專利名稱：用于核磁共振研究的金黃地鼠胰腺癌動物模型構建方法
技術領域：
本發明屬于胰腺癌動物模型構建領域，特別涉及一種以化學物質為致癌誘導物 質，構建金黃地鼠胰腺癌動物模型的方法。
背景技術：
目前，用于核磁共振成像研究的胰腺癌動物模型主要有種植性胰腺癌動物模型和 基因工程胰腺癌動物模型。種植性胰腺癌動物模型又分為異位種植性和原位種植性胰腺癌 動物模型。異位種植性胰腺癌動物模型是將胰腺癌細胞株或者胰腺癌瘤塊接種于動物皮下， 在接種部位產生胰腺癌的一種模型，該模型優點是可重復性，技術相對簡單，成本較低，腫 瘤可以量化，可以根據腫瘤生長情況調整實驗計劃。適合于評估抗癌新藥給予方法和療效。 局限性是(1)由于受到位置特異性影響，可能會產生藥物療效的假陽性結果。(2)移植于 皮下的胰腺癌很少發生轉移，這與人的胰腺癌自然病程不一致，且轉移灶的腫瘤生物學特 性可以同原發灶不同。原位種植性胰腺癌動物模型是將體外培養的腫瘤細胞或者是外科手術中采集的 腫瘤組織移植到裸鼠胰腺。它成瘤時間短，成瘤率高，維持了原有瘤組織的結構，保持了人 體腫瘤的絕大部分生物學特性。這種方法的缺點是技術要求較高，因為采用的實驗動物為 裸鼠，其本身沒有免疫力，耐受力差。無論是異位還是原位種植瘤模型，其腫瘤皆不是由胰 腺自身產生的，是“舶來品”，不能真正模擬人胰腺癌的發病機制及腫瘤發生、發展過程。基因工程胰腺癌動物模型包括轉基因動物模型和基因突變模型，從本質上獲得與 人胰腺癌極為相似的模型，可對腫瘤形成早期階段進行研究。其局限性在于那些組織學上 與人類相似的胰腺病變在遺傳學及生物學方面可能與人類明顯不同；建模時間難掌握、花 費較高，數量上難以滿足實驗要求；同時要保證轉基因的相應產物(如異體抗原)不會對藥 物治療效果產生影響。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種通過化學物質誘導致癌的金黃 地鼠胰腺癌動物模型構建方法，此種構建方法不僅能獲得組織病理學與人胰腺癌相似、可 模擬人胰腺癌的發生發展過程、用于核磁共振成像研究的胰腺癌動物模型，而且操作簡單， 費用低。本發明所述金黃地鼠胰腺癌動物模型的構建方法，所用動物為金黃地鼠，所用致 癌誘導物質為N-亞硝基雙(2-氧丙基)胺〔N-Nitrosobis (2-oxopropyl) amine,簡稱BOP， 在說明書的下述內容中，所述BOP即為N-亞硝基雙(2-氧丙基)胺〕，構建操作將所述致 癌誘導物質BOP用生理鹽水配制成濃度為lmg/ml的致癌誘導液，按1公斤金黃地鼠體重1 次使用IOmg BOP計算每次注射致癌誘導液的劑量，將所述致癌誘導液按計算的劑量于金黃 地鼠背部行皮下注射，每周一次，連續注射至少7周，停止注射致癌誘導液后正常飼養至少
323周，即形成金黃地鼠胰腺癌動物模型。上述方法中，所述金黃地鼠選用敘利亞金黃地鼠，8周齡，雌性，飼養環境SPF級 動物實驗室。上述方法中，配制致癌誘導液所用生理鹽水中的NaCl濃度無嚴格要求，本發明選 用市售的0. 9%生理鹽水，其NaCl的質量濃度為0. 9%。本發明具有以下有益效果1、本發明為胰腺癌動物模型的構建提供了一種與現有技術不同構思的新方法。2、實驗表明(見實施例2、實施例3)，所構建的金黃地鼠胰腺癌動物模型在胰腺原 位產生胰腺癌，組織病理學與人胰腺癌相似，為胰腺導管腺癌；具有典型人胰腺癌臨床特征 如黃疸、營養不良、淋巴結轉移；在胰腺癌早期，12、13密碼子的K-ras基因就有很高的突變率。3、由于本發明所述方法構建的金黃地鼠胰腺癌動物模型很好的模擬了人胰腺癌 的發生、發展過程，因而可用于研究人胰腺癌的發病機制。4、將本發明所述方法構建的金黃地鼠胰腺癌動物模型采用核磁共振成像，可觀察 胰腺癌發生、發展過程，胰腺癌不同發展階段的磁共振成像特點；評估藥物及其他冶療措施 對胰腺癌及其轉移瘤的預防作用和療效。5、由于僅用BOP和生理鹽水配制的致癌誘導液每周注射一次，連續注射至少7周， 因而本發明所述方法操作簡單，費用低，便于推廣。
圖1是本發明所述方法構建的金黃地鼠胰腺癌動物模型的核磁共振掃描圖像，其 中，圖1A、圖1B、圖1C、圖ID分別是MR平掃(A)橫斷面SE TlffI ； (B)橫斷面FRFSET2WI ； (C)冠狀面SE TlffI ； (D)冠狀面FRFSE T2WI。A-D顯示，金黃地鼠胃、脾、左腎間有巨大腫 塊，信號不均，TlffI呈等、低混雜信號，T2WI呈等、高混雜信號，其內見多個類圓形更長Tl、 長T2信號影；胰腺脾葉顯示不清，病灶邊緣與鄰近組織分界不清，胃、脾、左腎受壓移位；MR 診斷金黃地鼠胰腺脾葉腫瘤，胰腺癌。圖2是本發明所述方法構建的金黃地鼠胰腺癌動物模型經腹部縱行正中切口剖 腹后，所暴露出的胰腺腫瘤的光學照片。圖3是將本發明所述方法構建的金黃地鼠胰腺癌動物模型的胰腺及腫瘤完整取 下，波恩式液(Bouin液)固定，石蠟包埋，切片，HE染色后的顯微光學照片(HE，10x物鏡， 放大倍數=442)。
具體實施例方式以下通過實施例對本發明所述金黃地鼠胰腺癌動物模型的構建方法及所形成的 胰腺腫瘤作進一步說明。實施例11、實驗動物與材料實驗動物敘利亞金黃地鼠(購于四川省實驗動物專委會養殖場)，雌性，8周齡， 飼養環境SPF級動物實驗室(川北醫學院自建)。
4
致癌誘導物質Β0Ρ，購自深圳市榮發意達貿易有限公司。生理鹽水NaCl質量濃度為0.9%的生理鹽水(簡稱0.9%生理鹽水)，購自湖南 科倫藥業股份有限公司2、實驗方法敘利亞金黃地鼠130只，每只原始體重IOOg左右(用電子秤稱量)，將其分為實驗 組和對照組，實驗組為100只敘利亞金黃地鼠，對照組為30只敘利亞金黃地鼠。第一次注射時，將IOOmg BOP溶于80ml 0. 9 %生理鹽水，待完全溶解后定容至 100ml，配制成濃度為BOPlmg/ml的致癌誘導液，按1公斤金黃地鼠體重1次使用IOmg BOP 計算，實驗組每只金黃地鼠第一次BOP的用量為lmg，第一次注射致癌誘導液的劑量為1ml。對照組中的敘利亞金黃地鼠用0. 9%生理鹽水注射，每只金黃地鼠第一次注射生 理鹽水的劑量為1ml。將實驗組的敘利亞金黃地鼠背部中線部位皮膚用質量濃度75%的酒精消毒，用 2. 5ml無菌注射器吸取配制好的致癌誘導液1ml，以30°角進針，于背部行皮下注射(術者 戴無菌手套)。將對照組的敘利亞金黃地鼠背部中線部位皮膚用質量濃度75%的酒精消毒，用 2.5ml無菌注射器吸取0.9%生理鹽水lml，以30°角進針，于背部行皮下注射(術者戴無 菌手套)。實驗組和對照組的上述注射操作每周一次(注射操作后正常飼養)，連續注射7 周。每次注射操作均要用電子秤稱量實驗組和對照組中每只金黃地鼠的體重，按實驗組金 黃地鼠的總體重配制所需的致癌誘導液，按1公斤金黃地鼠體重1次使用IOmg BOP計算實 驗組中各金黃地鼠該次注射致癌誘導液的劑量。按照對照組金黃地鼠的總體重準備所需的 0. 9%生理鹽水，按IOOg金黃地鼠體重使用Iml 0. 9%生理鹽水計算對照組中各金黃地鼠 該次注射0. 9%生理鹽水的劑量。注射停止后正常飼養23周，實驗組中的敘利亞金黃地鼠即成為胰腺癌動物模型。實施例21、實驗動物與材料、設備實驗動物實施例1構建的金黃地鼠胰腺癌動物模型。水合氯醛購自湖南科倫藥業股份有限公司超導MR成像儀型號1.5T，美國GM公司生產。2、實驗方法對實施例1構建的金黃地鼠胰腺癌動物模型進行常規橫斷面、冠狀面核磁共振掃 描，操作如下(1)術者帶無菌手套，用Iml無菌注射器吸取麻醉用藥物水合氯醛0.45ml (—只模 型鼠的劑量)，對實驗組的模型鼠行腹腔注射。(2)將麻醉效果良好的模型鼠放入小鼠專用動物實驗線圈，取仰臥位，頭先進。(3)用超導MR成像儀對模型鼠進行核磁共振掃描，掃描序列及參數橫斷面 SET Iff I, FRFSE T2WI ；冠狀面:SE T Iff I, FRFSE T2WL· 層厚:2mm ；層距0. 5mm ； FOV :6X6mm ； 矩陣256 X 192。(4)掃描結束后，將核磁 振掃描(MRI)圖像傳至工作站進行測量。
核磁共振掃描(MRI)顯示，腫瘤位于胰腺脾葉，胃、脾、左腎之間，大小約 12mmX18mmX20mm，部分邊界欠清晰，信號不均勻，TlWI呈等、低混雜信號，T2WI呈等、高混雜 信號(見圖IA-圖1D)。實施例3實例2結束后，取出模型鼠10只，脫白法處死。術者帶無菌手套，持手術剪，鑷子， 經模型鼠腹部縱行正中切口剖腹，暴露出的胰腺腫瘤見圖2。完整取下胰腺及腫瘤，波恩式液(Bouin液，購于上海杰美基因醫藥科技有限公 司)固定，石蠟包埋，切片，HE染色，IOx物鏡觀察(放大倍數=442)，如圖3所示癌性導 管不完整，細胞部分極性消失，核異型、濃染，核漿比例增大，見核分裂，杯狀細胞化生，間質 內纖維組織增生。病理診斷為胰腺高分化導管腺癌。對照組金黃地鼠按照實例2和實例3的方法進行操作，MR圖像和解剖后組織學觀 察均未發現胰腺腫瘤形成。
權利要求
一種用于核磁共振研究的金黃地鼠胰腺癌動物模型構建方法，其特征在于所用動物為金黃地鼠，所用致癌誘導物質為N 亞硝基雙(2 氧丙基)胺，構建操作將所述致癌誘導物質N 亞硝基雙(2 氧丙基)胺用生理鹽水配制成濃度為1mg/ml的致癌誘導液，按1公斤金黃地鼠體重1次使用10mg N 亞硝基雙(2 氧丙基)胺計算每次注射致癌誘導液的劑量，將所述致癌誘導液按計算的劑量于金黃地鼠背部行皮下注射，每周一次，連續注射至少7周，停止注射致癌誘導液后正常飼養至少23周，即形成金黃地鼠胰腺癌動物模型。
2.根據權利要求1所述的金黃地鼠胰腺癌動物模型構建方法，其特征在于所述金黃地 鼠為敘利亞金黃地鼠，8周齡，雌性，飼養環境SPF級動物實驗室。
3.根據權利要求1或2所述的金黃地鼠胰腺癌動物模型構建方法，其特征在于配制致 癌誘導液所用生理鹽水中，NaCl的質量濃度為0. 9%。
全文摘要
一種用于核磁共振研究的金黃地鼠胰腺癌動物模型構建方法，所用動物為金黃地鼠，所用致癌誘導物質為N-亞硝基雙(2-氧丙基)胺，構建操作將所述致癌誘導物質N-亞硝基雙(2-氧丙基)胺用生理鹽水配制成濃度為1mg/ml的致癌誘導液，按1公斤金黃地鼠體重1次使用10mg N-亞硝基雙(2-氧丙基)胺計算每次注射致癌誘導液的劑量，將所述致癌誘導液按計算的劑量于金黃地鼠背部行皮下注射，每周一次，連續注射至少7周，停止注射致癌誘導液后正常飼養至少23周，即形成金黃地鼠胰腺癌動物模型。
文檔編號A61K31/655GK101919867SQ20101908702
公開日2010年12月22日 申請日期2010年2月11日 優先權日2010年2月11日
發明者張小明, 楊正偉, 沈成義, 蒲宇, 馬青松 申請人:川北醫學院附屬醫院