專利名稱：Ghgkhknk八肽對5-氟尿嘧啶抗腫瘤增效作用的醫藥用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及GHGKHKNK八肽對抗癌藥物的增效作用，尤其是公開了 GHGKHKNK八肽在制備對5-氟尿嘧啶抗腫瘤增效作用的藥物中的用途，屬于醫學制藥技術領域。
背景技術：
目前，癌癥已經成為致使人類死亡的主要疾病之一。據世界衛生組織報告，每年世界上有超過1000萬起新的癌癥病例發生。目前治療癌癥的主要方法包括手術治療、抗癌藥物的化學治療、放射治療和生物反應調節劑及其它治療。但是，抗癌藥物的選擇性差， 毒副作用大，所以在癌癥治療中的使用受到限制。例如5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，簡稱5-Fu)是世界上應用最廣的抗癌藥之一，也是最常用的腹腔內化療藥物之一，臨床上用于治療結直腸癌、胃癌、肝癌、乳腺癌等多種癌癥。5-Fu抗瘤譜廣，但體內代謝快，半衰期短， 并且有嚴重毒性反應，會引起患者骨髓抑制及出血性腸炎等。因此，5-Fu—般與其他抗腫瘤藥物配伍使用。因此，設計一種物質與抗癌藥物聯合用于癌癥的治療，并且通過充分發揮各自的優勢，以提高藥物的抗癌活性、降低抗癌藥物的毒性，這是一種被普遍接受的治療癌癥的方法。將GHGKHKNK八肽與抗癌藥物5_FU聯合應用，以增強5_FU的抗癌作用，降低其毒副作用，以更好的應用于癌癥的治療，是本發明要實現的任務。
發明內容
本發明提供了 GHGKHKNK八肽在制備對5-氟尿嘧啶抗腫瘤增效作用的藥物中的用途，目的是通過聯合用藥降低藥物毒性，提高抗癌藥物藥性。本發明涉及的GHGKHKNK八肽(以下簡稱八肽)具有下列一級結構 Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Lys，是從人高分子激肽原的第5結構域中選擇的含
有能在體外抑制細胞黏附和浸潤關鍵模序His-Gly-Lys的八肽化合物，它是一種天然的小分子多肽，由甘氨酸、組氨酸、甘氨酸、賴氨酸、組氨酸、賴氨酸、天冬酰胺、賴氨酸八個氨基酸組成。通過GHGKHKNK八肽與5_Fu聯用用藥增敏增效的大量實驗，證明八肽對肝癌細胞和動物肝癌腫瘤模型表現出高度的抑制作用，抑制肝癌細胞的轉移，抑制小鼠肝癌腹水的生成，延長腫瘤模型鼠的生存期，可以增強多種藥物的抗癌藥性，其可制備成新的抗腫瘤藥物和抗腫瘤增敏劑，特別是GHGKHKNK八肽在增強5-Fu抗癌作用的同時還能明顯的降低其
毒副作用。GHGKHKNK八肽作為抗肝癌藥物增敏增效劑的劑型可為口服藥劑或注射藥劑，所述口服藥劑可為滴丸、軟膠囊或凍干粉針等，所述注射藥劑可為注射用乳劑等，注射用乳劑可為靜脈注射用乳劑、肌肉注射用乳劑、腹腔注射用乳劑或皮下注射用乳劑等。本發明的積極效果在于
提供了 GHGKHKNK八肽對抗癌藥物的協同增效作用，與5-Fu聯用時效果更好，在增強5-Fu抗癌作用的同時還能明顯的降低其毒副作用，為癌癥的治療提供更好的方法。
圖1為發明實驗例各組小鼠體重變化曲線圖； 圖2為發明實驗例流式細胞儀檢測結果；
圖3為發明實驗例各組小鼠生存期曲線；
其中，1、空白對照組；2、八肽低劑量組；3、八肽中劑量組；4、八肽高劑量組；5、5-FU高劑量組；6、5-FU低劑量組；7、聯合給藥組。
具體實施例方式按照醫藥工業中已知的方法，將GHGKHKNK八肽作為5_Fu的聯合增效作用的藥物， 與一種或多種醫藥上可接受的載體或賦形劑相混合，可以制成各種不同劑型的藥物組合物。包括口服藥劑或注射藥劑，所述口服藥劑可為滴丸、軟膠囊或凍干粉針等，所述注射藥劑可為注射用乳劑等，注射用乳劑可為靜脈注射用乳劑、肌肉注射用乳劑、腹腔注射用乳劑或皮下注射用乳劑等。以下實驗例通過GHGKHKNK八肽與5_Fu聯用抗癌的藥理藥效實驗來進一步說明本發明，但并不表示本發明只限于該實施例。以下實驗進一步表明本發明提高抗癌藥物藥性治療效果
本實驗采用GHGKHKNK八肽與5-Fu聯用對肝癌腹水瘤鼠進行治療，觀察GHGKHKNK八肽對5-Fu的增效作用及二者聯用的治療效果。八肽、5氟尿嘧啶組合藥物的藥效學實驗 1、動物模型的建立
將H22細胞培養于37°C、5%0)2含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液中，收集對數生長期的細胞用RPMI-1640稀釋，制成單細胞懸液，用0. 4%臺盼藍染色計數活細胞數> 95%，隨后用NaCl稀釋至細胞數為107/uL。取200 μ 1此細胞懸液接種于2只KM小鼠(雄性，20-22g)腹腔，一周后無菌抽取小鼠腹水，用生理鹽水調整細胞濃度至2. 5 X IOVmL,每只小鼠腹腔注射0. 2mL (5X IO5Cell/只)構建小鼠腹水瘤模型。2、實驗分組與給藥
取12只正常小鼠做空白組，將模型鼠隨機分為7組，分別為空白對照組(生理鹽水)、 八肽低劑量組(12. 5 yg/kg.d)、八肽中劑量組(50 yg/kg.d)、八肽高劑量組(200 μ g/ kg. d)、5-Fu高劑量組(20 mg/kg. d)、5_Fu低劑量組(5 mg/kg. d)、八肽與5_Fu聯合用藥組 (5 mg/kg. d 5-Fu + 12.5 μ g/kg. d八肽)，每組18只。分組后分別給予藥物處理，每組每次注射的藥物均為0.2 ml，連續用藥30d。僅5-Fu高劑量組每隔1日給藥一次，其余用藥組連續給藥30d。停藥后第2天以頸椎脫位法處死各組小鼠進行相關指標檢測。在生存期研究方面，各組小鼠在腫瘤細胞接種后開始觀察直到死亡。3、檢測指標和檢測方法 3.1觀察各組小鼠的一般狀態
在實驗過程中，隔日觀察各組小鼠飲食、精神狀態和體型的變化等。3.2觀察各組小鼠體質量變化自接種之日起，隔日監測8組小鼠(每組選擇12只)體重并記錄，結果進行統計學處理， 繪制表格。3. 3記錄各組小鼠腹水平均體積及小鼠腹水中瘤細胞和紅細胞數目
每組取6只小鼠，頸椎脫位法處死后無菌條件下開腹，用無菌吸管收集腹水入離心管， 計算腹水體積。并留取腹水標本行相關指標的檢測。在上述標本中每個標本取腹水50 μ 1， 稀釋10倍，按白細胞計數法記錄白細胞和紅細胞數目。3.4流式細胞儀檢測小鼠腹水中的細胞周期
處死小鼠，收集小鼠腹水，加入氯化銨紅細胞裂解液，于1500 r /min離心3 min后，用 PBS洗滌離心3次，加入70%的冷乙醇0. 5 ml固定。在4°C條件下放置30 min后上機檢測細胞周期。3.5觀察并記錄各組小鼠的生存期
記錄各組小鼠的存活時間，結果進行統計學處理，繪制表格。4、實驗結果
4. 1各組小鼠的一般狀態
接種5-8d后空白對照組小鼠體質量迅速增加，隨后逐漸出現精神萎靡不振、呆滯少動、步態不穩，反應性差，進水進食減少，糞便干燥，晚期腹部極度膨隆，呈惡液質狀態，死亡速度很快，30天內全部死亡。八肽與5-Fu聯合組體質量增加較慢，精神較好，生存期很長。 其他組雖有改善，但聯合用藥組療效最好。4. 2各組小鼠體重變化
小鼠體重變化統計如圖1所示，小鼠體重變化曲線表明，與空白對照組相比，除八肽高劑量組與其趨勢相似外，其余各用藥組小鼠體重增加均比較緩慢，但聯合用藥組的增加速度是最慢的，幾乎與正常組相同。雖然5-Fu組的體重變化也很緩慢，但毒性大，小鼠體重下降快且死亡率高。4.3各組小鼠腹水平均體積及小鼠腹水中瘤細胞和紅細胞數目
小鼠腹水平均體積及小鼠腹水中瘤細胞和紅細胞數目統計結果見表1，與空白對照組相比，各用藥組小鼠的腹水平均體積變小，腹水中瘤細胞和紅細胞數目下降，其中5-Fu高劑量組和聯合用藥組小鼠的腹水平均體積最小，腹水中瘤細胞和紅細胞數目下降最多，但 5-Fu高劑量組小鼠死亡率高，而聯合用藥組小鼠狀態良好且無死亡。表1各組小鼠腹水平均體積及小鼠腹水中瘤細胞和紅細胞數目
權利要求
1.GHGKHKNK八肽在制備對5-氟尿嘧啶抗腫瘤增效作用的藥物中的用途。
2.GHGKHKNK八肽作為抗肝癌藥物增敏增效劑的劑型可為口服藥劑或注射藥劑，所述口服藥劑可為滴丸、軟膠囊或凍干粉針等，所述注射藥劑可為注射用乳劑等，注射用乳劑可為靜脈注射用乳劑、肌肉注射用乳劑、腹腔注射用乳劑或皮下注射用乳劑等。
全文摘要
本發明公開了GHGKHKNK八肽在制備對5-氟尿嘧啶抗腫瘤增效作用的藥物中的用途，提供了GHGKHKNK八肽對抗癌藥物的協同增效作用，與5-Fu聯用時效果更好，在增強5-Fu抗癌作用的同時還能明顯的降低其毒副作用，為癌癥的治療提供更好的方法。
文檔編號A61K38/08GK102406921SQ201110363529
公開日2012年4月11日 申請日期2011年11月16日 優先權日2011年11月16日
發明者姜爽, 孫匯, 安麗萍, 徐廣宇, 李坦誠, 李娜, 杜培革, 王拓, 詹巾卓, 韓笑 申請人:北華大學