專利名稱：抗腫瘤化合物真菌環氧二酯的發酵基質的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種化合物的發酵基質，尤其是涉及一種抗腫瘤化合物真菌環氧二酯(Mycoepoxydiene)的發酵基質。
背景技術：
化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧雜-雙環[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氫-2H-吡喃-3-基酯(Mycoepoxydiene，俗稱真菌環氧二酯)最早見于1999年的報道(Ping Cai，Andrew T et al.Mycoeoxydiene represents a novel class of fungal metabolites[J].Tetrahedron Letters，1999，401479-1482)，它從一株稀有真菌OS-F66617發酵液中分離得到，但文獻未報道其具有抗腫瘤生理活性。林昕、黃耀堅等從一株海洋木棲真菌菜豆間座殼菌HLY2菌株分離獲得，該化合物具有抗腫瘤活性，并已申請發明專利(專利申請號200410084809.3)。文獻未見有與本申請專利相同的發酵培養基配方的報道。利用液體發酵培養基，HLY2菌株液體發酵Mycoepoxydiene產量為40μg/L；利用固體發酵培養基，Mycoepoxydiene的固體發酵產量為552μg/L。
菜豆間座殼菌(Diaporhe phaseolorum)分離于福建省漳州市九龍江口浮宮鎮草埔頭村紅樹林生態區紅樹植物腐葉，該屬真菌為植物寄生菌(裘緯蕃主編，菌物學大全，北京科學出版社，1998)，該菌株在半海水配方PDA(馬鈴薯瓊脂培養基)培養基上，生長良好，菌絲純白，無明顯色素產生，不產孢子，培養10d以后，產生黑色子座。
發明內容
本發明的目的在于提供一種用菜豆間座殼菌(Diaporhe phaseolorum)HLY2菌株發酵真菌代謝Mycoepoxydiene的發酵基質及其發酵方法。
本發明所采用的真菌為本申請發明人從福建省漳州市九龍江口浮宮鎮草埔頭(地名)紅樹林生態區的紅樹植物腐葉中分離得到的菌株HLY2，經鑒定為菜豆間座殼菌(Diaporhephaseolorum)。該菌株已保藏于中國典型培養物保藏中心，登記入冊的保藏編號為CCTCC NOM 204061，保藏的培養物名稱及注明的鑒別特征為菜豆間座殼菌Diaporhephaseolorum，保藏日為2004年9月1日。
本發明所說的真菌代謝產生的化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧雜-雙環[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氫-2H-吡喃-3-基酯(Mycoepoxydiene)的結構式為
本發明所說的化合物Mycoepoxydiene的發酵基質的組成及其按質量比的含量為馬鈴薯90～110g，葡萄糖90～110g，乳糖28～32g，硫酸氨9～11g，KH2PO40.5mmol，海水150～250ml，水補足1000ml，pH自然。
本發明所說的化合物Mycoepoxydiene的發酵基質的發酵方法為將上述培養基滅菌后，接種HLY2菌株，26～30℃通氣攪拌發酵7～10d，發酵液經過濾，除去菌體，收集發酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取6～36h，收集萃取所得的有機相，45℃減壓濃縮至干即為化合物Mycoepoxydiene的粗提物。
利用本發明的發酵培養基，采用常規的發酵技術，發酵的Mycoepoxydiene產量可達40mg/L。
具體實施例方式
以下實施例將對本發明作進一步的說明。
實施例1培養基配制培養基的配方為馬鈴薯100g，葡萄糖100g，乳糖30g，硫酸氨10g，KH2O40.5mmol，海水200ml，水補足1000ml，pH自然。
發酵將上述培養基滅菌后，接種HLY2菌株，30℃發酵7d。發酵液經過濾，除去菌體，收集發酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取6h，收集萃取所得的有機相，45℃濃縮至干即為本品的粗提物。
實施例2培養基配制培養基的配方為馬鈴薯90g，葡萄糖110g，乳糖28g，硫酸氨9g，KH2O40.5mmol，海水250ml，水補足1000ml，pH自然。
發酵將上述培養基滅菌后，接種HLY2菌株，26℃發酵10d。發酵液經過濾，除去菌體，收集發酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取12h，收集萃取所得的有機相，45℃濃縮至干即為本品的粗提物。
實施例3培養基配制培養基的配方為馬鈴薯110g，葡萄糖90g，乳糖32g，硫酸氨11g，KH2PO40.5mmol，海水150ml，水補足1000ml，pH自然。
發酵將上述培養基滅菌后，接種HLY2菌株，28℃發酵8d。發酵液經過濾，除去菌體，收集發酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取24h，收集萃取所得的有機相，45℃濃縮至干即為本品的粗提物。
權利要求
1.抗腫瘤化合物真菌環氧二酯的發酵基質，其特征在于其組成及其按質量比的含量為馬鈴薯90～110g，葡萄糖90～110g，乳糖28～32g，硫酸氨9～11g，KH2PO40.5mmol，海水150～250ml，水補足1000ml，pH自然。
2.如權利要求1所述的抗腫瘤化合物真菌環氧二酯的發酵基質的發酵方法，其特征在于將培養基滅菌后，接種HLY2菌株，26～30℃通氣攪拌發酵7～10d，發酵液經過濾，除去菌體，收集發酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取6～36h，收集萃取所得的有機相，45℃減壓濃縮至干即為化合物真菌環氧二酯的粗提物。
全文摘要
抗腫瘤化合物真菌環氧二酯的發酵基質，涉及一種化合物的發酵基質，尤其是涉及一種抗腫瘤化合物真菌環氧二酯的發酵基質。提供一種用菜豆間座殼菌HLY2菌株發酵真菌代謝真菌環氧二酯的發酵基質及發酵方法。發酵基質的組成及含量為馬鈴薯90～110g，葡萄糖90～110g，乳糖28～32g，硫酸氨9～11g，KH
文檔編號A61P35/00GK1904057SQ20051008567
公開日2007年1月31日 申請日期2005年7月25日 優先權日2005年7月25日
發明者王若宇, 黃耀堅, 鄭忠輝, 宋思揚, 蘇文金, 沈月毛 申請人:廈門大學