專利名稱：一種中藥組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥組合物，特別涉及一種冠心病治療的中藥組合物。
技術背景傳統中藥復方制劑"冠心II號"是一種由丹參和川芎作為君藥，紅花與 赤芍作為臣藥，以及降香組成的中藥復方，丹參、川芎、紅花、赤芍和降香的比例為重量比2丄1丄1，該藥具有行氣活血化瘀的功效，是臨床上治療冠心 病的經典名方。已有大量的文獻表明"冠心II號"在增加冠脈血流量，緩解 心絞痛，改善s-t段，調節血脂，降低內皮素，降低血粘度均等方面均有良好 療效。發明內容發明人在研究中發現，將冠心II號整方及其各單位藥、及將有效的單位藥合用(劑量等同于母方中的劑量)，通過比較藥效學研究發現川芎、丹參、紅花三藥組合(以下簡稱為"丹川紅")的藥效學等同于冠心n號整方，即在增加心肌血流量、抗心肌缺血、抗心肌細胞凋亡與減少心梗面積等方面的療 效，精簡方"丹川紅"與其母方"冠心II號"其有高度的一致性。在此研究基礎上，發明人提出本發明的技術方案 一種治療冠心病的中 藥組合物，由丹參、川芎、紅花按2丄1的重量比組成。將本發明的中藥組合物，運用現有中藥制劑領域中的常規方法，可以制 備各種藥學可接受形式的各種常規口服制劑。例如可以將這些原料藥研成粉末混合后制成散劑沖服。也可以先將丹參、川芎、紅花按2丄1的重量比混合， 制得其水提物或醇提物作為藥物有效成分，再加入制備不同劑型所需的各種 口服制劑的常規輔料，制得顆粒劑、膠囊劑、片劑、口服液等。如可以先將丹參、川芎、紅花按2:1:1的重量比混合，加水浸泡20 40分鐘后，水煎后取 濾液，濃縮干燥即得本發明藥物的凍干粉。也可以用醇提法，制備出本發明 藥物的醇提取物。本發明是從中藥大復方中精簡優化單味藥較少但療效等同的中藥小復 方，通過比較藥效學研究、優化配伍方案，將由原方的五味藥精簡為三味藥， 是一來源于母方又優于母方的全新中藥小復方，該小復方對冠心病療效肯定，且較母方"冠心II號"有如下優勢在療效一致的前提下，原材料浪費小、 生產成本低；便于進行復方作用原理、質量控制、藥物動力學等研究及治療 藥物監測；可減少中藥材的農藥、重金屬等污染及其產地、氣候等對品質的 影響。本發明通過運用科學方法對傳統中藥復方進行研究，并糾正長期以來 人們對經驗復方運用上的偏見，找到傳統復方冠心II號的有效作用部位，從 而提出療效一致的簡減方。
圖l:各實驗組心梗面積測定結果柱狀圖； 圖2: TUNEL法檢測心肌細胞凋亡各實驗組的熒光顯微圖； 圖3: TUNEL法檢測心肌細胞凋亡實驗組的凋亡指數柱狀圖； 圖4: Caspase-3活性檢測柱狀圖。
具體實施方式
實施例l:本發明中藥組合物丹川紅合煎劑的制備將丹參400g、川芎200g、紅花200g加入不銹鋼奶鍋中，加12倍水并浸 泡30分鐘；電磁爐加熱，待第一次煮沸后，煎煮30分鐘，藥液以三層紗布 和脫脂棉過濾；再加12倍量水繼續煎煮30分鐘，三層紗布和脫脂棉過濾后 將兩次藥液合并；將合并液在65° C下旋轉蒸發得到濃縮液后，制備成凍干 粉，保存凍干粉于4° C冰箱備用，提取物得率約33.19%。使用前，凍干粉 用蒸餾水溶解。比較例"冠心II號"煎劑的制備冠心II號1200g，包括400g丹參；200g川芎；200g赤芍；200g紅花、 200g降香。當五個藥材一起煎煮時，冠心II號制成凍干粉的得率(重量比， 干粉/生藥)為22.86% (w/w)。藥效學比較動物雄性SD大鼠42只，體重200 300g。試劑TUNEL試劑盒(美國ROCHE公司)；Caspase-3試劑盒(美國 CHEMICON公司)其余藥品和試劑均為市售分析純。方法大鼠隨機分為冠心II號組、丹川紅合煎劑組、模型對照組、假手 術組。所有計數資料均采用均數土標準差表示，使用統計軟件SPSS10. 0進 行統計分析，以one-way ANOVA方法進行總體比較，q檢驗做組間比較，以P<0.05為有統計學顯著性差異。分別灌胃給藥物20g/kg，或0.9%生理鹽水。給藥后30分鐘，建立大鼠急 性心肌梗塞模型。用3X戊巴比妥鈉(1.5ml/kg)腹腔內注射麻醉，四肢皮下連 接心電圖電極記錄整個實驗過程。常規消毒，行氣管插管，接動物人工呼吸 機，調節呼吸頻率為80 90次/分，于左側第四、五肋間打開胸腔，暴露心 臟，于肺動脈圓錐與左心耳之間、左心耳根部下方2 3mm處穿線并結扎冠 狀動脈左前降支，造成冠狀動脈阻塞。關閉胸腔，縫合皮膚，局部應用青霉 素以預防感染。假手術組只穿線不結扎。術后觀察心電圖改變，心電圖ST段 明顯抬高和/或T波高聳則說明缺血模型成功。造模后的大鼠分成兩部分， —部分缺血3h后收集心臟，用于檢測心肌細胞凋亡指數和Caspase-3濃度。 另一部分缺血24h收集心臟，用于測定心梗面積。 (1)心梗面積測定缺血24h， 3%伊文藍染料lml注入左心室，勾畫出危險區。剪下大鼠心 臟，生理鹽水沖洗心腔殘液，凍于-2(TC冰箱。自結扎線以下，從心尖起平行 切成等厚5片。在37。C， 1%氯化三苯基四氮唑(TTC)磷酸緩沖液(PH7.4) 中水浴15min。出現三個分區未梗死區(紅染)，梗死區(未紅染)，危險區(藍 染)。危險區面積大小以危險區占左室面積的百分比用表示(Ar/LV)，心梗面 積大小用梗死區占危險區的百分比表示(An/Ar)。實驗結果見表1及附圖1,各組危險區面積大小(Ar/LV)組間比較，P >0.05，無顯著差異，表明造模成功。各給藥組心肌梗死范圍(An/Ar)明顯 減小，與模型對照組比較有顯著性差異(P〈0.05，P〈0.01);而冠心II號組和 丹川紅組比較無顯著差異。表l 心梗面積(％) (jc±s，n=6)組別劑量(g/kg)Ar/LVAn/Ar模型對照組一0.516±0.2360.541±0.132冠心n號組300.511 ±0.0680.365±0細**丹川紅組200.495 ±0.0490.386±0.084*注與模型對照組比較，*尸<0. 05， **尸<0. 01。(2)細胞凋亡檢測缺血3h，取結扎部位以下左室心肌組織放入4%多聚甲醛固定，常規石蠟 包埋、切片，用脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP缺口末端標記法(TUNEL) 標記凋亡細胞(測定方法遵照羅氏凋亡檢測試劑盒說明書)。每個石蠟包埋的 組織塊被切成4-5um厚度的切片，蛋白酶K孵育，修復后加上TUNEL反應 液。切片加蓋含DAPI的封片劑來計數全部細胞。每個石蠟塊取6個切片，每 張切片任選10個視野，計數凋亡細胞數和細胞總數。凋亡指數(Apoptosis Index) AI=(凋亡細胞數/細胞總數)X100%。TENEL法檢測丹川紅合煎劑對大鼠心肌缺血心肌凋亡的影響見圖2，在 熒光倒置顯微鏡(OLYMPUS 1X71)下觀察，凋亡的細胞核顯示綠色熒光， 經DAPI染色后的所有細胞核顯示藍色熒光。圖1中，從左至右依次為假手 術組、冠心II號組、丹川紅組、模型對照組的熒光顯微圖。圖中第一行為各 組切片經TUNEL染色呈綠色熒光的凋亡細胞核；第二行為各組切片經DAPI 染色呈藍色熒光的全部細胞核。模型對照組大鼠心肌細胞凋亡指數顯著高于假手術組(P < 0.01)，冠心 II號組、丹川紅合煎劑組心肌細胞凋亡指數低于模型對照組，差異有顯著性 (P<0.01)，而兩藥物組比較無顯著差異。各組凋亡指數柱狀圖見圖3，從左 至右，依次為假手術組、冠心II號組、丹川紅組和模型對照組。與模型對照 組比較，** P<0.01;與假手術組比較，## P<0.01。 (3)心肌細胞Caspase-3活性測定缺血3h，取結扎部位以下左室心肌組織放-7(TC冰箱待測，測定方法遵照 CHEMICON公司Caspase-3濃度檢測試劑盒說明書。冷凍的左室心肌組織在 冰的溶解緩沖液中勻漿。BCA法測定蛋白濃度。每孔加36 ug的蛋白質與 20 u g Caspase-3底物Ac-DEVD-pNA共同孵90min。游離的pNA在405 nm 下的酶標儀中讀數。結果計算依據標準曲線，標準曲線濃度范圍10~640" MofpNA， 單位u mol pNA/14 g protein, x土s, n=6。Caspase-3活性檢測結果見圖4，從.左至右，依次為假手術組、冠心II號 組、丹川紅組、模型對照組。與模型對照組比較，* P<0.05， ** P<0.01; 與假手術組比較，## P<0.01。而兩藥物組比較無顯著差異。與假手術組比 較，模型對照組心肌缺血3h心肌組織的Caspase-3活性顯著增加(P<0.01)， 與模型對照組比較，冠心II號組、川丹紅組Caspase-3活性明顯降低(P < 0.05，P<0.01)，而兩藥物組比較無顯著差異。 實施例2:丹川紅膠囊劑的制備按質量比2: 1: 1比例取丹參、川芎、紅花粉碎，加90%乙醇回流3次， 第一次2小時，第二次和第三次各為1.5小時，分別濾過，合并3次濾液，減壓濃縮成浸膏，加入等于浸膏io倍量的水，邊加邊攪拌，靜置沉淀，濾過，沉淀物于6(TC以下干燥、粉碎，過60目篩，分裝于膠囊內，每粒含丹川紅提 取物0.4g。用量2-4粒/次，3次/日。 實施例3:丹川紅片劑的制備按質量比2: 1: 1比例取量后，將丹參、川芎、紅花粉碎成粗顆粒，用 適量70%乙醇濕潤、攪拌，放置4-8小時后裝入滲漉缸內，鋪勻壓緊，上面 覆蓋紗布和卵石塊防止藥渣上浮。加入70%乙醇浸過藥面30cm，浸泡48小 時后，開始滲漉，流速控制在100-150ml/min，收集滲漉液，上面不斷加入70% 乙醇溶媒，至滲漉液量達到藥材重量的6-8倍量。最后漉出液量很淡，生物堿 反應呈陰性時停止滲漉。把滲漉液放入減壓蒸發濃縮罐中，減壓回收乙醇， 至乙醇全部回收后將濃縮液轉入敞口蒸發鍋內，加熱繼續濃縮稠膏狀，制成 軟材。過20目篩制成濕顆粒攤于干燥盤內，8(TC溫度干燥后，取出加入0.8% 硬酯酸鎂，再過20目篩制粒，混勻、稱重供壓片。調節片重與硬度合格進行 壓片，片重為每三片重相當于原藥材5g。用法和劑量2-3片/次，3次/曰。
權利要求
1.一種中藥組合物，其特征在于由2∶1∶1的重量份的原料藥丹參、川芎、紅花制成。
2. 如權利要求1所述的中藥組合物，包含常規藥學載體，其特征在于由 原料藥丹參、川芎、紅花按2:1:1的重量比混合，制備其水提取物或醇 提取物作為有效成分。
3. 如權利要求1或2所述的藥物的制備方法，其特征在于包括下列步驟 將重量份的丹參2份、川芎1份、紅花1份，加水浸泡20~60分鐘后， 煎煮兩次，合并過濾藥液，將合并液濃縮后制得本發明的藥物活性組分。
4. 如權利要求4所述的藥物的制備方法，其特征在于合并液濃縮步驟是 指在65° C下旋轉蒸發濃縮。
5. 如權利要求i或2所述的藥物的制備方法，其特征在于包括下列步驟-將重量份的丹參2份、川芎1份、紅花1份粉碎，加卯~95%乙醇回流 3次，分別濾過，合并3次濾液，減壓濃縮成浸膏，制得本發明的藥物 活性組分。
6. 如權利要求2所述藥物的口服制劑。
7. 如權利要求3所述藥物的膠囊劑。
8. 如權利要求3所述藥物的顆粒劑。
9. 如權利要求3所述藥物的片劑。
10. 如權利要求1、 2、 6~8所述之一的中藥組合物作為治療冠心病的藥物的 應用。
全文摘要
本發明公開了一種治療冠心病的中藥組合物，由丹參、川芎、紅花按2∶1∶1的重量比組成。將本發明的中藥組合物，運用現有中藥制劑領域中的常規方法，制備出含有本發明丹參、川芎、紅花按2∶1∶1的重量比得到的水提物或醇提物的各種藥學可接受形式的口服制劑，如片劑、顆粒劑、膠囊劑等。本發明是從中藥大復方中精簡優化出療效等同的中藥小復方，在療效一致的前提下，原材料浪費小、生產成本低；便于進行復方作用原理、質量控制、藥物動力學等研究及治療藥物監測；可減少中藥材的農藥、重金屬等污染及其產地、氣候等對品質的影響。
文檔編號A61K36/537GK101401842SQ20081014358
公開日2009年4月8日 申請日期2008年11月13日 優先權日2008年11月13日
發明者平 任, 鋒 秦, 熙 黃 申請人:中南大學