專利名稱：：一種奈拉濱注射液及其制備方法
技術領域：
：本發明涉及醫藥
技術領域：
，具體涉及一種奈拉濱注射液及其制備方法。
背景技術：
：T-ALL和T-LBL是兩種惡化速度非常快的疾病，它們嚴重影響著機體的造血功能。T-ALL在我國急性淋巴細胞白血病(急淋)的發病率僅次于普通型急淋(C-ALL)，占急淋發病的第二位。T細胞急性淋巴細胞性白血病通常發病于較大的兒童、青少年和青年，較B細胞急性淋巴細胞性白血病不太常見。美國每年大約有1600名成人和兒童被診斷患有T-ALL或T-LBL。隨著環磷酰胺、阿糖胞苷和左旋門冬酰胺酶的應用，T-細胞淋巴細胞白血病和T-細胞淋巴母細胞瘤的反應率和生存率有了很大的改觀。但對于復發病人的補救化療方案的效果有限，反應率低，許多病人必須進行骨髓抑制，而緩解的病人進行骨髓移植更有效。開發特異性地針對惡性T-細胞的化合物是關鍵。核苷類似物被證明是治療血液系統腫瘤的相當成功的細胞毒藥物。脫氧鳥苷酸類似物9-P-D-arabinofUranosylguanine(ara-G)發現于20世紀60年代，但由于溶解性差而未能用于臨床。但開始于70年代的對嘌呤核苷磷酸酶(PNP)缺陷癥的研究則為開發脫氧鳥苷類似物提供了有益的思路。PNP催化脫氧鳥苷酸，缺乏PNP的病人出現了dGTP-介導的T-細胞淋巴細胞減少癥，而B細胞的數量卻沒有降低。這表明脫氧鳥苷酸類似物可以用來治療T-細胞惡性腫瘤，如T-ALL。實際上ara-G就選擇性地對T細胞有細胞毒作用。之后開發了ara-G的水溶性前藥奈拉濱。臨床和藥物代謝研究發現奈拉濱是一種在血漿中可產生ara-G，在白血病細胞中可產生ara-GTP的前藥。奈拉濱被腺苷脫氨酶去甲基形成ara-G，在細胞內被進一步轉化為活性形式ara-GTP，am-GTP摻入到DNA可導致DNA合成的終止和細胞死亡。奈拉濱為罹患這兩種罕見但致命疾病的患者帶來了希望。藥物在制備注射液時，要檢査澄明度，這是注射劑成為合格品的基本標準之一，因此，在制劑制備的過程中要充分考慮主藥和藥用輔料性質，同時還要考慮藥用輔料對主藥的影響等等因素，經過嚴格的、科學的實驗才能制備出合格的注射制劑。
發明內容基于上述原因，我們通過科學的實驗發現，在奈拉濱在一定溫度的注射用水中具有很好的溶解性，而藥用輔料氯化鈉對奈拉濱具有促析出的作用，這就導致產品的澄明度不合格，而我們在科學的實驗基礎上，將溶液保持在一定溫度下，將主藥和藥用輔料同時加入，并且在所有制劑制備過程中，保持這個溫度，使奈拉濱和氯化鈉形成穩定的溶液體系，制劑制備后，澄明度的合格率大大提高。本申請通過以下技術方案實現的。一種奈拉濱注射液的制備方法，其特征在于原料藥奈拉濱和藥用輔料氯化鈉在制備制劑中保持溶液溫度50°C—90。C。其制備方法為將奈拉濱、氯化鈉加入至5(TC—9(TC注射用水中，攪拌，使完全溶解，加入鹽酸調節pH值至5.07.0，加入5(TC—卯。C注射用水，攪拌均勻，加入活性炭，攪拌均勻，5(TC—90。C靜置，粗濾脫去活性炭，藥液保持5(TC—9(TC，用0.22pm濾膜將藥液趁熱過濾，將藥液灌注于輸液瓶中，使用處理過的膠塞壓塞，溫度保持在5(TC—9(TC，并軋上鋁蓋，將樣品放入滅菌鍋中，熱壓蒸汽滅菌，既得。其中制劑制備中溶液溫度為6(TC—卯X:。其中制劑制備中溶液溫度為6(TC—8(TC。一、檢測方法照高效液相色譜法(中國藥典2005年版二部附錄VD)測定。色譜條件與系統適用性試驗采用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液-甲醇(70:30)為流動相，流速0.75ml/min，檢測波長247nm。理論板數按奈拉濱計不低于2000;奈拉濱峰與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。對照品溶液的制備取奈拉濱對照品約10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加流動相超聲使溶解，并用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備取本品，精密量取5ml置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，再精密量取5ml至50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。測定法精密量取對照品溶液和供試品溶液各20pl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，測定結果見表l。表1奈拉濱注射液三批樣品含量檢測結果(HPLC法)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>結論奈拉濱注射液樣品含量均在標示量的90.0%110.0%。二、制劑制備方法研究1、主藥的性質本品為白色或類白色粉末。本品在水和乙醇中不溶。2、奈拉濱水溶解性研究取奈拉濱約O.lg，置于1000ml量瓶中，加水約至刻度，每隔5分鐘振搖一次，觀察30分鐘溶解情況。該樣品不溶于水。取奈拉濱約0.25§，置于50ml量瓶中，加水約至刻度，加熱至50—90。C，觀察溶解情況。該樣品完全溶解，濃度為5mg/ml，可以滿足本制劑的需要。3、奈拉濱水溶液物理穩定性研究制備奈拉濱水溶液，濃度為5mg/ml，取2ml灌封于2ml白色曲頸易折安瓿中，制得樣品。樣品依下列條件放置，測定樣品溶液可見異物的變化情況，考察奈拉濱水溶液的物理穩定性，結果見表-2。表-2奈拉濱水溶液物理穩定性結果考察條件Ohnj'見異物情況4h可見異物情況"~~8h可見異物情況25°C符合規定符合規定符合規定結論樣品溶液在放置過程中，物理穩定性良好。4、奈拉濱水溶液的化學穩定性研究制備奈拉濱水溶液，濃度為5mg/ml，取2ml灌封于2ml白色曲頸易折安瓿中，制得樣品。樣品依下列條件放置，測定樣品溶液有關物質的變化情況，考察奈拉濱水溶液的化學穩定性，結果見表-3。表-3奈拉濱水溶液化學穩定性結果考察條件0小時(有關物質％)4小時(有關物質％)8小時(有關物質％)25。C0.27_0.28_0.28結論樣品溶液在放置過程中，化學穩定性良好。5、工藝篩選研究在處方前研究的基礎上，依序篩選滲透壓調節劑的用量、pH值范圍，初步確定處方；依序篩選炭脫工藝、滅菌工藝，初步確定制備工藝。滲透壓調節劑篩選測定奈拉濱水溶液的滲透壓制備奈拉濱水溶液，濃度為5mg/ml，測定滲透壓，結果見表-4。表-4奈拉濱水溶液滲透壓測定結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結果奈拉濱水溶液的滲透壓較低，為8mOsm。結論上述試驗結果表明，奈拉濱水溶液的滲透壓較低，因此需要對其滲透壓進行調節，參考國外制劑處方，滲透壓調節劑選用氯化鈉，其用量為4.5mg/ml，考慮到當氯化鈉溶液的濃度為0.9%時為等滲溶液，故我們選擇4.5mg/ml和9.0mg/ml兩個處方，配制樣品溶液并測定其滲透壓。滲透壓調節劑用量的篩選依處方1和處方2，制備奈拉濱樣品溶液，取2ml灌封于2ml白色曲頸易折安瓿中，制得樣品。取樣品，測定滲透壓，結果見表-5。表-6不同處方制備的樣品溶液滲透壓測定結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結果處方1的滲透壓為155mOsm，本品為不等滲溶液；處方2的滲透壓為295mOsm，本品為等滲溶液。結論根據以上試驗結果，可以分析出國外上市的奈拉濱注射液為低滲溶液。因此，我們考慮，是否氯化鈉的加入量不同，會對奈拉濱注射液的穩定性產生影響，故選擇處方1和處方2處方分別制備的樣品進行穩定性考察，以考察處方中氯化鈉的用量。樣品溶液穩定性考察取上述樣品，依下列條件放置。測定樣品的外觀、可見異物、滲透壓，有關物質等指標的變化情況，考察不同處方所制備的樣品穩定性，結果見表-6。表-6不同處方制備的樣品溶液穩定性考察結果外觀無色澄明液體無色澄明液體無色澄明液體無色澄明液體無色澄明液體無色澄明液體無色澄明液體處萬1可見異物符合規定符合規定符合規定符合規定符合規定符合規定符合規定(mOsm)155152156157159151154有關物質%0.410.410.360.350.360.370.36外觀無色澄明液體無色澄明液體有白色結晶析出無色澄明液體有白色結晶析出無色澄明液體處方2可見異物符合規定符合規定不符合規定符合規定不符合規定符合規定(mOsm)294293291289287296有關物質%0.290.500.470.284500Lx有白色結晶析出不符合規定288結果根據以上考察結果可知，奈拉濱注射液中氯化鈉的加入量對其穩定性有影響，即氯化鈉能促進奈拉濱的析出，故決定采用氯化鈉的用量為4.5mg/ml。初步選擇處方1為本制劑處方。另外，參考有關文獻，大容量注射劑靜脈滴注時，如果其為低滲溶液，可能會產生溶血現象，考慮到本產品的臨床用藥安全性，故取處方1的樣品進行溶血試驗，該樣品未發生溶血現象，因此，可以證明依處方l所制備的樣品，臨床應用時不會產生溶血現象。結論根據以上試驗結果及參考國外制劑處方，初步選擇滲透壓調節劑為氯化條件60。C低溫4°C強光4500Lx局溫60°C低溫4°C旭lg天天天天天天天wws天ws天^鈉，用量為4.5mg/ml。pH值范圍篩選依處方，制備奈拉濱樣品溶液，分為7份，用lmol/L鹽酸或lmol/L氫氧化鈉分別調節樣品溶液的pH值為4.0、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、8.0，取2ml灌封于2ml白色曲頸易折安瓿中，制得樣品。取樣品，6(TC放置4小時，測定樣品的外觀、可見異物及有關物質變化情況，考察pH值的影響結果見表-6。表-7不同pH值的樣品溶液穩定性考察結果處方原輔料名稱處方奈拉濱5.0g氯化鈉4.5g注射用水至1000ml考察結果項目外觀性狀可見異物有關物質(％)時間(h)pH值04.0無色澄明液體符合規定1.305.0無色澄明液體符合規定0.905.5無色澄明液體符合規定0.556.0無色澄明液體符合規定0.596.5無色澄明液體符合規定0.717.0無色澄明液體符合規定0.808.0無色澄明液體符合規定1.0624.0無色澄明液體符合規定1.215.0無色澄明液體符合規定0.885.5無色澄明液體符合規定0.556.0無色澄明液體符合規定0.616.5無色澄明液體符合規定0.697.0無色澄明液體符合規定0.798.0無色澄明液體符合規定1.1144.0無色澄明液體符合規定1.2495.0無色澄明液體符合規定0.885.5無色澄明液體符合規定0.536.0無色澄明液體符合規定0.626.5無色澄明液體符合規定0.697.0無色澄明液體符合規定0.788.0無色澄明液體符合規定1.11結果由上述試驗結果可知，樣品溶液在各pH值條件下，在放置過程中，樣品外觀性狀及可見異物測定結果均良好。樣品溶液在放置過程中，pH值為4.0或8.0時，有關物質有明顯增加(大于1.0%);pH值為5.0時，有關物質有一定增加，但依然在規定范圍之內(小于1.0%);pH值為5.57.0時，有關物質隨著pH值的增加而加大，但依然在規定范圍之內(小于1.0%);而當pH值為5.5時，有關物質測定結果良好。結論由此可以確定奈拉濱注射液的pH值范圍為5.07.0，最佳pH值為5.5。整理初步確定的處方及工藝工藝將處方量的奈拉濱、氯化鈉加入至總量80%的50—90。C注射用水中，攪拌，使完全溶解。加入適量的lmol/L鹽酸調節pH值至5.07.0(最佳pH值為5.5)。加入50—90。C注射用水至處方量，攪拌均勻。加入活性炭，攪摔均勻，50一9(TC下靜置，粗濾脫去活性炭。藥液保持50—9(TC，用0.22pm濾膜將藥液趁熱過濾至可見異物合格。將藥液灌注于輸液瓶中，使用處理過的膠塞壓塞，(溫度保持在50—90)并軋上鋁蓋。將樣品放入滅菌鍋中，于116。C熱壓蒸汽滅菌40分鐘。影響因素試驗根據初步確定的處方工藝制備樣品，分別設定考察條件為高溫6(TC、低溫4"C、4500Lx光照進行影響因素試驗，分別于5、IO天對外觀性狀、可見異物檢査、含量、pH值、澄清度及有關物質進行考察，考察處方在以上條件下的穩定性。高溫試驗60°C取樣品置于6(TC的恒溫箱中放置10天，在考察的第0、5、10天，分別取樣品進行檢查。低溫試驗4°C取樣品置于4"C的冰箱中放置10天，在考察的第O、5、10天，分別取樣品迸行檢查。強光照射試驗取樣品置于YB-2可見異物檢測儀在4500Lx光強度下光照10天，在考察的第0、5、10天，分別取樣品進行檢查。表-8高溫試驗結果(溫度60°C)C存時間^""""—~~"~(天)外觀性狀可見異物檢査含量％有關物質％pH值表-9低溫試驗結果(溫度4"C)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>結果本品經影響因素高溫60"C、低溫4'C、4500Lx光照分別考察5、IO天，樣品的外觀性狀、可見異物檢査、pH值、含量、有關物質基本無變化，產品性質較為穩定。結論影響因素結果表明，樣品在高溫、低溫及強光條件下均穩定，樣品可以以常溫密閉條件貯存；同時也證明處方樣品能夠符合奈拉濱注射液初步穩定性考察的要求，處方工藝適用。所以初步確定該處方及工藝為奈拉濱注射液的最終處方及工藝。熱循環低溫試驗取奈拉濱注射液，進行三次循環試驗，每次循環在28。C條件放置2天，然后在4(TC條件下放置2天，取樣檢測，測定每次循環后樣品的外觀、可見異物、pH值、含量及有關物質的變化。見表-11。表-11熱循環低溫試驗測定結果熱循環凍融試驗取奈拉濱注射液，進行三次循環試驗，每次循環在-10-2(TC條件放置2天，然后在4(TC條件下放置2天，取樣檢測，測定每次循環后樣品的外觀、可見異物、12(天)外觀性狀可見異物檢查含量％有關物質％pH值測定項目外觀可見異物pH值含量％有關物質％時間點0天無色澄明液體符合規定6.0898.050.44無符97.970.4398.030.4098.130.400無色澄明液體5無色澄明液體10無色澄明液體98.340.496.0598.780.496.1498.550.466.08環明循澄次色三無體定規g合6符環明循澄次包二無定體規液合符9環明定循澄體規s次色液合&定定定見見見厶n合合守守守pH值、含量及有關物質的變化。見表-12。表-12熱循環凍融試驗測定結果結果奈拉濱注射液樣品經三次熱循環凍融試驗，樣品的外觀、可見異物、pH值、含量與循環前樣品比較均無明顯變化。結果奈拉濱注射液樣品經三次熱循環低溫試驗，樣品的外觀、可見異物、pH值、含量與循環前樣品比較均無明顯變化。注將奈拉濱和氯化鈉按照常溫的溫度下，其它工藝與上述實驗相同，得到的奈拉濱注射液不合格。實驗結論通過上述實驗表明，在制備奈拉濱注射液的過程中，要嚴格控制制備過程中溶液的溫度，在低于本發明溫度下，成品的合格率大大受到影響，充分說明本發明工藝方法具有科學意義。三、制備實施例實施例1將重量比為10:9的奈拉濱和氯化鈉加入至5(TC注射用水中，攪拌，使完全溶解，加入鹽酸調節pH值至5.0，加入5(TC注射用水，攪拌均勻，加入活性炭，攪拌均勻，5(TC靜置，粗濾脫去活性炭，藥液保持5(TC，用0.22pm濾膜將藥液趁熱過濾，將藥液灌注于輸液瓶中，使用處理過的膠塞壓塞，溫度保持在50°C，并軋上鋁蓋，將樣品放入滅菌鍋中，熱壓蒸汽滅菌，既得。測定項目0天外觀無色澄明液體可見異物符合規定pH值6.08含量％98.20有關物質％0.48時間點環二次循環明無色澄明液體定符合規定6.0998.0198.090.450.50環明定循澄體規g次色液合&兆d三無符循澄體規s次色液合&一無r」符將重量比為io:9的奈拉濱和氯化鈉加入至卯x:注射用水中，攪拌，使完全溶解，加入鹽酸調節pH值至5.07.0，加入9(TC注射用水，攪拌均勻，加入活性炭，攪拌均勻，卯。C靜置，粗濾脫去活性炭，藥液保持9(TC，用0.22pm濾膜將藥液趁熱過濾，將藥液灌注于輸液瓶中，使用處理過的膠塞壓塞，溫度保持在90。C，并軋上鋁蓋，將樣品放入滅菌鍋中，熱壓蒸汽滅菌，既得。實施例3將重量比為10:9的奈拉濱和氯化鈉加入至6(TC注射用水中，攪拌，使完全溶解，加入鹽酸調節pH值至5.07.0，加入6(TC注射用水，攪拌均勻，加入活性炭，攪拌均勻，6(TC靜置，粗濾脫去活性炭，藥液保持6(TC，用0.22pm濾膜將藥液趁熱過濾，將藥液灌注于輸液瓶中，使用處理過的膠塞壓塞，溫度保持在6(TC，并軋上鋁蓋，將樣品放入滅菌鍋中，熱壓蒸汽滅菌，既得。實施例4將重量比為10:9的奈拉濱和氯化鈉加入至8(TC注射用水中，攪拌，使完全溶解，加入鹽酸調節pH值至5.07.0，加入8(TC注射用水，攪拌均勻，加入活性炭，攪拌均勻，8(TC靜置，粗濾脫去活性炭，藥液保持8(TC，用0.22pm濾膜將藥液趁熱過濾，將藥液灌注于輸液瓶中，使用處理過的膠塞壓塞，溫度保持在8(TC，并軋上鋁蓋，將樣品放入滅菌鍋中，熱壓蒸汽滅菌，既得。實施例5將重量比為10:9的奈拉濱和氯化鈉加入至8(TC注射用水中，攪拌，使完全溶解，加入鹽酸調節pH值至5.07.0,加入8(TC注射用水，攪拌均勻，加入活性炭，攪拌均勻，6(TC靜置，粗濾脫去活性炭，藥液保持7(TC,用0.22pm濾膜將藥液趁熱過濾，將藥液灌注于輸液瓶中，使用處理過的膠塞壓塞，溫度保持在6(TC，并軋上鋁蓋，將樣品放入滅菌鍋中，熱壓蒸汽滅菌，既得。實施例6將重量比為10:9的奈拉濱和氯化鈉加入至8CTC注射用水中，攪拌，使完全溶解，加入鹽酸調節pH值至5.07.0，加入8(TC注射用水，攪拌均勻，加入活性炭，攪拌均勻，6CTC靜置，粗濾脫去活性炭，藥液保持6(TC,用0.22|^1濾膜將藥液趁熱過濾，將藥液灌注于輸液瓶中，使用處理過的膠塞壓塞，溫度保持在6(TC，并軋上鋁蓋，將樣品放入滅菌鍋中，熱壓蒸汽滅菌，既得。注:本發明所要求保護的具體技術方案，不限于上述實施例所表達的技術方案的具體組合。1權利要求1、一種奈拉濱注射液的制備方法，其特征在于原料藥奈拉濱和藥用輔料氯化鈉在制備制劑中保持溶液溫度50℃-90℃。2、根據權利要求1所述的一種奈拉濱注射液的制備方法，其制備方法為將重量比為10:9的奈拉濱和氯化鈉加入至5(TC—90。C注射用水中，攪拌，使完全溶解，加入鹽酸調節pH值至5.07.0，加入5(TC—9(TC注射用水，攪拌均勻，加入活性炭，攪拌均勻，5(TC—9(TC靜置，粗濾脫去活性炭，藥液保持50°C一90'C，用0.22pm濾膜將藥液趁熱過濾，將藥液灌注于輸液瓶中，使用處理過的膠塞壓塞，溫度保持在50°C_90°C，并軋上鋁蓋，將樣品放入滅菌鍋中，熱壓蒸汽滅菌，既得。3、根據權利耍求1所述的一種奈拉濱注射液的制備方法，其中制劑制備中溶液溫度為60。C一卯。C。4、根據權利要求1所述的一種奈拉濱注射液的制備方法，其中制劑制備中溶液溫度為60°C_80°C。全文摘要本發明公開了一種奈拉濱注射液及其制備方法，其特征在于注射液制備過程中保持溫度50℃-90℃。在此溫度下，制備的奈拉濱注射液的成品合格率大大提高，充分說明奈拉濱注射液制備過程中溫度對主藥和藥用輔料溶液穩定性的影響，在保持此溫度下制備奈拉濱注射液具有很好的科學意義。文檔編號A61P35/02GK101683321SQ20081022337公開日2010年3月31日申請日期2008年9月27日優先權日2008年9月27日發明者威姜,李志剛,米長江,金治剛,群顧申請人:北京福瑞康正醫藥技術研究所