專利名稱：氧化還原相關因子表達促進劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及包含莰非醇(kaempferol)、五羥黃酮(quercetin)或它們的糖苷、或上述莰非醇、五羥黃酮和它們的糖苷的任意組合作為有效成分的氧化還原相關因子表達促進劑，以及包含銀杏葉提取物、山柰提取物或它們的組合作為有效成分的氧化還原相關因子表達促進劑。
背景技術：
生物體為了維持其生存、恒有度而進行氧化還原調節。生物體內的氧化還原調節主要依靠存在于細胞內蛋白質中的半胱氨酸殘基上的巰基的可逆氧化還原反應，從而控制各種細胞功能。已知與氧化還原調節相關的因子(氧化還原相關因子)使細胞內保持還原狀態、發揮細胞生存所必須的作用，另一方面，在生物體內的活性氧的清除方面也發揮重要的作用。如果上述氧化還原相關因子未正常發揮作用，則生物體內的活性氧過量產生，從而遭受過度的氧化應激。可認為這樣的過度氧化應激通過將DNA和/或蛋白質、脂質等生物體高分子氧化而使其受損傷，從而造成各種疾病和/或老化。因此，近年來，作為導致氧化應激的活性氧的清除系統發揮作用的氧化還原相關因子的研究盛行。作為對生物體的氧化應激的防御機構而發揮作用的氧化還原相關因子，已知谷胱甘肽系統。已報告谷胱甘肽是存在于哺乳動物中的三肽，具有以下作用利用其分子內巰基的還原作用、作為輔酶的作用、參與硫醚氨酸的生成和其它解毒機構的作用、保護巰基酶 (thiol enzyme)或其它細胞成分的作用、促進有害物排泄的作用、通過提高膽堿酯酶活性來抗變態反應的作用、酶激活作用。然而，由于谷胱甘肽在制劑中會產生沉淀，而且大多數細胞無法攝入谷胱甘肽，因此用于促進細胞內谷胱甘肽的產生的成分是極其有用的。作為這樣的成分，迄今為止報導了 Y-生育酚或S-生育酚，公開了含有這些成分的谷胱甘肽產生促進劑(日本特開2007-284430 (專利文獻1))。此外，作為其它氧化還原相關因子，已知硫氧還蛋白系統，硫氧還蛋白系統也是作為對生物體中氧化應激的防御機構而發揮作用(細胞工學Vo 1. 2 5，No. 2，2006， pl43-148(非專利文獻1))。此外，還報導了硫氧還蛋白的轉基因小鼠變得長壽(Mitsui A, et al =Antioxid Redox Signal (2002) 4 :693_696 (非專利文獻 2))、以及硫氧還蛋白對腦梗死、糖尿病具有抵抗性(Takagi Y，et al =Proc Natl Acad Sci USA(1999)96 4131-4136 (非專利文獻 3)、Hotta M, et al J Exp Med (1998) 188 1445-1451 (非專利文獻4))、對變態反應性皮炎有效(日本特開2007-269671 (專利文獻2))，因而硫氧還蛋白作為活性氧清除劑被廣泛使用(日本特開平9-157153(專利文獻3))。然而，由于硫氧還蛋白系統是高分子蛋白質，因此即使將這些化合物直接給藥至對象，這些分子也不能被攝入細胞內。因此，雖然期望促進生物體內硫氧還蛋白系統的表達，但是作為促進它們表達的成分，迄今為止僅僅已知艾草提取物或青紫蘇提取物(國際公開號W02006/033351 (專利文獻 4))。如上所述，即使將谷胱甘肽系統和/或硫氧還蛋白系統等氧化還原相關因子直接給藥至生物體，它們也不能有效地被攝入細胞內，因此有可能不能在生物體內發揮氧化還原調節功能和/或抗氧化功能。雖然已知這些氧化還原相關因子的表達可通過紫外線照射應激被增強，但是安全并有效地作用于生物體的化學物質迄今為止還未被人們所知，生物體內的氧化還原相關因子的表達機制也沒有得到詳細闡明。因此，依然期待發現用于促進生物體內氧化還原相關因子的表達的安全且有效的成分。專利文獻1 日本特開2007-284430專利文獻2 日本特開2007-269671專利文獻3 日本特開平9-157153專利文獻4 國際公開號W02006/033351非專利文獻1 細胞工學 Vol. 25，No. 2，2006，pl43_148非專利文獻2 =Mitsui A, et al =Antioxid Redox Signal (2002) 4 693~696非專利文獻3 =Takagi Y, et al =Proc Natl Acad Sci USA (1999) 96 :4131_4136非專利文獻4 =Hotta M, et al J Exp Med (1998) 188 :1445_145
發明內容
本發明的課題是，通過促進生物體內氧化還原相關因子的表達，安全且有效地減少生物體的氧化應激，保持生物體健康，并防止由氧化應激引起的各種疾病和癥狀。這一次，作為增強生物體內氧化還原相關因子即谷胱甘肽系統和硫氧還蛋白系統的表達和活性的成分，本發明者們發現了屬于黃酮醇類的莰非醇(kaempferol)和五羥黃酮(quercetin)。出乎意料的是，上述作用在黃酮醇類中是莰非醇和五羥黃酮特有的，在結構類似的楊梅黃酮中并未觀察到上述作用。與直接應用谷胱甘肽系統和/或硫氧還蛋白系統的分子的情況相比，應用莰非醇和/或五羥黃酮能夠更有效地促進生物體內的谷胱甘肽系統和/或硫氧還蛋白系統等氧化還原相關因子的表達和活性，因此根據本發明，可以更有力地減輕生物體內的多種氧化應激。莰非醇和/或五羥黃酮等黃酮醇類廣泛分布在茶葉的植物中，對生物體是無毒的，可以安全地攝取。這樣，通過將莰非醇和五羥黃酮制成用于促進生物體內的氧化還原相關因子的表達的有效成分，能夠在不給被應用的生物體帶來應激的狀態下清除生物體內的過量的活性氧。因此，本申請包含以下發明[1] 一種氧化還原相關因子表達促進劑，其包含莰非醇、五羥黃酮或它們的糖苷、 或上述莰非醇、五羥黃酮和它們的糖苷的任意組合作為有效成分。[2]根據[1]所述的氧化還原相關因子表達促進劑，其特征在于，所述氧化還原相關因子是選自硫氧還蛋白、硫氧還蛋白還原酶、谷胱甘肽還原酶和谷氧還蛋白中的1種或多種物質。[3] 一種氧化還原相關因子表達促進劑，其包含銀杏葉提取物、山柰提取物或它們的組合作為有效成分。[4]根據[3]所述的氧化還原相關因子表達促進劑，其特征在于，所述氧化還原相關因子是選自硫氧還蛋白、硫氧還蛋白還原酶、谷胱甘肽還原酶和谷氧還蛋白中的1種或多種物質。[5]莰非醇、五羥黃酮或它們的糖苷、或上述莰非醇、五羥黃酮和它們的糖苷的任意組合的用途，用于調制氧化還原相關因子表達促進劑。[6]銀杏葉提取物、山柰提取物或它們的組合的用途，用于調制氧化還原相關因子表達促進劑。通過促進生物體內的氧化還原相關因子的表達，可以安全且有效地減少生物體內的活性氧、防御生物體的氧化應激。由此能夠保持生物體的健康，并防止由氧化應激引起的各種疾病和癥狀。
圖1是顯示莰非醇增強生物體內的氧化還原相關因子的表達的圖。圖2是顯示莰非醇增強皮膚等效模型中的氧化還原相關因子的表達的圖。圖3是顯示將黃酮類化合物增強硫氧還蛋白系統的表達的作用進行比較的圖。圖4是顯示銀杏葉提取液和山柰提取液增強硫氧還蛋白還原酶的表達的圖。圖5是顯示莰非醇和五羥黃酮的促進硫氧還蛋白還原酶的活性的效果的圖。圖6是顯示莰非醇以及銀杏葉提取液和山柰提取液抑制炎癥細胞因子(ILlii)產生的效果的圖。
具體實施例方式在本發明的1個實施方式中，提供包含莰非醇、五羥黃酮或它們的糖苷、或上述莰非醇、五羥黃酮和它們的糖苷的任意組合作為有效成分的氧化還原相關因子表達促進劑。在本說明書中，“氧化還原相關因子”意味著與存在于生物體、例如哺乳類、優選為人類體內的蛋白質的半胱氨酸殘基的巰基發生氧化或還原反應，使細胞內保持還原狀態的因子。認為在細胞的活化和/或信息傳導物質的加工、即信號傳導機構中，由存在于細胞內的蛋白質中的半胱氨酸殘基上的巰基的氧化所引起的蛋白質-蛋白質之間的相互作用中的修飾發揮著特別重要的作用。該半胱氨酸殘基上的巰基的氧化/還原(氧化還原)參與基因的轉錄、蛋白質的細胞內定位、合成、分解的調節、以及細胞的增殖和/或細胞死亡等各種生命現象的調節。作為與這樣的生物體內的氧化還原相關的系統，已知谷胱甘肽系統和硫氧還蛋白系統，它們分別由一組分子構成。已知這些氧化還原相關因子還參與在生物體內產生和存在的活性氧的清除。硫氧還蛋白系統特別地由硫氧還蛋白和硫氧還蛋白還原酶等因子構成。硫氧還蛋白(TRX)是作為向大腸桿菌的DNA合成所必須的酶、即核糖核苷酸還原酶提供氫的輔酶而被發現的。TRX是在原核生物和/或人等多種生物體中保守的約12kDa的蛋白質，具有包含 4個β折疊和3個α螺旋的立體結構，具有-Cys-Gly-Pro-Cys-這樣的活性部位。TRX存在其活性部位的2個半胱氨酸殘基之間形成二硫鍵的氧化型(S-S)和還原型(-SH，SH-)， 還原型將底物蛋白質的二硫鍵還原，從而自身變成氧化型。氧化型TRX被NADPH和硫氧還蛋白還原酶還原，從而再生成還原型。作為底物蛋白質的一種，已知被總稱為過氧還蛋白 (peroxiredoxin)的過氧化氫酶家族。還原型過氧還蛋白還原H2O2。然后，變成了氧化型的過氧還蛋白作為底物而被硫氧還蛋白還原。變成了氧化型的硫氧還蛋白被硫氧還蛋白還原酶還原。在這樣的活性氧的無毒化系統中，硫氧還蛋白系統發揮著重要的作用。谷胱甘肽系統特別地由谷胱甘肽、谷胱甘肽還原酶和谷氧還蛋白等因子構成。谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸形成的三肽，作為非蛋白質性的硫醇成分大量存在于細胞內，作為細胞內的親水性區域中的主要抗氧化物質為人們所知。谷胱甘肽與活性氧 (例如超氧化物或過氧化氫)反應而形成穩定的谷胱甘肽自由基，變成2聚體(GSSG:氧化型谷胱甘肽)，接下來谷胱甘肽還原酶將來自NADPH的電子轉移到GSSG，而生成GSH (還原型谷胱甘肽)。谷氧還蛋白(GRX)具有與硫氧還蛋白同源的-Cys-Pro-Tyr-Cys-這樣的活性部位，由于與硫氧還蛋白的同源性而被稱為硫氧還蛋白超家族。GRX存在其活性部位的2 個半胱氨酸殘基之間形成二硫鍵的氧化型(S-S)和還原型(-SH，SH-)。與硫氧還蛋白同樣地，還原型將底物蛋白質的二硫鍵還原，從而自身變成氧化型。關于其生物活性還有很多不清楚的地方，但已知與生物體內的氧化還原調節和/或氧化應激應答相關。這樣，通過活化硫氧還蛋白、硫氧還蛋白還原酶、谷胱甘肽還原酶和谷氧還蛋白等氧化還原相關因子或促進它們的表達，可以減少生物體內的過量活性氧，防御生物體的氧化應激。如上所述，這一次，本發明者們獲得了如下令人驚訝的認識莰非醇和五羥黃酮活化上述氧化還原相關因子并促進其表達。包含莰非醇和五羥黃酮的黃酮醇類具有如下所示通式，
權利要求
1.一種氧化還原相關因子表達促進劑，其包含莰非醇、五羥黃酮或它們的糖苷、或上述莰非醇、五羥黃酮和它們的糖苷的任意組合作為有效成分。
2.根據權利要求1所述的氧化還原相關因子表達促進劑，其特征在于，所述氧化還原相關因子是選自硫氧還蛋白、硫氧還蛋白還原酶、谷胱甘肽還原酶和谷氧還蛋白中的1種或多種物質。
3.一種氧化還原相關因子表達促進劑，其包含銀杏葉提取物、山柰提取物或它們的組合作為有效成分。
4.根據權利要求3所述的氧化還原相關因子表達促進劑，其特征在于，所述氧化還原相關因子是選自硫氧還蛋白、硫氧還蛋白還原酶、谷胱甘肽還原酶和谷氧還蛋白中的1種或多種物質。
全文摘要
本發明的課題是，通過促進生物體內氧化還原相關因子的表達，從而安全且有效地減少生物體的氧化應激，保持生物體健康，并防止由氧化應激引起的各種疾病和癥狀。本發明涉及包含莰非醇、五羥黃酮或它們的糖苷、或上述莰非醇、五羥黃酮和它們的糖苷的任意組合作為有效成分的氧化還原相關因子表達促進劑，以及包含銀杏葉提取物、山柰提取物或它們的組合作為有效成分的氧化還原相關因子表達促進劑。
文檔編號A61P37/08GK102361637SQ201180000127
公開日2012年2月22日 申請日期2011年1月28日 優先權日2010年1月29日
發明者S·W·李, 仲西城太郎, 勝田雄治, 菅原美鄉 申請人:株式會社資生堂, 綜合醫院公司