.化合物的水溶性好、分子量小，這些性質在活性檢測實驗中具有很好的優勢。
2.本發明首次從多皺軟海綿中獲得并確定了活性化合物的結構，具有新穎的結構特征；化合物具有較好的抑制HIV-1病毒誘導C6188的活性，而對宿主細胞C6188的毒性非常小，因此作為先導化合物具有良好的潛力和應用前景。
具體實施例方式
實施例1多皺軟磺酸的的制備多皺軟磺酸(參見中國專利申請，申請號200410050754.4)結構式如下 采用正相柱與反相柱相結合的方法，以中國南海多皺軟海綿(Halichondria rugosa Ridley&Dendy)為原料，經干燥、甲醇萃取及柱分離獲得多皺軟磺酸白色粉末10mg，純度達90％。分子式為C4H11N3O3S；分子量為181；易溶于水；＞200nm波長下沒有紫外吸收；其具體的提取分離方法如下采用柱分離技術，用溶劑淋洗，正相層析柱與反相層析柱相結合，可按如下步驟分離提取操作以多皺軟海綿(Halichondria rugosa Ridley&Dendy)為原料，取2～3公斤冷凍干燥切碎，用1000～2000毫升的甲醇攪拌提取，將提取物濃縮至漿狀物并均勻分散到100～200ml水中，得水溶提取物，再依有機溶劑極性從大到小分別用與水溶提取物等量的環己烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取；將極性最大的正丁醇萃取液所得的萃取液濃縮經硅膠層析柱及反相柱層析分離，得到白色針狀晶體產品。
所述提取為用1000～2000毫升的甲醇常溫攪拌提取3～5次，每次3-5小時，合并提取物并減壓蒸餾濃縮至100～200毫升后分散于等體積的水中，再依有機溶劑極性從小到大依次萃取；
柱分離技術為濃縮物經硅膠柱層析時，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，二氯甲烷60％的餾分減壓蒸餾，濃縮液再經一次ODS反相柱柱層析，用水-甲醇梯度洗脫，得到的餾分減壓蒸餾除去溶劑，得到白色粉末產品。
實施例1多皺軟磺酸對C8166的細胞毒性檢測4×105/ml C8166細胞懸液100ul與不同的待測化合物溶液混合，37℃，5％CO2培養三天，采用MTT比色法檢測細胞毒性。595/630nm ELx800ELISA Reader測定OD值。得到CC50值(50％Cytotoxic Concentration)。
表1多皺軟磺酸對C8166細胞毒性
實施例2.多皺軟磺酸對HIV-1誘導C8166病變的抑制試驗100μl培養液倍比稀釋的化合物加入C8166細胞50μl(4×104個)及HIV-1稀釋上清50μl(1500TCID50/孔)。同時設置不含化合物的對照孔.37℃，5％CO2培養三天，倒置顯微鏡下(100×)計數合胞體的形成。EC50(50％Effective Concentration)為抑制合胞體形成50％時的化合物濃度。
表2多皺軟磺酸對合胞體形成的抑制作用
權利要求
一種多皺軟磺酸在抗HIV-1病毒中的應用，多皺軟磺酸的結構式為， 其特征在于以所述多皺軟磺酸為抑制HIV-1病毒活性的有效成份。
全文摘要
本發明涉及抗HIV－1病毒活性的化合物，具體地說是一種多皺軟磺酸在抗HIV－1病毒中的應用，多皺軟磺酸的結構式為，以所述多皺軟磺酸為抑制HIV－1病毒活性的有效成分，該化合物在細胞水平的活性檢測中，對1型人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virustype I，HIV－1)表現出很好的抑制活性，而對宿主細胞的毒性非常小，作為藥物先導化合物具有良好的應用前景。
文檔編號A61P31/18GK1785168SQ20041008287
公開日2006年6月14日 申請日期2004年12月7日 優先權日2004年12月7日
發明者靳艷, 鄭永唐, 王建華, 張衛 申請人:中國科學院大連化學物理研究所, 中國科學院昆明動物研究所