專利名稱：：一種油菜破壁花粉提取物及其提純方法和應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種油菜破壁花粉提取物及其提純方法和應用。
背景技術：
：油菜花粉為十字花科植物油菜Q^s/caC"mpe^加L)的雄性生殖細胞，其營養、藥用成分非常豐富，富含多種蛋白質及多肽、游離氨基酸、碳水化合物、脂類、各種維生素、常量和微量元素及其他活性物質，在國際上被譽為"濃縮微型天然藥劑"。大量的藥理及臨床數據表明，油菜花粉及其粗提物對前列腺相關疾病具有良好的預防及治療效果。據浙江醫科院老年病研究所的臨床數據報道，使用油菜花粉治療前列腺增生100例，癥狀有效率達93%，殘尿有效率為73.2%，總有效率達95%。然而，由于油菜花粉富含多種成分，導致花粉及其粗提物中有效成分含量偏低，少量服用效果不明顯。目前，許多學者對此進行了有益的探索，并基本解決了花粉的破壁問題。但對破壁后的油菜花粉抗良性前列腺增生的有效成分的提取、富集并未見相關專利和報道。
發明內容本發明要解決的技術問題即是提供一種油菜破壁花粉的有效成分，即具有更佳藥效的油菜破壁花粉提取物及其提純方法。本發明人經過諸多試驗，驚奇地發現將油菜破壁花粉經超臨界萃取(SFE)后獲得的超臨界萃取物再經過大孔樹脂富集，采用乙醇進行洗脫，收集洗脫液獲得的產物具有較佳的抗炎和抗前列腺增生和纖維化的作用。因此，本發明通過下列技術方案來解決上述問題。一種油菜破壁花粉的提純方法，其包括將油菜破壁花粉采用超臨界二氧化碳萃取的萃取物用大孔樹脂富集，采用乙醇進行洗脫，收集洗脫液。其中，油菜破壁花粉采用超臨界二氧化碳萃取的提取工藝及獲得的提取物已在本發明人申請號為CN200710043270.0的專利申請中公開，其說明書全文為本說明書所引用。其中，所述的超臨界二氧化碳萃取的溫度優選在3550。C范圍，壓力2540MPa。為了提高萃取物的收率，所述的超臨界二氧化碳萃取中還采用萃取夾帶劑。本發明優選甲醇、乙醇等C"的低級醇，所述夾帶劑的用量優選為破壁花粉重量的510%。為了更好地提高萃取物的收率，本發明優選二級分離，其中分離釜I的溫度為3545°C、壓力812MPa，分離釜II的溫度為25~35°C、壓力4在收率相同情況下，隨著超臨界二氧化碳萃取中C02每小時循環用量增大，萃取時間可縮短，反之，超臨界二氧化碳萃取中C02每小時循環用量越小，萃取時間越長。本發明綜合收率、工藝時間、成本等因素，優選采用2545L/小時循環用量的C02萃取1~3小時左右。本發明所說的油菜破壁花粉是指現有固體的破壁花粉，其可以市售得到，也可以采用現有花粉破壁技術(如可以參考張星海等.油菜花粉的微生物破壁技術研究，食品科學，2003,24(3):9295;以及公開號為CN1452888A的專利申請文件公開的酶發酵破壁方法)自制得到。按常規，將油菜破壁花粉進行超臨界二氧化碳萃取之前，盡量將破壁花粉，特別是市售產品去除水分，干燥完全。根據本發明，油菜破壁花粉采用超臨界二氧化碳萃取的萃取物可以是每個分離釜單獨收集的產物，也可以是將兩個分離釜的產物合并后的混合物；換言之，各個分離釜收集的產物可以分別過柱，也可以合并后過柱。上柱時，通常將萃取物蒸至無醇味，采用類似傳統硅膠柱干法拌樣的方式進行拌樣，即取一部分(一般為裝柱量2060X,v/v)的大孔樹脂與萃取物一起攪拌均勻，使其充分吸附，將拌樣后的大孔樹脂裝入大孔樹脂的柱頂端。所述的大孔樹脂可以是各種性質的大孔樹脂，包括不同極性類型與不同的骨架類型。通過研究分析表明，苯乙烯骨架的非極性大孔樹脂如D101型采用70%80%乙醇洗脫，甲基丙烯酸骨架的大孔樹脂如HP2MG采用60%70%乙醇洗脫，中極性大孔樹脂如DM301采用60X75X乙醇洗脫，極性大孔樹脂如DA201型、NKA-n型等，采用50%~70%乙醇洗脫，所得到的化學成分相似，藥效結果也類似。綜合考慮成本、大孔樹脂的再生、循環使用等情況，優選極性大孔樹脂作為工業化生產的樹脂。而本發明要提供的一種油菜破壁花粉提取物，由上述提純方法制得。本發明制得的油菜破壁花粉提取物經動物試驗顯示，具有較強的抗炎及抗前列腺增生、抗前列腺纖維化的作用，可制備成抗炎，以及抗前列腺炎、前列腺增生和前列腺纖維化等前列腺疾病的藥物或保健食品。具體實施例方式下面用實施例來進一步說明本發明，但本發明并不受其限制。特別是為了重點考察不同大孔樹脂和不同濃度乙醇洗脫得到的不同產物的藥效，下列實施例中選用同一種油菜破壁花粉超臨界二氧化碳萃取物，即選用相同條件制備的超臨界二氧化碳萃取物來進行說明，其它萃取物可按照上述本發明人專利申請CN200710043270.0中公開的方法制備。實施例1油菜破壁花粉超臨界二氧化碳萃取物的制備將市售的油菜破壁花粉(安徽省宣城市百康蜂業生產)60'C減壓干燥24小時，然后將干燥后的破壁花粉在40°C，萃取釜壓力40MPa，分離釜I溫度35t:、壓力12MPa，分離釜II溫度25。C、壓力5MPa，以花粉重量8%重的濃度為95v/v^乙醇為夾帶劑進行超臨界二氧化碳(45L/小時的循環用量)萃取2.0小時，得到超臨界萃取部分，收集超臨界萃取物。實施例2本發明油菜破壁花粉提取物的制備將實施例1獲得的萃取物蒸至無醇味，采用類似傳統硅膠柱干法拌樣的方式進行拌樣，即取裝柱量2060%(v/v)的大孔樹脂與萃取物一起攪拌均勻，使其充分吸附，將拌樣后的大孔樹脂裝入大孔樹脂柱頂端，其中大孔樹脂選用極性大孔樹脂DA201(生產廠商天津市海光化工有限公司)，用50%(Wv)的乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥。實施例3本發明油菜破壁花粉提取物的制備將實施例1獲得的萃取物，按照實施例2方法進行前處理，通過極性大孔樹脂柱NKA-II(生產廠商南開大學化工廠)，用65%(v/v)的乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥。實施例4本發明油菜破壁花粉提取物的制備將實施例1獲得的萃取物，按照實施例2方法進行前處理，通過中極性大孔樹脂柱DM301(生產廠商天津市海光化工有限公司)，用70%(v/v)的乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥。實施例5本發明油菜破壁花粉提取物的制備將實施例l獲得的萃取物，按照實施例2方法進行前處理，通過非極性大孔樹脂柱DIOI(生產廠商天津市海光化工有限公司)，用80%(v/v)的乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥。實施例6本發明油菜破壁花粉提取物的制備將實施例1獲得的萃取物，按照實施例2方法進行前處理，通過丙烯酸骨架的HP2MG大孔樹脂柱(生產廠商三菱公司)，用75%(v/v)的乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥。試驗實施例1本發明油菜破壁花粉提取物的抗炎作用本發明油菜破壁花粉提取物對大鼠足跖腫脹度的影響，試驗方法SD大鼠按體重隨機分組每組10只，空白組給予0.4%的吐溫-80，試驗組和原料對照組(實施例1)按表l的劑量給予相應供試品，陽性組給予阿司匹林0.12g/kg，并給予現有花粉藥物前列康(油菜破壁花粉制劑)0.5g/kg劑量和舍尼通(裸麥破壁花粉制劑)0.015g/kg劑量作為對照。灌胃容積均為10ml/kg體重，連續給藥7天，末次給藥前lh用外徑千分尺測量大鼠左后足跖的厚度，給藥后lh左后足跖注射雞蛋清0.05ml/爪，然后于注射雞蛋清后2、4、6小時用外徑千分尺各測量一次左后足跖的厚度，測量時均在相同的部位，計算大鼠左后足跖在給藥后不同時間點的腫脹度，將其左后足跖腫脹度進行組間比較，t檢驗。腫脹度(mm)二左后足跖厚度(注射雞蛋清后)一左后足跖厚度(注射雞蛋清前)，結果如下表l所示。表1本發明提取物對蛋清致大鼠足腫脹度的影響(歹±3)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與模型組比較，'P<0.05P<0.01可見，本發明經大孔樹脂富集后的油菜破壁花粉提取物，抗炎作用較好，抗前列腺炎的療效較現常用的消炎藥阿司匹林更佳，也優于破壁花粉的超臨界提取物，且劑量要低于超臨界提取物及現有制劑。試驗實施例2本發明油菜破壁花粉提取物的抗前列腺增生作用取大鼠，隨機取10只做偽手術空白組，其他大鼠在無菌條件下，用2%的戊巴比妥鈉麻醉，摘除雙側睪丸，縫合皮膚。手術1周后，將去睪丸大鼠按體重隨機分組。除空白組外，其余大鼠每日按0.1ml/200g體重皮下注射丙酸睪酮，劑量為3mg/kg,共30d，試驗組和原料對照組(實施例1)按表2的劑量給予相應實施例或原料供試品，陽性組分別給予前列康0.5g/kg劑量和舍尼通0.015g/kg劑量，空白組和模型組給予等容積的蒸餾水，均灌胃給予，給藥容積為1.0ml/100g體重，1次/d，連續給藥30d。于末次給藥后2h處死動物，剖取前列腺各葉(腹、背+側葉)，用濾紙吸除表面液體，電子天平稱其濕重，計算前列腺各葉重量指數；前列腺各葉重量臟器指數=-xl00體重結果如下表2所示。表2、本發明提取物對丙酸睪酮誘導前列腺增生大鼠模型前列腺指數的影響^is;1<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與模型組比較，><0.05><0.01可見，本發明油菜破壁花粉提取物的抗前列腺增生療效優于油菜破壁花粉超臨界提取物及現有制劑，且劑量明顯低于超臨界提取物及現有制劑。試驗實施例3本發明油菜破壁花粉提取物對前列腺增生病理改變作用取上述試驗實施例2中試驗后的大鼠的前列腺腹葉，固定于10%福爾馬林液中作常規石蠟切片，HE染色，做病理組織學檢査，觀察間質炎癥、水腫、充血和纖維組織增生等情況。前列腺組織學評判標準正常為"-"，病變范圍占全視野1/4以下為"+";病變改變明顯，范圍占1/3左右為"++";病變嚴重，范圍占全視野l/2左右為"+++"。結果如表3所示。表3、本發明油菜破壁花粉提取物對丙酸睪酮誘導大鼠前列腺增生病理改變的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01可見，本發明油菜破壁花粉提取物的抗前列腺增生病理改變，尤其是抗前列腺纖維化方面，療效優于現有破壁花粉制劑，且劑量要低于現有制劑。權利要求1、一種油菜破壁花粉的提純方法，其包括將油菜破壁花粉采用超臨界二氧化碳萃取的萃取物用大孔樹脂富集，采用乙醇進行洗脫，收集洗脫液。2、如權利要求1所述的提純方法，其特征在于所述的乙醇為50%80%體積濃度的乙醇水溶液。3、如權利要求2所述的提純方法，其特征在于所述的大孔樹脂為極性大孔樹脂，采用50~70%的乙醇水溶液洗脫。4、如權利要求1所述的提純方法，其特征在于所述的超臨界二氧化碳萃取的溫度為355(TC，壓力2540Mpa;并采用二級分離，其中分離釜I的溫度為3545。C、壓力812MPa，分離釜II的溫度為2535。C、壓力46Mpa。5、如權利要求4所述的提純方法，其特征在于所述的超臨界二氧化碳萃取中還采用萃取夾帶劑甲醇和/或乙醇，其用量為破壁花粉重量的510%。6、如權利要求1所述的提純方法，其特征在于所述的洗脫液還進一步進行干燥。7、如權利要求16任一項所述的提純方法制得的油菜破壁花粉提取物。8、如權利要求7所述的油菜破壁花粉提取物在制備消炎藥物或保健食品中的應用。9、如權利要求7所述的油菜破壁花粉提取物在制備防治前列腺炎或前列腺增生的藥物或保健食品中的應用。全文摘要本發明公開了一種油菜破壁花粉的提純方法及制得的提取物，該提純方法包括將油菜破壁花粉采用超臨界二氧化碳萃取的萃取物用大孔樹脂富集，采用乙醇進行洗脫，收集洗脫液。本發明方法簡單，易于操作，所提取的有效成分具有較佳的抗炎活性以及抗前列腺增生、抗前列腺纖維化等前列腺疾病的功效。文檔編號A61P13/08GK101347490SQ20071004385公開日2009年1月21日申請日期2007年7月17日優先權日2007年7月17日發明者坤李,李永輝,楊義芳申請人:上海醫藥工業研究院