專利名稱：一種水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑及制備方法
技術領域：
本發明涉及一種水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑及制備方法，屬于動物用病毒活疫苗制造領域。
背景技術：
在疫苗制品的領域中，凍干保護劑及其制備エ藝是活疫苗生產中的一項關鍵技術，對疫苗的保存、運輸和使用有很大影響。目前，在我國獸用疫苗中，活的凍干疫苗占相當大的比例，國內常用的保護劑主要為牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡單，保護功能差。如果在2°C_8°C條件下，保存期只有4-6個月，多需要在-15°C以下保存。加上國內傳統的獸用生物制品保護劑的研制相對滯后，使成品疫苗的長期保存和運輸受限。所以，耐熱凍干保護劑的研究是非常急需的，在20世紀80年代，發達國家就已開始進行耐熱凍干保護劑的研究。我國在耐熱凍干保護劑方面的研究起步較晚，但現在在這方面的研究取得了一定的成果，傅德霞等(1997)將明膠蔗糖保護劑用于雞新城疫弱毒凍干苗和雞傳染性支氣管炎弱毒凍干苗，其免疫效果與牛奶蔗糖保護劑基本相同。王仁耕等(1989)對雞新城疫I系凍干苗的耐熱保護劑的研究表明，2-8 V保存24個月能夠達到《規程》標準，主要為牛奶、蔗糖、谷氨酸鈉、甘露醇等。沈銘強等(1990)對狂犬病凍干苗耐熱保護劑進行了研究，以蔗糖、牛奶、EDTA、甘露醇等材料為主，經2-8で保存有效期為一年。李道義等(1996)進行了豬瘟凍干苗保護劑的研究，主要成分為CH0、谷氨酸鈉、牛血清、脫脂牛奶等，4-8°C保存15-24個月，250C 100天，37°C 7天，經檢驗，物理性狀、真空度、水分、安全效カ等測定達部頒標準。王棟等(2002)已經研制出ー種耐熱凍干保護劑，用此保護劑凍干的疫苗在2°C _8°C條件下，保存24個月以后，病毒滴度無明顯下降。由于凍干保護劑可影響生物制品的質量、效價和穩定性，改變生物制品的生產エ藝，提高產品預測能力并增大產品批次間的穩定性，并且耐熱凍干保護劑有免疫活性但無藥理活性，可在凍干和保存時維持疫苗的穩定性，初次干燥時在適宜的溫度下疫苗不倒塌，企業低成本即可獲取。
發明內容
本發明的目的是提供ー種新型水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑及其制備方法，降低保護條件，延長使用期并降低使用成本。一種水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑，以注射用水為溶劑配制溶液，各組分質量百分比濃度為明膠3%、聚こ烯吡咯烷酮5%、脫水果糖1%、海藻糖3%、甘氨酸3%、山梨醇3%、谷氨酸鈉2% ;均為干物質組份。上述水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑的制備方法，(I)對可高壓滅菌的明膠、聚こ烯吡咯烷酮(K90)，按各自比例溶于注射用水，121°C滅菌15分鐘；(2)將不耐高溫的物質組份山梨醇、谷氨酸鈉、脫水果糖、甘氨酸、海藻糖；均按各自比例溶于注射用水中用孔徑
0.22 的濾膜過濾除菌；然后將(I)、(2)混合，即為耐熱凍干保護劑，凍干保護劑中各組分質量百分比濃度為明膠3%、聚こ烯吡咯烷酮5%、脫水果糖1%、海藻糖3%、甘氨酸3%、山梨醇3%、谷氨酸鈉2%。使用時按I: I體積比加入病毒抗原液中，分裝后進行冷凍干燥。本發明的活疫苗耐熱凍干保護劑，降低保存條件，延長保存期，降低使用成本及其提高疫苗的免疫效力，使活疫苗的儲存、運輸和使用都更方便、經濟。本發明的制劑在2_8°C條件下可保存24個月以上，能達到《中華人民共和國獸醫生物制品質量標準》中規定的各項指標。
具體實施例方式以下結合具體實施例，對本發明進行詳細說明。ー種新型水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑，配比為明膠3g、聚こ烯吡咯烷酮5g、脫水果糖I g、海藻糖3 g、甘氨酸3 g、山梨醇3 g、谷氨酸鈉2 g，注射用水80g，可得到IOOg水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑。水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑的制備方法，(I)對可高壓滅菌的明膠、聚こ烯吡咯烷酮(K90)，按各自比例溶于注射用水，121°C滅菌15分鐘；(2)將不耐高溫的物質組份山梨醇、谷氨酸鈉、脫水果糖、甘氨酸、海藻糖；均按各自比例溶于注射用水中用孔徑
0.22 的濾膜過濾除菌；分別完成除菌后將(I)、(2)兩種成分混合，即為耐熱凍干保護齊U，使用時按1:1體積比例加入病毒抗原液中，分裝后進行冷凍干燥。技術參數及檢測方法
1.產品的物理性狀、無菌檢驗、支原體檢驗、外源病毒檢驗、安全檢驗、剩余水分測定和真空度測定按《中華人民共和國獸醫生物制品規程》的方法及標準進行。2.凍于周期不超過48h。3.病毒含量測定及標準
選擇發育良好的9 10日齡SPF雞胚制備雞胚成纖維細胞懸液，用細胞生長液制備雞胚成纖維細胞懸液(濃度5X IO6個左右)，接種96孔板上33°C培養。按瓶簽注明頭份，用生理鹽水將每頭份疫苗按實含抗原量稀釋適當的倍數，用滅菌生理鹽水做10倍系列稀釋，選取適宜稀釋度5個，接種長成雞胚成纖維細胞單層的96孔板上，每個稀釋度接種6孔，每孔100 Ul，吸附I小時后加維持液100 yl，在33°C培養7 8日，計算TCID5tl,每Iml病毒含量IO4TCID5tl以上為合格。4、試制3批由本耐熱凍干保護劑凍干的產品，并設常規5%蔗糖脫脂乳保護劑對照組，置于37°C、2-8°C條件下保存，不同時間取樣，測定病毒含量及其物理性狀等。結果見表;
表I本發明的水貂犬瘟熱活疫苗凍干后物理性狀等參數測定從以上實驗結果看出，在不同環境溫度下，本發明的耐熱凍干保護劑對水貂犬瘟熱活疫苗的保護效果優于常規5%蔗糖脫脂乳保護劑，凍干后疫苗達IO5 TCID5tl合格，產品在370C保存IOd，產品的效カ達IO4 TCID5。合格。產品在2-8 0C保存24個月，產品的效力均在IO4 TCID50以上。本發明耐熱保護劑對水貂犬瘟熱活疫苗具有良好的保護效果。對本領域普通技術人員來說，可以根據上述說明加以改進或變換，而所有這些改進和變換都應屬于本發明所附權利要求的保護范圍。
權利要求
1.一種水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑，其特征在于，以注射用水為溶劑配制溶液，各組分質量百分比濃度為明膠3%、聚乙烯吡咯烷酮5%、脫水果糖1%、海藻糖3%、甘氨酸3%、山梨醇3%、谷氨酸鈉2% ;均為干物質組份。
2.根據權利要求I所述的水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑的制備方法，包括如下步驟 (1)對可高壓滅菌的明膠、聚乙烯吡咯烷酮(K90)，按各自比例溶于注射用水，121°C滅菌15分鐘； (2)將不耐高溫的物質組份山梨醇、谷氨酸鈉、脫水果糖、甘氨酸、海藻糖，均按各自比例溶于注射用水中過濾除菌； (3 )將步驟(I)和(2 )的溶液混合。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(2)中的過濾除菌采用微孔濾膜的方式。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于所述的微孔濾膜為孔徑O.22 μ m的濾膜。
5.權利要求I所述的水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑在保護水貂犬瘟熱活疫苗中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于權利要求I所述的水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑，使用時按1:1體積比例加入病毒抗原液中，分裝后進行冷凍干燥。
7.根據權利要求5或6所述的應用，其特征在于疫苗在2-8°C條件下可保存24個月以上。
全文摘要
本發明公開了一種水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護劑，以注射用水為溶劑配制溶液，各組分質量百分比濃度為明膠3%、聚乙烯吡咯烷酮5%、脫水果糖1%、海藻糖3%、甘氨酸3%、山梨醇3%、谷氨酸鈉2%；均為干物質組份，對可高壓滅菌的明膠、聚乙烯吡咯烷酮(K90)，按各自比例溶于注射用水，121℃滅菌15分鐘；(2)將不耐高溫的物質組份山梨醇、谷氨酸鈉、脫水果糖、甘氨酸、海藻糖、蔗糖；均按各自比例溶于注射用水中用孔徑0.22μm的濾膜過濾除菌；然后將(1)、(2)混合，即為耐熱凍干保護劑。本發明是一種低成本、長效制品及制備方法。
文檔編號A61P31/14GK102626520SQ20121011993
公開日2012年8月8日 申請日期2012年4月23日 優先權日2012年4月23日
發明者單虎, 張傳美, 張洪亮, 楊瑞梅, 秦曉冰, 黃娟 申請人:青島農業大學