專利名稱：一種以磷脂為基質的原位相變凝膠緩釋系統及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種原位注射相變凝膠緩釋系統，具體涉及以磷脂、不同濃度的乙醇溶液和/或注射用油制備成高濃度磷脂緩釋制劑，為醫藥技術領域。
背景技術：
隨著生物技術的興起和發展，越來越多的蛋白多肽類藥物被開發并用于疾病的診斷和治療。與小分子化學藥物相比，蛋白多肽類藥物與體內正常的生理物質更為接近，具有藥理活性高，毒副作用低，用藥劑量小，療效確切，特異性強等優點。但同時也存在著很多問題一方面，蛋白多肽類藥物分子質量大，穩定性差，容易被胃腸道中的蛋白水解酶降解，因此，通常不能采用常見的胃腸道給藥方式，只能通過注射給藥；另一方面，這類藥物的生物半衰期較短，很快就被機體降解棹，需要持續的注射或靜脈滴注來保證藥物的療效，加重了患者的身體、心理和經濟負擔。因此，人們希望開發出ー種可注射的蛋白多肽類藥物的緩釋給藥系統。目前，已經上市的注射用緩釋給藥系統主要包括PLGA(聚乳酸-羥基乙酸共聚物) 微球和多囊脂質體(MVL)。微球是指藥物溶解或分散在高分子材料基質中形成的微小球狀實體，屬于基質型骨架微粒。PLGA是由乳酸和羥基乙酸按一定比例聚合而成的共聚物，是 FDA批準的可用于人體的生物可降解材料。在諸多多肽緩釋注射劑中，LHRH (黃體生成素釋放激素)類似物微球是研究最為成功的品種。曲普瑞林是LHRH類似物之一，其PLGA微球由法國Ipsen公司開發，1986年上市，可緩釋1個月，是第一個多肽微球產品。丙氨瑞林是上海麗珠東風生物技術有限公司開發的國家ー類新藥，療效為LHRH的15倍，上海醫藥エ業研究院承擔國家科委“九五”攻關項目，進行每月用藥1次的長效微球的開發研究，動物體內試驗證明其緩釋效果可靠。盡管PLGA微球具有較好的緩控釋作用和生物相容性，但由于其制備エ藝復雜，載藥量較低，制備過程中使用的有機溶劑在制劑中有殘留，以及降解過程中產生乳酸和羥基乙酸會引起注射部位PH值的下降，從而產生局部無菌性炎癥。以上缺點和不足大大限制了 PLGA微球的應用。多囊脂質體(MVL)是ー種結構特殊的新型脂質體制劑，其不連續的非同心水性內腔通過類脂及磷脂膜的分割，形成很多小囊泡。在這種不連續的囊泡中，當某個囊泡破裂時，藥物只從破裂的囊泡中釋出，而完整的囊泡仍然保持原狀，因而具有良好的緩釋效果。 傳統脂質體以現有技術一般難以達到水溶性藥物的高包封和低滲漏，多囊脂質體與之相比具有包封率高、藥物滲漏少等優點，尤其適用于包封水溶性小分子藥物和生物活性大分子藥物。目前，SkyePharma公司利用D印oi^ormTm技術(MVL技術的注冊商標)開發的 DepoCytTm(阿糖胞苷MVL制劑)和D印oDurl^m(硫酸嗎啡MVL制劑)兩個產品已成功上市， 并有多個產品進入研發和臨床研究階段。
盡管多囊脂質體給藥途徑多祥，具有良好的緩釋作用和儲庫效應，但其也有諸多不足之處首先，欲制備MVL，至少需含有雙親脂質(如磷脂)和中性脂質(如甘油三酷)。 若無中性脂質則形成傳統的單室脂質體(ULV)或多室脂質體(MLV)。其次，由于MVL內外水相存在藥物濃度差，小分子藥物的滲漏問題仍然存在，且磷脂雙分子層在貯存時也會出現部分破裂，而其在貯存過程出現的沉降和聚集問題尚未得到解決，可能影響制劑的穩定性。 第三，目前開發的MVL產品為混懸液，不便于保存和運輸。第四，MVL的制備過程復雜，對生產條件要求非常苛刻，不易擴大生產。此外，MVL包載的藥物量有限，這也使其發展受到一定的限制。另外，正在研究的還有囊泡型磷脂凝膠(vesicular phospholipid gels，VPG)。 VPG是ー種半固體的磷脂分散體系，具有獨特的三維網狀立體結構，不同于傳統意義上的脂質體凝膠和普通脂質體室結構。VPG作為藥物的儲庫，藥物分布于囊泡和囊泡外的基質中。 在水作溶劑的情況下，封閉囊泡內和囊泡間均含有一定體積的水相，可裝載水溶性、脂溶性以及兩親性藥物。對于水溶性藥物，囊泡內外近乎相等的水相體積不僅使其包封率提高，而且藥物在囊泡內和囊泡外均存在，內外濃度趨于一致，一定程度上減弱了由于濃度梯度造成的藥物滲漏等對穩定性的影響。現在已有較多文獻披露了關于囊泡型磷脂凝膠作為肽類藥物緩釋給藥系統的報道。例如，Brandl, Winter等人所在的研究小組分別采用小分子化學藥物鈣黃緑素和5-氟尿嘧啶、小分子多肽西曲瑞克以及以大分子蛋白紅細胞生成素作為模型藥物，在自制的釋放流通池中研究以VPG作為藥物貯庫時的體外釋放行為(C. Tardi, Journal of Controlled Release 55 (1998) 261 - 270 ；N. Kaiser, International Journal of Pharmaceutics 256 (2003) 123 - 131 ；H. Grohganz, European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 59 (2005) 439 _ 448 ；W. Tian, Journal of Controlled Release 142 (2010) 319 - 325)。其實驗結果表明，VPG對大分子蛋白的緩釋效果較好，可達數百小時；專利申請20110036587. 8通過動物的體內研究發現，濃度在 20-40%的磷脂凝膠對于小分子多肽類藥物也有較長的緩釋時間，但低濃度的磷脂凝膠皮下注射初期突釋效應明顯，有可能引起毒副作用。隨著磷脂濃度的増加，突釋減小。當磷脂濃度升高到40%時，雖然緩釋效果較好，但其粘度達到14. (W. Tian, Journal of Controlled Release 142 (2010) 319 - 325)，相當粘稠，幾乎不能注射。所以從現有的研究可以看出，囊泡型磷脂凝膠不太適宜于作為注射用多肽緩釋載體。專利文獻93119112. 2披露了ー種在體內形成卵磷脂凝膠以持續釋放生物活性化合物的藥用組合物，包含卵磷脂、藥學上可接受的供肌內或皮下注射且基本上不溶于水的卵磷脂用溶劑和生物活性化合物。簡單地說，該藥用組合物就是含有生物活性化合物的卵磷脂有機溶液或懸浮液。通過肌內或皮下注射該溶液或懸浮液，可在體內形成卵磷脂凝膠， 即通過從注射部位含水隙間體液中吸收水分而在體內形成卵磷脂凝膠。根據專利說明，藥物從組合物中釋放時間的長短決定于該組合物的組成。此外，還可以通過添加賦形劑來控制。然而，由于該組合物的主要成分中缺少極性溶剤，水溶性藥物或極性較強的藥物應用于該組合物中存在一定的難度。盡管文獻中說可以將活性成分先溶在少量水中或適合該具體活性成分的緩沖溶液中，然后再將水或緩沖液加到組合物中，但這樣就在注射前増加了組合物的粘度，不利于注射給藥。
專利文獻200580025364. 4提供了ー種包含磷脂組分和藥物可接受的流體載體的組合物，但該申請模糊不清，如用于持續的局部藥物輸送吋，該組合物限定磷脂組分在某些實施方案中的濃度為10-90%，在某些實施方案中最大數量至多是45%，但沒有明確說明是哪些實施方案。實施例1中所制備的組合物由于磷脂在所選溶劑中的溶解度不高，為了能夠在合適的粘度下順利注射入肌體，磷脂濃度均較低，且丙ニ醇、甘油等溶劑的用量較大， 因此該組合物即使少量注入肌體，也會引起局部腫脹甚至潰爛。此外，其過程為稱出并在潔凈的容器中混合大豆卵磷脂(Phospholipon 90G，包含約90 %磷脂酰膽堿的可注射級大豆卵磷脂，Phospholipid GmbH)、中鏈甘油三酯(Miglyol812，Sasol Corp.)、蔗糖和丙ニ 醇，加無水乙醇，溶解全部固體以形成清澈的黃色溶液。抽真空以除去乙醇，直到剰余乙醇含量不到總重量的5%。加熱該混合物到60°C以形成透明溶液，然后通過滅菌濾器過濾該溶液。將濾液冷卻到室溫，獲得黃色透明并均勻的凝膠，由此可見溶解上述磷脂的并非乙醇而是丙ニ醇。更為關鍵地，該申請未進行體內實驗，沒有數據證明其可以達到預期的緩釋效果， 本領域技術人員從其較低的磷脂濃度的構成，較少的注射體積，結合現有技術已知嘗試，完全可以認定其緩釋作用很差。因此，研制一種既能注射到體內達到優良的緩釋效果，又粘度較低、能順利注射給藥的磷脂緩釋制劑就成為本領域研究的難題和熱點。
發明內容
本發明的目的之一，提供一種原位注射相變凝膠緩釋系統。在研究中意外地發現，磷脂在乙醇中的溶解度特別高，甚至當磷脂在乙醇中的含量高達85% (g/g)，仍然澄清透明，可以流動。根據此性質，發明人設想，將藥物溶解在此高濃度磷脂的乙醇溶液中，注入體內后，由于乙醇和水能夠完全互溶，在乙醇迅速擴散到體液之后，則注射部位剩下的磷脂會固化，從而成為藥物緩釋的載體，有效控制藥物的釋放。本發明凝膠形成過程也是與現有技術中提及的普通磷脂凝膠完全不同。專利文獻 93119112. 2披露了含有生物活性化合物的卵磷脂有機溶液或懸浮液，該有機溶液基本上不溶于水，在肌內或皮下注射之后，再通過從注射部位含水隙間體液中吸收水分而在體內形成卵磷脂凝膠。根據上述意外的發現，發明人由此以醋酸奧曲肽為模型藥物，制備了含70%磷脂的乙醇溶液，給大鼠皮下注射Iml后，藥物可以平穩釋放幾乎ー個月左右。但是采用単一乙醇作為溶剤，副作用也是極其明顯的，大部分大鼠注射部位出現紅腫及潰爛現象。這也是現有技術中盡量避免使用大量乙醇作為注射液溶劑的重要原因之一。為了克服乙醇的副作用，通過創造性的研究，我們驚奇地發現，如果在制劑中用大豆油替換了部分乙醇，大鼠注射部位不再出現紅腫及潰爛現象，這是有利于該緩釋制劑系統的產業化的有效解決辦法。本發明的目的之一，是提供ー種包含磷脂、乙醇溶液和/或注射用油的組合物。通過更加深入的研究，發明人發現，在溶劑中加入注射用油，一方面是減少乙醇的用量；另ー方面，降低乙醇的擴散速度，從而不僅實現了磷脂凝膠緩釋系統的有效利用，還大大地降低了乙醇的副作用。
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本發明的目的之一，是提供ー種以磷脂、乙醇溶液和/或注射用油制備成高濃度磷脂緩釋制劑，即本發明所述的原位注射相變凝膠緩釋系統或原位注射相變凝膠緩釋制劑。根據本發明的具體實施方式
可知，一系列的液態脂肪酸甘油三酷，包括中鏈脂肪酸甘油酷、麻油、玉米油、棉子油、魚油等，都能像大豆油一樣替換部分乙醇，降低乙醇的副作用，由此最終實現了本發明。根據本發明的具體實施方式
，本發明所述的注射用油包括，但不限干，大豆油、玉米油、麻油、茶油、魚油、中鏈脂肪酸甘油酷、棉子油、油酸乙酯及上述物質的組合。現有技術中雖然存在包含卵磷脂、注射用油、乙醇、活性成分的技術方案，但是這些組合物的具體制劑一般是乳剤，作用機理完全不同于本發明的原位相變凝膠制劑。本發明的目的之一，是提供ー種包含藥物活性成分、磷脂、乙醇溶液和/或注射用油的組合物。該組合物注入體內后，乙醇迅速擴散，析出的磷脂形成凝膠，包裹藥物活性成分，具有良好的緩釋作用。本發明的目的之一，是提供一種緩釋效果好、高濃度磷脂含量、易于注射給藥的含有生物活性成分的磷脂緩釋制劑。本發明的目的之一，是將蛋白多肽類藥物或其他藥物溶解在高濃度的磷脂-乙醇溶液中，成為流動性良好的液體，注入體內后，乙醇迅速擴散，析出的磷脂形成凝膠，包裹藥物，具有良好的緩釋作用。本文中的術語“原位注射相變凝膠緩釋系統”，也包括高濃度磷脂緩釋制劑。適用于本發明的高濃度磷脂緩釋制劑的磷脂，包括但不限干天然磷脂、半合成磷脂、合成磷脂中一種或多種的組合。所述天然磷脂，包括但不限于蛋黃卵磷脂、大豆磷脂或其組合等。所述半合成磷脂，包括但不限于氫化蛋黃卵磷脂、氫化大豆磷脂或其組合等。所述合成磷脂，包括但不限于ニ棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、ニ棕櫚酰磷脂酰膽堿、ニ硬脂酰磷脂酰膽堿、ニ肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、ニ油酰磷脂酰乙醇胺、ニ棕櫚酰磷脂酰甘油、ニ 棕櫚酰磷脂酸中的一種或多種的組合等。在具體的實施方案中，本發明優選蛋黃卵磷脂E80。在具體的實施方案中，本發明所述的高濃度磷脂緩釋制劑，基于制劑的總重量計， 其中磷脂含量，為約50% 約85% (g/g)。適用于制備本發明所述的高濃度磷脂緩釋制劑的生物活性成分，可以是水溶性分子、脂溶性分子或兩親性分子，包括但不限于抗癌藥類、抗炎藥類、抗感染藥類、止痛藥類、 激素類、抗糖尿病藥類、抗高血壓藥類、抗艾滋病藥類、免疫增強藥類、抗病毒藥類、強心藥類、抗肥胖藥類、骨代謝調節劑類、抗癲癇藥類、抗驚厥藥類、抗抑郁藥類、抗精神病藥類、抗帕金森病藥類、尿路藥類、避孕藥類、抗骨質疏松藥類、蛋白同化制劑類、戒煙助劑類以及細胞附著促進劑類。適用于本發明的藥物包括但不限于如下
蛋白多肽類，包括但不限干，胰島素、胰高血糖素、α-干擾素、β-干擾素、白細胞介素、促紅細胞生成素(ΕΡ0)、促性腺激素、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-GSF)、組織型纖溶酶原激活劑、鏈激酶、細胞生長因子、凝血因子、前列腺素、抗凝血酶、水蛭素、組氨瑞林、生長激素釋放肽-2、生長激素釋放肽_6、西曲瑞克、比伐盧定、精氨酸加壓素、賴氨酸加壓素、去氨加壓素、戈那瑞林、亮丙瑞林、德舍瑞林、布舍瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、阿拉瑞林、舍莫瑞林、那法瑞林、黃體瑞林、夫替瑞林、海沙瑞林、奧曲肽、艾塞那肽、人胰高血糖素樣肽-1、生長激素、生長抑素、齊考諾肽、胸腺肽al、辛卡利特、胸腺五肽、阿巴瑞克、阿肽地爾、亮氨酸腦啡肽、甲硫腦啡肽、替可克肽、促性腺激素釋放激素、促甲狀腺激素釋放激素、 生長激素釋放激素(GHRH)、生長激素抑制素(GHIH)、促黑色素細胞抑制激素(MRIH)、促黑色素細胞釋放激素(MRH)、促皮質素釋放激素(CRH)、胰泌素、P物質、神經降壓肽、人腦利鈉肽、心房利鈉肽、血管緊張肽I、血管緊張肽II、血管緊張肽III、睡眠肽、記憶增強肽、強啡肽、內啡肽、血管緊張素、恩夫韋地、CJC-U95、依降鈣素、胸腺肽β 4、加壓素、鞣酸加壓素、 苯賴加壓素、鳥氨酸加壓素、美拉諾坦II、脾臟五肽、普蘭林肽、伐普肽、促皮質素、絲賴促皮質18肽、甘精促皮質18肽、鋅促皮質M肽、促皮質M肽、促皮質25肽、促皮質觀肽、血管活性腸肽、腦鈉尿肽、緩激肽、孤啡肽、門冬酰胺酶等；小分子化學藥物類，包括但不限于，璜達肝癸鈉，嗎啡，曲馬多，羥考酮，芬太尼，利多卡因，杜冷丁，硝酸異山梨酷，戊四硝酷，單硝酸異山梨酷，普萘諾爾，納多諾爾，吲哚諾爾，阿替諾爾，美托諾爾，阿普諾爾，醋丁諾爾，硝苯地平，維拉帕米，地爾硫卓，譜尼拉明，哌可昔林，芐普地爾，尼可地爾，嗎多明，地拉卓，曲美他嗪，硫酸奎尼丁，丙吡啶，鹽酸美西律的藥物，鹽酸胺碘酮，洛伐他汀，辛伐他汀，普伐他汀，氟伐他汀，阿伐他汀，西立伐他汀，血脂康，考來烯胺，考來替泊，普羅布考，吉非貝齊，阿司匹林，奧扎格雷，噻氯匹定，氯吡格雷，利多格雷，替羅非班，華法林，雙香豆素，醋硝香豆素，七葉內酷，當歸內酷，黃芪甲苷，人參皂苷，葡萄內酷，呋喃香豆素，吡喃香豆素，北美芹素，紅厚殼內酷，雙七葉內酷，水飛薊賓，葛根素，蘆丁，橙皮苷，兒茶素，香葉苷，燈盞花素， 槲皮素，白藜蘆醇，立可定，卡托普利，依那普利，賴諾普利，苯那普利，福辛普利，雷米普利， 喹那普利，培哚普利，西拉普利，群多普利，阿拉普利，地拉普利，氯沙坦，厄貝沙坦，坎地沙坦，硝苯地平，氨氯地平，非洛地平，尼群地平，拉西地平，尼莫地平，尼卡地平，尼索地平，伊拉地平，地爾硫卓，維拉帕米，普萘洛爾，美托諾爾，納多諾爾，吲哚諾爾，阿替諾爾，美托諾爾，阿普諾爾，醋丁諾爾，比索諾爾，倍他諾爾，哌唑嗪，特拉唑嗪，多沙唑嗪，曲馬唑嗪，拉貝諾爾，卡位諾爾，可樂定，甲基多巴，莫索尼定，利舍平，胍乙啶，胼屈嗪，硝普鈉，鹽酸多奈哌齊，卡巴拉汀，石杉堿甲，美曲膦酷，他克林，加蘭他敏，吡拉西坦、阿米三嗪、甲磺酸雙氫麥角汀、己酮可可堿、尼麥角林，維生素E退黑素、姜黃素、去鐵敏、艾地苯醌、甲磺酸替拉扎持，雌ニ醇，乙炔雌ニ醇，雌酮，炔雌醚，尼爾雌醇，戊酸雌ニ醇，苯甲酸雌ニ醇，雄烯ニ醇、甲睪酮、睪酮、己烯雌酚，己烯雌酚丙酸酷，己烯雌酚磷酸酷，環戊丙酸雌ニ醇，大豆素，醋酸甲羥孕酮，醋酸甲地孕酮，醋酸氯地孕酮，孕ニ烯酮，炔諾酮，地索高諾酮，巳酸孕酮，左炔諾孕酮，醋酸炔諾酮，庚酸炔諾酮，雙酯炔諾醇，醋炔醚，地諾孕酮，屈螺酮，烯諾孕酮，諾美孕酮， 曲美孕酮，苯海拉明，異丙嗪，曲吡那敏，氯苯那敏，布克立嗪，苯茚胺，賽庚啶，氯馬斯汀，氮卓斯汀，阿司咪唑，氯雷他定，西替利嗪，咪嗶斯汀，特非那丁，非索非那丁，乙氟利嗪，地氯雷他定，依巴斯汀，am，非尼拉敏，溴苯那敏，托普帕敏，吡咯他敏，曲譜利唆，阿伐斯汀， 西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁，尼扎替丁，羅莎替丁，酮替芬，色甘酸鈉，環磷酰胺，異環磷酰胺，卡莫司汀，洛莫司汀，司莫司汀，達卡巴嗪，丙卡巴胼，替莫唑胺，苯丁酸氮芥，美法侖， 鉬類配合物(如順鉬，卡鉬，奧沙利鉬等)，甲氨蝶呤，氟尿嘧啶，替加氟，巰嘌呤，噴司他丁， 阿糖胞苷，吉西他濱，長春堿，長春新堿，長春瑞濱，長春地辛，紫杉醇，多西他賽，高三尖杉酯堿，三尖杉酯堿，喜樹堿，羥喜樹堿，托普替康，伊立替康，依托泊苷，替尼泊苷，放線菌素 D，絲裂霉素，博來霉素，柔紅霉素，多柔比星，伊達比星，阿柔比星，米托蒽醌，表柔比星，普卡霉素，腎上腺皮質激素，雄激素，氟他胺，雌激素，他莫西芬，依西美坦，維A酸，伊馬替尼， 吉非替尼，埃羅替尼，沙利度胺，雷利度胺，阿司匹林，水楊酸鎂，水楊酸膽堿，水楊酰胺，雙水楊酷，ニ氟尼柳，吲哚美辛(消炎痛)，舒林酸，對乙酰氨基酚(撲熱息痛)，氨基比林，羥布宗，保泰松，甲芬那酸，氯芬那酸，雙氯芬酸，布洛芬，萘普生，氟比咯芬，非諾洛芬，酮洛芬， 吡羅昔康，美洛昔康，尼美舒利，羅非昔布，塞來昔布，秋水仙堿，丙磺舒，別嘌呤，磺吡酮，苯溴馬隆等，或上述提及的藥物的藥學上可接受的鹽形式。進ー步地，上述蛋白多肽類藥物或化學藥物藥學上可接受的鹽形式包括但不限于醋酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、枸櫞酸鹽、磺酸鹽、水楊酸鹽等多種藥學上可用鹽形式。本發明所述的高濃度磷脂緩釋制劑，其中生物活性成分含量，基于制劑的總重量計，為約0. 01% 約10% (g/g)。本發明所述的高濃度磷脂緩釋制劑，其中注射用油含量，基于制劑的總重量計，為約 10% 約 40% (g/g)。本發明所述的高濃度磷脂緩釋制劑，其中乙醇溶液包括無水乙醇、乙醇-水溶液、 乙醇-生理鹽水溶液、乙醇-磷酸鹽緩沖液溶液、乙醇-醋酸鹽緩沖液溶液、乙醇-碳酸鹽緩沖液溶液、乙醇-琥珀酸鹽緩沖液溶液、乙醇-枸櫞酸鹽緩沖液溶液、乙醇-乳酸鹽緩沖液溶液等，其中乙醇濃度可以為80% 100%(v/v)，該乙醇溶液在高濃度磷脂緩釋制劑中的含量為約30% 約5% (g/g)。本發明的目的之一，提供了ー種高濃度磷脂緩釋制劑，包含磷脂、生物活性成分、 乙醇溶液和/或注射用油，基于制劑的總重量計，其中磷脂含量為約50% 約85%(g/g)，生物活性成分含量為約0. 01% 約10% (g/g)，注射用油含量為約10% 約40% (g/g),乙醇溶液含量為約30% 約5% (g/g)，且乙醇溶液的濃度范圍為80% 100% (ν/ν)。本發明的以磷脂為基質的原位注射相變凝膠緩釋系統是ー種新穎的劑型，是將蛋白多肽類藥物或其他藥物溶解在高濃度的磷脂-乙醇溶液中，成為流動性良好的液體，注入體內后，乙醇迅速擴散，析出的磷脂形成凝膠，包裹藥物，具有良好的緩釋作用。本發明的另ー個目的之一，提供了一種制備原位注射相變凝膠緩釋系統，即高濃度磷脂緩釋制劑的方法。在一具體實施方案中，本發明的制備方法，包括下述步驟
(1)取生物活性成分溶于適量乙醇溶液中，再與適量注射用油混和，形成藥物溶液，微孔濾膜過濾滅菌；
(2)在無菌條件下取注射級磷脂與藥物溶液混合，攪拌使磷脂完全溶解，靜置片刻以除去制劑中的氣泡，分裝，密封，即得。由于部分多肽在液體環境中不太穩定，需干燥保存，故在另一具體實施方案中，本發明還提供了另ー種高濃度磷脂緩釋制劑的制備方法，包括下述步驟
(1)取適量生物活性成分溶于適量的純水或緩沖鹽溶液中，形成藥物溶液，微孔濾膜過濾滅菌，無菌條件下加入注射級磷脂，攪拌混勻；
(2)將上述半固體磷脂凝膠分裝，按常規方式冷凍干燥，密封；
(3)將適量乙醇溶液和適量注射用油混和，微孔濾膜過濾滅菌，分裝，密封，備用。
在具體的實施方案中，微孔濾膜優選0. 22Mffl。在具體的實施方案中，優選將步驟(2)和(3)的產品，以試劑盒的方式組合包裝。本發明的產品使用吋，直接將組合包裝中的注射用油-乙醇混和溶液注入凍干磷脂中，用力振搖或超聲，溶解，即得。本發明所述的原位注射相變凝膠緩釋系統可以用于注射給藥，也可以用于外用給藥等其他給藥形式。本發明所述的原位注射相變凝膠緩釋系統也可以用于修復和擴充軟和/或硬組
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-ハO本發明通過創造性的研究，以磷脂、乙醇溶液和/或注射用油等作為主要原料，采用蛋白多肽類藥物或小分子化學藥物如奧曲肽、促紅細胞生成素、硫酸嗎啡等為模型藥物， 通過簡單攪拌的方式制備成高濃度磷脂緩釋制劑。所得制劑為真溶液，流動性良好，容易注射給藥，動物體內實驗證明其具有良好的緩釋效果。考査了高濃度磷脂緩釋制劑對注射部位的刺激性，結果顯示該制劑具有非常好的生物相容性，不會對給藥部位產生刺激。因此，本發明從而很好地解決了高磷脂濃度的囊泡型磷脂凝膠不易注射給藥的問題，同時又取得了較好的緩釋效果，具有良好的應用前景。本發明的優點
高濃度磷脂緩釋制劑含有能夠與水完全互溶的乙醇溶液，注射到體內后，乙醇能夠迅速擴散到體液中，制劑中的磷脂析出固化，成為藥物緩釋的載體，控制藥物的釋放。動物體內實驗證明該制劑確實具有良好的緩釋效果。實質上高濃度磷脂緩釋制劑是ー種真溶液， 與相同磷脂濃度的囊泡型磷脂凝膠相比具有流動性好、容易注射給藥等優點。另外還可以根據所要包載藥物的溶解性選擇合適的液體或液體組合來溶解藥物，以制得均勻透明的穩定制劑。此外，高濃度磷脂緩釋制劑中不含水分或水分的含量很低，且制劑中含有乙醇，可以有效抑制微生物的生長，有利于制劑的穩定和貯藏，從而擴大了高濃度磷脂緩釋制劑的應用范圍。
以下，結合附圖來詳細說明本發明的實施方案，其中
圖1為高效液相色譜-質譜法繪得的醋酸奧曲肽的線性回歸曲線。圖2為大鼠皮下注射醋酸奧曲肽的高濃度磷脂緩釋制劑的藥時曲線。圖3為醋酸奧曲肽的體外標準曲線。
具體實施例方式以下實施例是對本發明的進ー步說明，但絕不是對本發明范圍的限制。下面參照實施例進ー步詳細闡述本發明，但是本領域技術人員應當理解，本發明并不限于這些實施例以及使用的制備方法。而且，本領域技術人員根據本發明的描述可以對本發明進行等同替換、組合、改良或修飾，但這些都將包括在本發明的范圍內。實施例1取醋酸奧曲肽50mg，溶于1. 5g的85% (ν/ν)乙醇-pH4. 0乳酸緩沖液溶液中，得到藥物溶液，0. 22ΜΠ1微孔濾膜過濾，加入蛋黃卵磷脂Ε80 7. Og,再加入經0. 22Mm微孔濾膜過濾后的大豆油1. 5g，無菌環境下磁力攪拌約0.證，至E80完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色不透明液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例2
取胸腺五肽20mg，溶于2. Og無水乙醇中，得到藥物溶液，0. 22Mm微孔濾膜過濾，加入蛋黃卵磷脂E80 6. 0g，再加入0. 22ΜΠ1微孔濾膜過濾的中鏈脂肪酸甘油酯2. 0g，磁力攪拌約 0. 5h，至E80完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色不透明液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得胸腺五肽的高濃度磷脂緩釋制劑。實施例3
取胰島素lOOmg，溶于2. Og 90% (ν/ν)乙醇-生理鹽水溶液中，得到藥物溶液，0. 22Mm 微孔濾膜過濾，加入大豆磷脂5. 5g，再加入0. 22Mffl微孔濾膜過濾的大豆油2. 5g，磁力攪拌約0.證，至大豆磷脂完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色不透明液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得胰島素的高濃度磷脂緩釋制劑。實施例4
取促紅細胞生成素(EPO) 30mg，溶于2. Og的80%乙醇-磷酸鹽緩沖液(pH值6. 9)中， 得到藥物溶液，0. 22Mm微孔濾膜過濾，加入蛋黃卵磷脂E80 5. 0g，再加入3. Og 0. 22Mm微孔濾膜過濾的麻油，磁力攪拌約0.紐，至E80完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色不透明液體，靜置至氣泡基本完全消失，分裝，密封，即得促紅細胞生成素的高濃度磷脂緩釋制劑。實施例5
取亮氨酸腦啡肽lOOPg，溶于2. Og的85%(ν/ν)乙醇-水溶液中，得到藥物溶液，0. 22Mm 微孔濾膜過濾，加入氫化大豆磷脂7. 0g，再加入l.Og 0.22Mm微孔濾膜過濾的大豆油，磁力攪拌約0.證，至氫化大豆磷脂完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色不透明液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得亮氨酸腦啡肽的高濃度磷脂緩釋制劑。實施例6
取白細胞介素16mg，溶于1. Og的80% (ν/ν)乙醇-水溶液中，得到藥物溶液，0. 22Mm 微孔濾膜過濾，加入蛋黃卵磷脂E80 7.58，再加入1.58 0.22Mm微孔濾膜過濾的中鏈脂肪酸甘油酷，磁力攪拌約0. 5h，至E80完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色不透明液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得白細胞介素的高濃度磷脂緩釋制劑。實施例7
取干擾素30mg，溶于1. 5g的85% (ν/ν)乙醇-水溶液中，得到藥物溶液，0. 22Mm微孔濾膜過濾，加入氫化蛋黃卵磷脂6. 5g，再加入2. Og經0. 22ΜΠ1微孔濾膜過濾的大豆油，磁力攪拌約0.紐，至氫化蛋黃卵磷脂完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色不透明粘稠液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得干擾素的高濃度磷脂緩釋制劑。實施例8
取醋酸亮丙瑞林lOOmg，溶于1. 5g 80% (ν/ν)乙醇-水溶液中，得到藥物溶液，0. 22Mm 微孔濾膜過濾，加入大豆磷脂7. 5g，再加入1. Og經0. 22Mffl微孔濾膜過濾的中鏈脂肪酸甘油酷，磁力攪拌約0.紐，至大豆磷脂完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色不透明液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得醋酸亮丙瑞林的高濃度磷脂緩釋制劑。CN 102526753 A實施例9
取生長激素40mg，溶于1. 5g的95% (ν/ν)乙醇-水溶液中，得到藥物溶液，0. 22Mm微孔濾膜過濾，加入ニ棕櫚酰磷脂酰膽堿6. Og,再加入2. 5g經0. 22Mffl微孔濾膜過濾的油酸乙酷，磁力攪拌約0. 5h，至完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色不透明液體，靜置至氣泡完全消失，得到澄清透明液體，分裝，密封，即得生長激素的高濃度磷脂緩釋制劑。實施例10
取醋酸艾塞納肽20mg溶于IOml注射用水中，形成藥物溶液，0. 22Mm微孔濾膜過濾滅菌，無菌條件下加入注射級蛋黃卵磷脂E80 3. 0g，攪拌混勻，按aiil/瓶分裝，-40°C冷凍4小時，凍干機上抽干M小吋，得酥松凍干磷脂，密封，備用。將5g的95%乙醇溶液和5g中鏈脂肪酸甘油酯混和，0. 22Mm微孔濾膜過濾滅菌， 分裝成0. 4g/瓶，密封，備用。臨用時將中鏈脂肪酸甘油酷-95%乙醇混和溶液注入凍干磷脂中，用力振搖，溶解，即得。實施例11
稱取水溶性藥物硫酸嗎啡60mg，溶于2. Og 85% (ν/ν)乙醇-水溶液中，得到藥物溶液， 0. 22ΜΠ1微孔濾膜過濾，加入大豆磷脂6. 0g，再加入2. Og經0. 22Mm微孔濾膜過濾的油酸乙酷，磁力攪拌至大豆磷脂完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色不透明液體，靜置至氣泡完全消失，得到澄清透明液體，分裝，密封，即得。實施例12
稱取脂溶性藥物尼莫地平40mg，溶于2. Og無水乙醇中，得到藥物溶液，0. 22ΜΠ1微孔濾膜過濾，加入蛋黃卵磷脂E80 7.0g，再加入l.Og經0.22Mm微孔濾膜過濾的中鏈脂肪酸甘油酷，磁力攪拌至E80完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色不透明液體，靜置至氣泡基本完全消失，得到澄清透明液體，分裝，密封，即得。實施例13乙醇濃度的選擇
稱取4份蛋黃卵磷脂(E80)，每份7. Og,分別加入不同濃度的乙醇至10. Og,攪拌2小時，觀察外觀，并測定粘度，結果見表1。可見，乙醇濃度在80%以上都可以很好地溶解磷脂， 得到流動性良好的溶液。表1乙醇濃度的篩選
乙醇濃度1009590858075外觀澄清透明澄清透明澄清透明澄清透明澄清透明渾濁不澄清粘度152. 7158. 1156. 8161. 2173. 6326. 3
實施例14不同種類的基質材料對制劑粘度的影響
按表2處方分別稱取不同種類的磷脂7. 0g、油1. 5g和乙醇溶液1. 5g，攪拌2小時，測定粘度，結果見表2。可見添加不同種類的磷脂、油和乙醇溶液對制劑的粘度影響不大。
表2不同種類的基質材料對制劑粘度的影響
權利要求
1.ー種包含磷脂、乙醇溶液和/或注射用油的藥物組合物。
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于為原位注射相變凝膠緩釋制劑。
3.權利要求2所述的ー種原位注射相變凝膠緩釋制劑，其特征在于包含磷脂、生物活性成分、乙醇溶液和/或注射用油，基于制劑的總重量計，其中磷脂含量為約50% 約85% (g/g)，生物活性成分含量為約0. 01% 約10% (g/g)，注射用油含量為約10% 約40% (g/ g)，乙醇溶液含量為約30% 約5% (g/g)。
4.權利要求3所述的ー種原位注射相變凝膠緩釋制劑，其特征在于乙醇溶液的濃度范圍為約 80% 100% (ν/ν)。
5.根據權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于所述磷脂包括，天然磷脂、半合成磷脂、合成磷脂中一種或多種的組合。
6.根據權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于所述注射用油包括，大豆油、玉米油、麻油、茶油、魚油、中鏈脂肪酸甘油酷、棉子油、油酸乙酯及上述物質的組合。
7.根據權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于所述乙醇溶液包括無水乙醇、乙醇-水溶液、乙醇-生理鹽水溶液、乙醇-磷酸鹽緩沖液溶液、乙醇-醋酸鹽緩沖液溶液、乙醇-碳酸鹽緩沖液溶液、乙醇-琥珀酸鹽緩沖液溶液、乙醇-枸櫞酸鹽緩沖液溶液、乙醇-乳酸鹽緩沖液溶液等，其中乙醇濃度可以為約80% 100%(ν/ν)，該乙醇溶液在原位注射相變凝膠緩釋制劑中的含量為約30% 約5% (g/g)。
8.ー種制備權利要求2所述的原位注射相變凝膠緩釋制劑的方法，其特征在于包括以下步驟(1)取生物活性成分溶于適量乙醇溶液中，再與適量注射用油混和，形成藥物溶液，微孔濾膜過濾滅菌；(2)在無菌條件下取注射級磷脂與藥物溶液混合，攪拌使磷脂完全溶解，靜置片刻以除去制劑中的氣泡，分裝，密封，即得。
9.ー種制備權利要求2所述的原位注射相變凝膠緩釋制劑的試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟(1)取適量生物活性成分溶于適量的純水或緩沖鹽溶液中，形成藥物溶液，微孔濾膜過濾滅菌，無菌條件下加入注射級磷脂，攪拌混勻；(2)將上述半固體磷脂凝膠分裝，按常規方式冷凍干燥，密封；(3)將適量乙醇溶液和適量注射用油混和，微孔濾膜過濾滅菌，分裝，密封，備用；(4)步驟(2)和(3)的產品，以試劑盒的方式組合包裝。
10.權利要求1的組合物在制備降低乙醇副作用的原位注射相變凝膠緩釋制劑中的應
全文摘要
本發明提供一種以磷脂為基質的原位注射相變凝膠緩釋制劑，并提供了該制劑的制備方法。本發明采用簡單的方法將較高濃度(50%～85%)的磷脂、生物活性成分、不同濃度的乙醇溶液和/或注射用油制備成高濃度磷脂緩釋制劑，具有生物相容性好，不良反應小，緩釋效果顯著，適用于皮下注射、肌肉注射、外用給藥等多種給藥形式的特點，而且所包載藥物的量可方便地根據藥物臨床用劑量進行調節，具有廣闊的應用前景。
文檔編號A61K47/44GK102526753SQ20111042010
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月15日 優先權日2011年12月15日
發明者孫遜, 張志榮, 龔濤 申請人:成都師創生物醫藥科技有限公司