一種與乳腺癌有關的p60基因,其編碼的蛋白及應用的制作方法

專利名稱：一種與乳腺癌有關的p60基因,其編碼的蛋白及應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種與乳腺癌有關的p60基因，該基因編碼的Q9H972-2蛋白，以及所述基因和蛋白在醫學中的應用。所述蛋白參與乳腺癌的發生發展，為乳腺癌的理論研究及臨床治療提供線索和思路。
背景技術：
某些蛋白可抑制或促進腫瘤細胞的生長和增殖，發現新的抑制或促進腫瘤生長和增殖的基因和編碼的蛋白可為腫瘤的治療提供新的方法和手段。

發明內容
本發明發現了一種參與乳腺癌發生發展過程的蛋白Q9H972-2，克隆了編碼該蛋白的基因p60，構建了含有該基因的表達載體和含有該表達載體的宿主細胞，并且發現該蛋白可影響乳腺癌等腫瘤細胞的生長和增殖，基于以上發現，完成了本發明。
p60又名HGNC20162，FLJ12154。定位于染色體14q11.2，cDNA全長2352bp，表達蛋白約60kD，ORF長為1617bp，編碼539個氨基酸。
同源序列比對種屬 序列號 特征Pongo pygmaeus CR85760.1cDNA DKFZp468C2110Canis familiaris NM_537369.2 類似于蛋白C14或f93前體Bos taurus NM_583415.2 類似于蛋白C14或f93前體
Pan troglodytes XM_522798.1 類似于蛋白C14或f93前體Rattus XM_573773.1 類似于RIKEN cDNA 4931414P19norvegicus本發明將pcDNA3.1(-)-p60表達質粒轉染到MCF-7細胞中，使p60基因在該細胞中表達，提取細胞總蛋白，Western Blot鑒定了p60基因表達產物的存在。
MTT法檢測p60基因表達產物對乳腺癌細胞增殖的影響，結果表明，p60基因表達產物對乳腺癌細胞的增殖起抑制作用。
因此，根據本發明，提供了1、可影響腫瘤細胞的生長和增殖的蛋白，尤其重組蛋白，該蛋白具有序列表中序列2所示的氨基酸序列，或者通過所述氨基酸序列中的一個或多個氨基酸的缺失，取代或增加而得到的氨基酸序列。
2、編碼上述蛋白的基因，它是具有序列1所示的堿基序列的DNA或者其互補序列或與所述DNA在嚴格條件下雜交的DNA。
3、含有上述基因或者編碼上述蛋白的基因的表達載體。
4、由上述表達載體轉化的宿主細胞。
5、生產本發明的重組蛋白的方法，該方法包括培養上述轉化的宿主細胞，使轉化細胞產生本發明的重組蛋白。
6、針對如以上項1所述的蛋白的抗體，它是使用所述重組蛋白作為免疫原而產生的特異性抗體。它可以是單克隆或多克隆抗體。
7、以上項1所述的蛋白或以上項2所述的基因在制備治療乳腺癌的藥物中的應用。
8、含有以上項1所述的蛋白和藥學可接受的載體的藥物組合物。
9、一種用于對進行PCR擴增的引物對，引物如下所示引物15’-TAT AGA ATT CGC CAC CAT GTC CTT CAG TGC CAC CAT-3’引物25’-TAT AGC CAC CGA ATT CAT GTC CTT CAG TGC CAC CAT-3’


圖1為PCR后1％瓊脂糖電泳結果。
圖2為p60編碼的蛋白在真核細胞MCF-7中的表達圖(Westernblot)。一抗為小鼠抗人Flag單克隆抗體，二抗為本實驗室保存的兔抗鼠辣根過氧化物酶(HRP)偶聯的二抗。1為陰性對照，2為細胞裂解液。用帶Flag標簽的pcDNA3.1(-)-p60質粒轉染MCF-7細胞。蛋白水平用抗Flag抗體檢測。1、2道分別表示陰性對照和MCF-7的細胞溶解產物。
圖3為基因的染色體定位，定位于染色體14q11.2。
具體實施例方式
本發明的一個方面是可抑制乳腺癌細胞增殖的蛋白Q9H972-2，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示。本發明的蛋白可以是重組蛋白、天然蛋白、合成蛋白等，優選是重組蛋白。本發明的蛋白可以是天然純化的產物，或是化學合成的產物，或使用重組技術從原核或真核宿主(例如，細菌、酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動物細胞)中產生。本發明的蛋白可以是糖基化或可以是非糖基化。
本發明的另一個方面是編碼上述蛋白的基因p60，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。多核苷酸序列片段包括其互補鏈可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈或雙鏈的。DNA可以是編碼鏈或非編碼鏈。或上述多核苷酸的變異體，其編碼與本發明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、類似物和衍生物。此核苷酸變異體包括取代變異體、缺失變異體和插入變異體。
本發明還涉及包括本發明的多核苷酸的載體，用本發明的載體制造的遺傳工程宿主細胞和用重組技術生產的本發明的多肽產品及方法。本發明的多核苷酸序列可以包括在用于表達多肽的眾多表達載體的任意一種中。適宜的載體例如包括細菌質粒、噬菌體、酵母質粒、植物細胞病毒、哺乳動物細胞病毒如腺病毒，腺相關病毒、逆轉錄病毒或其它載體。本發明中適用的表達載體可以是原核或真核表達載體，只要能在宿主體內復制和穩定，任何質粒和載體都可以用。表達載體的一個重要特征是通常含有復制起點、啟動子、標記基因和翻譯控制元件。含有本發明的基因序列的載體可以用來轉化或轉導適當宿主細胞以使宿主表達此多肽。
宿主細胞可以是高等真核細胞，如哺乳動物細胞；或是低等真核細胞，如酵母細胞；或者是原核細胞，例如大腸桿菌等細菌細胞。
利用常規的基因重組技術，可利用本發明的多聚核苷酸序列用來表達或生產重組的具有抑制乳腺癌細胞增殖的基因編碼的蛋白多肽。包含(1)用本發明的具有抑制乳腺癌細胞增殖的基因p60(或變異體)，或者含有該基因p60的重組表達載體轉化或轉導合適的宿主細胞；(2)在合適的培養基中培養的宿主細胞；(3)從培養物包括培養基或培養的細胞中分離、純化蛋白質。從而可以大量生產本發明的多肽。
本發明的蛋白具有抑制乳腺癌細胞增殖的作用，其可用于乳腺癌的治療。因此，本發明的一個目的是本發明的上述蛋白在制備治療腫瘤，尤其乳腺癌中的用途。
本發明的蛋白可以單獨或與合適的藥用載體組合使用。這種組合物可以包含治療有效量的蛋白或拮抗劑以及藥學可接受的載體或賦型劑，這樣的載體包括但不限于鹽水，緩沖鹽水，葡萄糖，水，甘醇，乙醇，或混合物，這些制劑應適合給藥方式。
本發明的藥物組合物可以以適當的方式給藥，如通過局部、靜脈內、腹腔內、肌內、皮下等途徑給藥。給藥于患者的用量取決于許多因素，如給藥方式，待治療者的身體條件和診斷醫生的判斷。
通過使用本發明的蛋白或者免疫學上等效的多肽，可以獲得其抗體，抗體用于所述蛋白的檢測和純化。其次可以利用本發明的蛋白或其部分氨基酸序列作為免疫原來產生抗體。另外通過將抗體接種給宿主動物并回收血清的常規方法產生多克隆抗體，還可以通過常規雜交瘤方法產生單克隆抗體。
對p60基因進行生物信息學分析，發現其表達譜較廣泛。
p60表達信息(1)高表達的組織BM-CD34+、胎腦、馬尾神經節、BM-CD105+內皮細胞、骨髓、頸上神經節、扁桃體、丘腦、子宮、骨骼肌、心肌、胰島、Burkitt氏淋巴瘤、721B淋巴瘤、PB-CD4+T細胞。
(2)低表達的組織三叉神經節、下丘腦、扁桃體、小腦、額葉前部皮層、頂葉、全腦、胰腺、唾液腺、前列腺、腎上腺、胎甲狀腺、慢性粒細胞性白血病、淋巴細胞性白血病、PB-CD14+單核細胞。
因此，本發明可促進我們對乳腺癌發生機制的了解，并以此作為診斷治療的理論依據。更為重要的是該基因所編碼的蛋白可用于作為腫瘤尤其是乳腺癌治療的候選藥物。
實施例實施例1用PCR方法從人乳腺癌cDNA文庫克隆編碼Q9H972-2蛋白的p60基因。以乳腺癌cDNA文庫為模板，在P60基因N端接上Flag標簽，用下列引物進行PCR擴增引物15’-TAT AGA ATT CGC CAC CAT GTC CTT CAG TGC CAC CAT-3’引物25’-TAT AGC CAC CGA ATT CAT GTC CTT CAG TGC CAC CAT-3’擴增反應的條件在50μL的反應體積中含有50mmol/L KCl，10mmol/L Tris-Cl(PH 8.5)，1.5mmol/L MgCl2，200μmol/L dNTP，10pmol引物，0.25U的pfu DNA聚合酶(Takara公司產品)。按下列條件反應30個周期94℃ 30sec；56℃ 30sec；72℃ 2min 30sec。擴增產物用QIAGEN公司的試劑盒純化，用EcoRI及BamHI雙酶切后，克隆到相同酶切的pcDNA3.1(-)真核表達載體中。DNA序列分析結果表明PCR產物與預期的DNA序列基本相符。
實施例2p60在真核細胞中的表達
Western Blot是在蛋白質電泳和固相免疫測定的基礎上發展起來的，其基本原理為抗原抗體反應。細胞蛋白提取物經聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后轉移到固相支持物上(本實驗采用硝酸纖維素膜)。與特異的一抗反應(本實驗用小鼠抗人Flag單克隆抗體，Sigma)，再與辣根過氧化物酶(HRP)偶聯的二抗(本實驗室保存兔抗鼠二抗)孵育顯色，可以得到特異蛋白分子的免疫印跡圖。該方法具有從混雜抗原中檢測出特定的抗原的特點，因此本實驗用于檢測帶有Flag標簽的p60基因轉染MCF-7細胞后的表達情況。
1)瞬時轉染實驗于轉染前一天將MCF-7細胞接種于10cm培養板中，接種密度為2×106個細胞/孔，每孔加入培養液10ml。24小時后，細胞長至覆蓋培養孔底面積約85-90％時，可準備轉染。在EP管中配制下述溶液溶液A24μg pcDNA3.1(-)-p60表達質粒，溶于1.5mL無血清無雙抗DMEM培養液。溶液B將48μL脂質體溶液(lipofectamine 2000 reagent)加入到1.5mL無血清無雙抗DMEM培養液中，室溫靜置5分鐘。然后將溶液A、B混合，室溫靜置20分鐘，用無血清和不含雙抗的DMEM培養液洗滌細胞。
將上述A、B溶液的混合液中加入12mL無血清無雙抗的DMEM培養液，混勻后加至細胞表面。37℃，5％ CO2條件孵育4-6小時后，再用正常含10％胎牛血清的DMEM培養液取代前述培養液，繼續培養細胞至48小時。
2)細胞總蛋白的提取培養的細胞經0.25％胰酶消化使之分散，4℃低速離心去上清，將沉淀置于冰上30min，再用預冷的PBS洗2次，每106細胞加入裂解液100μL，使細胞充分裂解30min，再于4℃，20000×g離心15min，收集上清。
3)Bradford法測定細胞裂解液蛋白的濃度首先配制考馬斯亮藍染色液；將標準牛血清白蛋白(BSA)配制成1mg/ml的蛋白標準液，分別將10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg蛋白標準液和5μL待測蛋白質樣品加入3mL考馬斯亮藍染液中，室溫孵育10min，在595nm波長處測定吸收值。BSA標準樣品測定標準曲線，在一定范圍內OD595與蛋白濃度成正比。樣品蛋白質的濃度經標準曲線擬合方程來計算。
4)電泳及免疫反應流程如下A、制膠(5％濃縮膠，10％分離膠)；B、50μg蛋白樣品加入上樣緩沖液，煮沸，上樣；C、電泳，濃縮膠80V電壓，分離膠120V電壓；D、轉膜，100V，1.5h；E、封閉，1h；F、一抗反應，4℃，過夜；G、TBST洗膜，三次，每次10min；H、二抗反應，1.5h；I、TBST洗膜，三次，每次10min；J、顯色、曝光。
實施例3MTT法檢測不同濃度的Q9H972-2蛋白對乳腺癌細胞增殖的影響MTT(四甲基偶氮唑蘭)可被細胞攝取，并被活細胞內線粒體脫氫酶還原成一種不溶于水的藍紫色產物甲瓚，并沉淀于細胞中，而死細胞沒有這種功能。甲瓚可溶于二甲基亞砜(DMSO)，溶液在570nm處有最大吸收。故該波段處吸收值越大代表存活細胞量越多。MTT法廣泛應用于細胞毒性實驗、細胞生長測定等。本實驗利用MTT法觀察Q9H972-2蛋白對MCF-7生長的影響。具體操作方法如下將培養到對數生長期的MCF-7細胞接種于96孔板中，每孔接種細胞數為1×104個。次日按照濃度梯度加入Q9H972-2蛋白(25、50、100ng)，每濃度作用6孔細胞，37℃，5％CO2進行培養。分別培養1d、2d、3d、4d后，在每個細胞培養孔內加入50μlL1mg/mL的MTT溶液，同樣培養條件下作用4小時后取出，小心吸出每孔內液體，每孔加入二甲基亞砜150μL，輕微振蕩10分鐘，使藍紫色結晶充分溶解在二甲基亞砜中。用自動酶標儀測量96孔板中每孔在570nm處的吸光值。MTT實驗表明Q9H972-2蛋白對MCF-7細胞生長增殖起抑制作用，并且與劑量有關。
p60基因[1].ST25SEQUENCE LISTING<110>北京大學<120>一種與乳腺癌有關的p60基因，其編碼的蛋白及應用<130>
<160>2<170>Patentln version 3.1<210>1<211>1617<212>DNA<213>人<220>
<221>CDS<222>(1)..(1614)<223>
<400>1atg tcc ttc agt gcc acc att ctc ttc tcc cct ccc agt ggc agc gag48Met Ser Phe Ser Ala Thr Ile Leu Phe Ser Pro Pro Ser Gly Ser Glu1 5 10 15gcc aga tgc tgc tgc tgc gcc tgt aag agt gag act aat gga ggc aac96Ala Arg Cys Cys Cys Cys Ala Cys Lys Ser Glu Thr Asn Gly Gly Asn20 25 30aca ggc tcc cag ggt ggg aat cct cct ccc agc acc ccc atc aca gtg 144Thr Gly Ser Gln Gly Gly Asn Pro Pro Pro Ser Thr Pro Ile Thr Val35 40 45act gga cat ggc ttg gct gtt cag agc tca gag cag ctc ctg cat gtt 192Thr Gly His Gly Leu Ala Val Gln Ser Ser Glu Gln Leu Leu His Val50 55 60atc tac cag cgg gtc gat aag gca gtg ggt ttg gct gaa gct gct ctg 240Ile Tyr Gln Arg Val Asp Lys Ala Val Gly Leu Ala Glu Ala Ala Leu65 70 75 80ggt ctt gcc agg gcc aac aat gag ttg tta aaa cgt ctc cag gag gaa 288Gly Leu Ala Arg Ala Asn Asn Glu Leu Leu Lys Arg Leu Gln Glu Glu85 90 95gtg ggt gac ctg agg caa ggg aaa gtg tcc atc cct gat gaa gat ggg 336Val Gly Asp Leu Arg Gln Gly Lys Val Ser Ile Pro Asp Glu Asp Gly100 105 110gaa agc cgg gca cat agt tcc cca cct gag gag cct ggg cct ctc aag 384Glu Ser Arg Ala His Ser Ser Pro Pro Glu Glu Pro Gly Pro Leu Lys115 120 125gaa agt ccc ggg gaa gcc ttt aag gct ctg tct gcc gtg gaa gag gag 432Glu Ser Pro Gly Glu Ala Phe Lys Ala Leu Ser Ala Val Glu Glu Glu130 135 140tgt gac agc gtg ggc agc ggc gtg cag gtg gtg att gag gag ctg cgg 480Cys Asp Ser Val Gly Ser Gly Val Gln Val Val Ile Glu Glu Leu Arg145 150 155 160cag ctg gga gca gcc tca gtg ggg cct ggg cct ttg ggc ttc cca gca 528Gln Leu Gly Ala Ala Ser Val Gly Pro Gly Pro Leu Gly Phe Pro Ala165 170 175act cag agg gac atg cgg ctc cca ggg tgc acg ctg gct gcc agc gag 576Thr Gln Arg Asp Met Arg Leu Pro Gly Cys Thr Leu Ala Ala Ser Glu180 185 190gcg gcc ccc ctg ctc aat cct ctg gtg gat gat tac gtg gcc tct gag 624Ala Ala Pro Leu Leu Asn Pro Leu Val Asp Asp Tyr Val Ala Ser Glu195 200 205
p60基因[1].ST25ggt gca gta cag cga gtt ctg gtc cct gct tat gcc aag caa ctc tca 672Gly Ala Val Gln Arg Val Leu Val Pro Ala Tyr Ala Lys Gln Leu Ser210 215 220cca gcc aca caa ctg gca atc cag cgg gca acc cca gag aca gga cca 720Pro Ala Thr Gln Leu Ala Ile Gln Arg Ala Thr Pro Glu Thr Gly Pro225 230 235 240gaa aat gga acc aag ctg cca cca ccc cgc cct gag gac atg ctc aat 768Glu Asn Gly Thr Lys Leu Pro Pro Pro Arg Pro Glu Asp Met Leu Asn245 250 255gcc gct gct gcg ctg gac agt gcc ttg gaa gag tca ggc cct ggg agc 816Ala Ala Ala Ala Leu Asp Ser Ala Leu Glu Glu Ser Gly Pro Gly Ser260 265 270act ggg gag ctg aga cac tct cta ggg ctg acc gtt tcc cca tgc agg 864Thr Gly Glu Leu Arg His Ser Leu Gly Leu Thr Val Ser Pro Cys Arg275 280 285acc aga gga agt ggg cag aag aac tcc agg cgc aag cgg gat ctt gta 912Thr Arg Gly Ser Gly Gln Lys Asn Ser Arg Arg Lys Arg Asp Leu Val290 295 300ctc tct aaa ctg gtc cac aat gtg cat aac cac atc acc aat gac aag 960Leu Ser Lys Leu Val His Asn Val His Asn His Ile Thr Asn Asp Lys305 310 315 320aga ttc aat ggg tct gaa agc atc aag tcc tct tgg aat att tca gta 1008Arg Phe Asn Gly Ser Glu Ser Ile Lys Ser Ser Trp Asn Ile Ser Val325 330 335gtg aag ttt ctt ctg gaa aag ctc aag caa gag ctg gtg acc agt ccc 1056Val Lys Phe Leu Leu Glu Lys Leu Lys Gln Glu Leu Val Thr Ser Pro340 345 350cac aat tac act gat aag gag cta aaa gga gcc tgt gtg gcc tac ttc 1104His Asn Tyr Thr Asp Lys Glu Leu Lys Gly Ala Cys Val Ala Tyr Phe355 360 365ctt act aag agg cgt gag tac cgc tcc tcc ctg aac ccc ttt aaa ggc 1152Eeu Thr Lys Arg Arg Glu Tyr Arg Asn Ser Leu Asn Pro Phe Lys Gly370 375 380ctg aag gaa aaa gag gag aag aaa ctt cga agt cgc cga tat cgg ctt 1200Leu Lys Glu Lys Glu Glu Lys Lys Leu Arg Ser Arg Arg Tyr Arg Leu385 390 395 400ttt gcc aac cga tcc agt atc atg egg cat ttt gga cct gag gac caa 1248Phe Ala Asn Arg Ser Ser Ile Met Arg His Phe Gly Pro Glu Asp Gln405 410 415cgt ctg tgg aat gat gtg aca gag gaa ctg atg tca gat gaa gag gac 1296Arg Leu Trp Asn Asp Val Thr Glu Glu Leu Met Ser Asp Glu Glu Asp420 425 430agt ctt aac gag cca ggt gtg tgg gtg gcc cgc cct ccc cgt ttc cgg 1344Ser Leu Asn Glu Pro Gly Val Trp Val Ala Arg Pro Pro Arg Phe Arg435 440 445gcc cag cgc ctc aca gag ctc tgc tac cac ctg gat gct aac tct aag 1392Ala Gln Arg Leu Thr Glu Leu Cys Tyr His Leu Asp Ala Asn Ser Lys450 455 460cat ggc acc aaa gcc aac cgt gtg tat ggg cct ccc tca gac aga ctg 1440His Gly Thr Lys Ala Asn Arg Val Tyr Gly Pro Pro Ser Asp Arg Leu465 470 475 480cct tct gct gaa gcc cag ctc ctt cca cca gaa ctt tac aat cct aat 1488Pro Ser Ala Glu Ala Gln Leu Leu Pro Pro Glu Leu Tyr Asn Pro Asn485 490 495ttc caa gaa gag gaa gat gag gga ggg gat gag aat gca cct ggc tcc 1536Phe Gln Glu Glu Glu Asp Glu Gly Gly Asp Glu Asn Ala Pro Gly Ser500 505 510
p60基因[1].ST25cca tct ttt gac caa ccc cac aaa acc tgc tgt cct gac ttg aac tca 1584Pro Ser Phe Asp Gln Pro His Lys Thr Cys Cys Pro Asp Leu Asn Ser515 520 525tte att gaa atc aag gtg gaa aag gat gaa taa 1617Phe Ile Glu Ile Lys Val Glu Lys Asp Glu530 535<210>2<211>538<212>PRT<213>人<400>2Met Ser Phe Ser Ala Thr Ile Leu Phe Ser Pro Pro Ser Gly Ser Glu1 5 10 15Ala Arg Cys Cys Cys Cys Ala Cys Lys Ser Glu Thr Asn Gly Gly Asn20 25 30Thr Gly Ser Gln Gly Gly Asn Pro Pro Pro Ser Thr Pro Ile Thr Val35 40 45Thr Gly His Gly Lou Ala Val Gln Ser Ser Glu Gln Leu Leu His Val50 55 60Ile Tyr Gln Arg Val Asp Lys Ala Val Gly Leu Ala Glu Ala Ala Leu65 70 75 80Gly Leu Ala Arg Ala Asn Asn Glu Leu Leu Lys Arg Leu Gln Glu Glu85 90 95Val Gly Asp Leu Arg Gln Gly Lys Val Ser Ile Pro Asp Glu Asp Gly100 105 110Glu Ser Arg Ala His Ser Ser Pro Pro Glu Glu Pro Gly Pro Leu Lys115 120 125Glu Ser Pro Gly Glu Ala Phe Lys Ala Leu Ser Ala Val Glu Glu Glu130 135 140Cys Asp Ser Val Gly Ser Gly Val Gln Val Val Ile Glu Glu Leu Arg145 150 155 160Gln Leu Gly Ala Ala Ser Val Gly Pro Gly Pro Leu Gly Phe Pro Ala165 170 175Thr Gln Arg Asp Met Arg Leu Pro Gly Cys Thr Leu Ala Ala Ser Glu180 185 190Ala Ala Pro Leu Leu Asn Pro Leu Val Asp Asp Tyr Val Ala Ser Glu195 200 205Gly Ala Val Gln Arg Val Leu Val Pro Ala Tyr Ala Lys Gln Leu Ser210 215 220Pro Ala Thr Gln Leu Ala Ile Gln Arg Ala Thr Pro Glu Thr Gly Pro225 230 235 240
p60基因[1].ST25Glu Asn Gly Thr Lys Leu Pro Pro Pro Arg Pro Glu Asp Met Leu Asn245 250 255Ala Ala Ala Ala Leu Asp Ser Ala Leu Glu Glu Ser Gly Pro Gly Ser260 265 270Thr Gly Glu Leu Arg His Ser Leu Gly Leu Thr Val Ser Pro Cys Arg275 280 285Thr Arg Gly Ser Gly Gln Lys Asn Ser Arg Arg Lys Arg Asp Leu Val290 295 300Leu Ser Lys Leu Val His Asn Val His Asn His Ile Thr Asn Asp Lys305 310 315 320Arg Phe Asn Gly Ser Glu Ser Ile Lys Ser Ser Trp Asn Ile Ser Val325 330 335Val Lys Phe Leu Leu Glu Lys Leu Lys Gln Glu Leu Val Thr Ser Pro340 345 350His Asn Tyr Thr Asp Lys Glu Leu Lys Gly Ala Cys Val Ala Tyr Phe355 360 365Leu Thr Lys Arg Arg Glu Tyr Arg Asn Ser Leu Asn Pro Phe Lys Gly370 375 380Leu Lys Glu Lys Glu Glu Lys Lys Leu Arg Ser Arg Arg Tyr Arg Leu385 390 395 400Phe Ala Asn Arg Ser Ser Ile Met Arg His Phe Gly Pro Glu Asp Gln405 410 415Arg Leu Trp Asn Asp Val Thr Glu Glu Leu Met Ser Asp Glu Glu Asp420 425 430Ser Leu Asn Glu Pro Gly Val Trp Val Ala Arg Pro Pro Arg Phe Arg435 440 445Ala Gln Arg Leu Thr Glu Leu Cys Tyr His Leu Asp Ala Asn Ser Lys450 455 460His Gly Thr Lys Ala Asn Arg Val Tyr Gly Pro Pro Ser Asp Arg Leu465 470 475 480Pro Ser Ala Glu Ala Gln Leu Leu Pro Pro Glu Leu Tyr Asn Pro Asn485 490 495Phe Gln Glu Glu Glu Asp Glu Gly Gly Asp Glu Asn Ala Pro Gly Ser500 505 510Pro Ser Phe Asp Gln Pro His Lys Thr Cys Cys Pro Asp Leu Asn Ser515 520 525Phe Ile Glu Ile Lys Val Glu Lys Asp Glu
p60基因[1].ST25530 53權利要求
1.可影響腫瘤細胞的生長和增殖的蛋白，尤其重組蛋白，該蛋白具有序列表中序列2所示的氨基酸序列，或者通過所述氨基酸序列中的一個或多個氨基酸的缺失，取代或增加而得到的氨基酸序列。
2.編碼上述蛋白的基因，它是具有序列1所示的堿基序列的DNA或者其互補序列或與所述DNA在嚴格條件下雜交的DNA。
3.含有權利要求2所述基因或者編碼權利要求1所述蛋白的基因的表達載體。
4.由權利要求3所述的表達載體轉化的宿主細胞。
5.生產本發明的重組蛋白的方法，該方法包括培養權利要求4所述的轉化的宿主細胞，使轉化細胞產生本發明的重組蛋白。
6.針對如權利要求1所述的蛋白的抗體，它是使用所述重組蛋白作為免疫原而產生的特異性抗體。
7.權利要求1所述的蛋白或權利要求2所述的基因在制備治療乳腺癌的藥物中的應用。
8.含有如權利要求1所述的蛋白和藥學可接受的載體的藥物組合物。
9.一種用于對進行權利要求2所述基因的PCR擴增的引物對，引物如下所示引物15’-TAT AGA ATT CGC CAC CAT GTC CTT CAG TGC CAC CAT-3’引物25’-TAT AGC CAC CGA ATT CAT GTC CTT CAG TGC CAC CAT-3’。
全文摘要
本發明涉及p60基因，該基因編碼的Q9H972－2蛋白，以及所述基因和蛋白在醫學中的應用。所述蛋白參與乳腺癌的發生發展，為乳腺癌的理論研究及臨床治療提供線索和思路。
文檔編號A61P35/00GK101058808SQ200610076278
公開日2007年10月24日 申請日期2006年4月21日 優先權日2006年4月21日
發明者尚永豐, 孫露洋, 吳歌 申請人:北京大學