專利名稱：從銀杏葉中提取分離銀杏內酯b的方法
從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方法
(一) 技術領域-
本發明涉及從植物中提取有效成份的方法，具體涉及從銀杏葉中提取 分離銀杏內酯B的方法。
(二) 背景技術-
銀杏樹又稱白果樹，屬裸子植物，是銀杏科銀杏屬的唯一生存的老樹 種之一，其葉和果具有重要的藥用價值。目前研究最多的是銀杏葉提取物， 它包括黃酮類化合物和銀杏內酯類化合物。黃酮類化合物約有38種，總 含量為22-27%;銀杏內酯類化合物包括銀杏內酯和白果內酯，總含量為 5.4-6.6%。銀杏內酯主要包括銀杏內酯A、 B、 C、 J和M單體；據文獻報 道，銀杏內酯中各單體的藥物功能有一定差異，其中，銀杏內酯A、 B對 治療心腦血管疾病具有顯著療效，而白果內酯對治療神經系統疾病則藥效 獨特，為了提高其藥用治療效果，有時必須將各單體分離純化；由于白果 內酯是倍半萜物質，而銀杏內酯A、 B、 C、 J、 M是二萜類物質，它們的分 子結構較為相似，極性差異也很小，致使銀杏內酯中的各單體的提取與分 離比較困難。現有的銀杏內酯B的提取方法有很多種，如微波提取法、溶 液提取法等，例如申請號為200510063407,X，名稱為《—種從銀杏葉或 銀杏葉提取物中提取銀杏內酯B的新方法 >>的中國發明專利，公開了一 種銀杏葉或銀杏葉提取物中提取銀杏內酯B的方法，該提取方法步驟為 1)取銀杏葉或銀杏葉提取物加水煮沸，冷藏，取上清液過濾，得濾液；2) 濾液用正丁醇或與正丁醇相似溶解度或極性的溶劑進行萃取，分出水層； 3)回收萃取液中的溶劑，干燥，得干燥物；4)干燥物中加入乙醇煮沸使 其溶解，冷藏，抽濾，洗滌得晶體；5)晶體中加入乙醇使其溶解，冷藏， 抽濾，得銀杏內酯B單體；6)銀杏內酯B單體經真空干燥得到純度達9(m 以上的銀杏內酯B單體。
(三)
發明內容
本發明將公開一種提取所得率高、純度高的從銀杏葉中提取分離銀杏 內酯B的方法。
本發明從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方法，其步驟如下 l)取銀杏葉，用由高到低不同濃度的乙醇進行提取，合并提取液，回
收乙醇，得到濃縮后的提取液；
稱取一定量的銀杏葉，可先用體積濃度為60-80%的乙醇在50-70'C時
對銀杏葉提取l-3個小時，其中，銀杏葉與乙醇的配比按銀杏葉的重量乙醇的體積=1: 8-10;將銀杏葉分離出來，再用體積濃度為30-55%的乙醇 在50-70。C時對銀杏葉提取l-3個小時，其中，銀杏葉與乙醇的配比按銀 杏葉的重量乙醇的體積=1: 6-8;再將銀杏葉分離出來，用體積濃度為 10-25%的乙醇在50-70°(3時對銀杏葉提取1-3個小時，其中，銀杏葉與乙 醇的配比按銀杏葉的重量乙醇的體積=1: 5-7;合并提取液，回收乙醇， 將提取液濃縮至銀杏葉重量的8-10倍體積；
2) 向濃縮后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有機相后濃縮至浸
膏；
可向濃縮液中加入等體積的乙酸乙酯萃取， 一般來說，萃取3次所達 到的效果較好；
3) 將步驟2)所得浸膏稀釋后上選擇性極性無孔吸附樹脂柱，用乙醇洗 脫，所得洗脫液回收乙醇后，再用乙醇結晶得到銀杏內酯類化合物；
所述選擇性極性無孔吸附樹脂柱的型號可為ADS-15，或ADS-17，或 ADS-F8;將步驟2)所得浸膏用50-200倍于其重量的水稀釋后上柱，可先 用水洗，直至流出液無色；然后再用體積濃度為50-70%的乙醇洗脫，所述 洗脫劑的體積用量可為上述浸膏重量的30-60倍；將收集得到的洗脫液回 收乙醇，濃縮至浸膏，再用體積濃度為50-80%的乙醇為溶劑結晶，所得結 晶即為銀杏內酯類化合物；
4) 將銀杏內酯類化合物結晶上硅膠柱，用正己垸和乙酸乙酯的混合液 洗脫，收集洗脫液，得到富集銀杏內酯B的洗脫液；
所述正己烷和乙酸乙酯的混合液中正己垸和乙酸乙酯的體積比最好
為9: 1-2: 8;在洗脫的過程中，以蒸發光散射檢測器在線檢測定位，待
溶劑峰出完后的第三個峰處開始收集洗脫液，得到富集銀杏內酯B的洗脫 液；
5) 回收步驟4)中收集的洗脫液中的溶劑，再用乙醇結晶，得到銀杏內 酯B。
回收步驟4)中收集的洗脫液中的溶劑，再用體積濃度為30-70%的乙 醇對其結晶，所得結晶即為銀杏內酯B單體。 本發明的優點
本發明采用由高到低不同濃度的乙醇對銀杏葉進行提取，使銀杏內酯 B單體的提取率提高了 10%以上；本發明中還采用了特殊的選擇性極性無 孔吸附樹脂進行除雜，可除掉大部分影響硅膠柱分離的雜質，實現了一次 上柱即可分離得到銀杏內酯B單體，且純度達到99%以上；與現有技術相
比，本發明提供的方法工藝簡單、生產成本低，所得產品純度高，更易于 產業化的生產。
具體實施例方式
實施例11) 取10千克銀杏葉，用100升體積濃度為80%的乙醇在5(TC時對銀 杏葉提取1小時，用200目的濾布將銀杏葉分離出來；再用60升體積濃 度為55%的乙醇在7(TC時對銀杏葉提取1小時，用200目的濾布將銀杏葉 分離出來；再用50升體積濃度為25%的乙醇在5(TC時對銀杏葉提取1小 時，用200目的濾布將銀杏葉分離出來；合并三次提取所得的提取液，回 收乙醇，將提取液濃縮至100升濃縮液；
2) 向濃縮液中加入100升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分離出的有機 相，回收有機相后濃縮得到500克浸膏；
3) 將步驟2)中所得浸膏加50倍體積水稀釋后上ADS-15柱，先用水洗， 直至流出液無色，再用15升體積濃度為50%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回 收乙醇，濃縮至浸膏，再用體積濃度為50%的乙醇結晶，得到70克銀杏內 酯類化合物晶體；
4) 將銀杏內酯類化合物結晶上硅膠柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液 進行梯度洗脫，其中，正己垸和乙酸乙酯的體積比為9: 1-2: 8;在洗脫 過程中，以蒸發光散射檢測器在線檢測定位，待溶劑峰出完后的第三個峰
處開始收集洗脫液，得到富集銀杏內酯B的洗脫液；
5) 回收步驟4)中收集的洗脫液中的溶劑，再用體積濃度為40%的乙醇 對其結晶，得到銀杏內酯8單體4.55克。
實施例2
1) 取50千克銀杏葉，用400升體積濃度為60%的乙醇在70。C時對銀 杏葉提取3小時，用200目的濾布將銀杏葉分離出來；再用400升體積濃 度為30%的乙醇在70。C時對銀杏葉提取3小時，用200目的濾布將銀杏葉 分離出來；再用300升體積濃度為10%的乙醇在7(TC時對銀杏葉提取3小 時，用200目的濾布將銀杏葉分離出來；合并三次提取所得的提取液，回 收乙醇，將提取液濃縮至500升濃縮液；
2) 向濃縮液中加入500升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分離出的有機 相，回收有機相后濃縮得到1. 5千克浸膏；
3) 將步驟2)中所得浸膏加200倍體積水稀釋后上ADS-17柱，先用水 洗，直至流出液無色，再用60升體積濃度為70%的乙醇洗脫，收集洗脫液， 回收乙醇，濃縮至浸膏，再用體積濃度為70%的乙醇結晶，得到233克銀 杏內酯類化合物晶體；
4) 將銀杏內酯類化合物結晶上硅膠柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液
進行梯度洗脫，其中，正己烷和乙酸乙酯的體積比為9: 1-2: 8;在洗脫
過程中，以蒸發光散射檢測器在線檢測定位，待溶劑峰出完后的第三個峰
處開始收集洗脫液，得到富集銀杏內酯B的洗脫液；
5) 回收步驟4)中收集的洗脫液中的溶劑，再用體積濃度為30%的乙醇 對其結晶，得到銀杏內酯B單體81.90克。實施例3
1) 取40千克銀杏葉，用280升體積濃度為70%的乙醇在7(TC時對銀 杏葉提取1小時，用200目的濾布將銀杏葉分離出來；再用280升體積濃 度為50%的乙醇在6(TC時對銀杏葉提取2小時，用200目的濾布將銀杏葉 分離出來；再用280升體積濃度為20%的乙醇在70。C時對銀杏葉提取2小 時，用200目的濾布將銀杏葉分離出來；合并三次提取所得的提取液，回 收乙醇，將提取液濃縮至400升濃縮液；
2) 向濃縮液中加入400升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分離出的有機 相，回收有機相后濃縮得到1. 2千克浸膏；
3) 將步驟2)中所得浸膏加100倍體積水稀釋后上ADS-F8柱，先用水 洗，直至流出液無色，再用70升體積濃度為60%的乙醇洗脫，收集洗脫液， 回收乙醇，濃縮至浸膏，再用體積濃度為80%的乙醇結晶，得到225克銀 杏內酯類化合物晶體；
4) 將銀杏內酯類化合物結晶上硅膠柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液 進行梯度洗脫，其中，正己烷和乙酸乙酯的體積比為9: 1-2: 8;在洗脫 過程中，以蒸發光散射檢測器在線檢測定位，待溶劑峰出完后的第三個峰
處開始收集洗脫液，得到富集銀杏內酯B的洗脫液；
5) 回收步驟4)中收集的洗脫液中的溶劑，再用體積濃度為50%的乙醇 對其結晶，得到銀杏內酯B單體16.72克。
權利要求
1、從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方法，其步驟如下1)取銀杏葉，用由高到低不同濃度的乙醇進行提取，合并提取液，回收乙醇，得到濃縮后的提取液；2)向濃縮后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有機相后濃縮至浸膏；3)將步驟2)所得浸膏稀釋后上選擇性極性無孔吸附樹脂柱，用乙醇洗脫，所得洗脫液回收乙醇后，再用乙醇結晶得到銀杏內酯類化合物；4)將銀杏內酯類化合物結晶上硅膠柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脫，收集洗脫液，得到富集銀杏內酯B的洗脫液；5)回收步驟4)中收集的洗脫液中的溶劑，再用乙醇結晶，得到銀杏內酯B。
2、 根據權利要求1所述的從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方法， 其特征在于步驟l)中，先用體積濃度為60-80%的乙醇對銀杏葉進行提 取；然后用體積濃度為30-55%的乙醇對銀杏葉進行提取；再用體積濃度為 10-25%的乙醇對銀杏葉進行提取。
3、 根據權利要求1或2所述的從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方 法，其特征在于步驟1)中，所述提取的溫度為50-70°C。
4、 根據權利要求2所述的從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方法， 其特征在于步驟l)中，第一次提取時銀杏葉與乙醇的配比按銀杏葉的重 量乙醇的體積=1: 8-10;第二次提取時銀杏葉與乙醇的配比按銀杏葉的 重量乙醇的體積=1: 6-8;第三次提取時銀杏葉與乙醇的配比按銀杏葉 的重量乙醇的體積=1: 5-7。
5、 根據權利要求1或2所述的從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方 法，其特征在于步驟2)中，所述加入的乙酸乙酯的體積與濃縮后的提取 液的體積比為l: 1，萃取的次數為3次。
6、 根據權利要求1或2所述的從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方 法，其特征在于步驟3)中，所述選擇性極性無孔吸附樹脂型號為ADS-15， 或ADS-17，或ADS-F8。
7、 根據權利要求1或2所述的從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方 法，其特征在于步驟3)中，所述洗脫用乙醇的體積濃度為50-70%。
8、 根據權利要求1或2所述的從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方 法，其特征在于步驟3)中，所述結晶用乙醇的體積濃度為50-80%。
9、 根據權利要求1或2所述的從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方 法，其特征在于步驟4)中，所述正己垸和乙酸乙酯混合液中，正己垸和 乙酸乙酯的體積比為9: 1-2: 8。
10、 根據權利要求1或2所述的從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方 法，其特征在于步驟4)中，以蒸發光散射檢測器在線檢測定位，收集洗脫液。
全文摘要
本發明將公開一種從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方法，其步驟如下1)取銀杏葉，用由高到低不同濃度的乙醇進行提取，合并提取液，回收乙醇，得到濃縮后的提取液；2)向濃縮后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有機相后濃縮至浸膏；3)將步驟2)所得浸膏稀釋后上選擇性極性無孔吸附樹脂柱，用乙醇洗脫，所得洗脫液回收乙醇后，再用乙醇結晶得到銀杏內酯類化合物；4)將銀杏內酯類化合物結晶上硅膠柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脫，收集洗脫液，得到富集銀杏內酯B的洗脫液；5)回收步驟4)中收集的洗脫液中的溶劑，再用乙醇結晶，得到銀杏內酯B單體。本發明提供的方法工藝簡單、生產成本低，所得產品純度高，更易于產業化的生產。
文檔編號A61K36/16GK101412725SQ20071005024
公開日2009年4月22日 申請日期2007年10月15日 優先權日2007年10月15日
發明者唐江明, 孫莉莉, 李振志, 羅增桂 申請人:桂林市振達生物科技有限責任公司