一種中藥組合物在制備治療細胞損傷藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種中藥組合物在制備治療細胞損傷藥物中的應用。本發明中藥組合物由赤芍、黃芪、生地黃等12味中藥組成，化瘀通絡，益氣養陰，臨床研究表明，本發明中藥組合物能夠有效治療細胞損傷。
【專利說明】一種中藥組合物在制備治療細胞損傷藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種中藥組合物的新用途，具體地涉及一種中藥組合物在制備治療細胞損傷藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]細胞損傷主要體現在細胞膜的破壞、活性氧類物質和胞漿內游離鈣增多、缺氧、化學毒害和遺傳物質變異等幾方面，它們互相作用或是互為因果，導致細胞損傷的發生與發展。(一)細胞膜的破壞，機械力的直接作用、酶性溶解、缺氧、活性氧類物質、細菌毒素、病毒蛋白、補體成分、化學損傷等都可破壞細胞膜結構的完整性和通透性，影響細胞膜的信息和物質交換、免疫應答、細胞分裂與分化等功能。細胞膜受到破壞的機制在于進行性膜磷脂減少，磷脂降解產物堆積，以及細胞膜與細胞骨架分離使細胞膜易受拉力損害等。細胞膜破壞是細胞損傷特別是細胞不可逆性損傷的關鍵環節。(二)活性氧類物質的損傷，活性氧類物質(activated oxygen species，AOS)又稱反應性氧類物質,包括處于自由基狀態的氧(如超氧自由基和輕自由基0H),以及不屬于自由基的過氧化氫H2 02。自由基(freeradicals)是原子最外層偶數電子失去一個電子后形成的具有強氧化活性的基團。細胞內同時存在生成AOS的體系和拮抗其生成的抗氧化劑體系。正常小量生成的A0S，會被超氧化物岐化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶及維生素E等細胞內外抗氧化劑清除。在缺氧、缺血、細胞吞噬、化學性放射性損傷、炎癥以及老化等的氧化還原過程中，AOS生成增多，脂質、蛋白質和DNA過氧化，分別引起膜相結構膜質雙層穩定性下降，DNA單鏈破壞與斷裂，促進含硫蛋白質相互交聯，并可直接導致多肽破裂。AOS的強氧化作用是細胞損傷的基本環節。(三)細胞漿內高游離鈣的損傷磷脂、蛋白質、ATP和DNA等會被胞漿內磷脂酶、蛋白酶、ATP酶和核酸酶等降解，此過程需要游離鈣的活化。正常時細胞內游離鈣與鈣轉運蛋白結合貯存于內質網、線粒體等處鈣庫內，胞漿處于低游離鈣狀態。細胞膜ATP鈣泵和鈣離子通道，參與胞漿內低游離鈣濃度的調節。細胞缺氧、中毒時，ATP減少，Na+/Ca2+交換蛋白直接或間接激活胞漿內游離鈣使之繼發增多，促進上述酶類活化而損傷細胞。細胞內鈣濃度往往與細胞結構和功能損傷程度呈正相關，大量鈣的流入導致的細胞內高游離鈣(鈣超載)是許多因素損傷細胞的終未環節，并且是細胞死亡最終形態學變化的潛在介導者。(四)缺氧的損傷，細胞缺氧會導致線粒體氧化磷酸化受抑，ATP形成減少，細胞膜鈉-鉀泵、鈣泵功能低下，胞漿內蛋白質合成和脂肪運出障礙，無氧糖酵解增強，造成細胞酸中毒，溶酶體膜破裂，DNA鏈受損。缺氧還使活性氧類物質增多，引起脂質崩解和細胞骨架破壞。輕度短暫缺氧可使細胞水腫和脂肪變，重度持續缺氧可引發細胞壞死。在一些情況下，缺血后血流的恢復會引起存活組織的過氧化，反而加劇組織損傷，稱為缺血再灌注損傷。(五)化學性損傷，許多化學物質包括藥物都可造成細胞損傷。化學性損傷可為全身性或局部性兩種類型，前者如氯化物中毒，后者如接觸強酸強堿對皮膚粘膜的直接損傷。一些化學物質的作用還有器官特異性，如CCl4引起的肝損傷。化學性損傷的途徑有:①化學物本身具有直接細胞毒作用。例如氰化物能迅速封閉線粒體的細胞色素氧化酶系統而致猝死；氯化汞中毒時，汞與細胞膜含疏蛋白結合而損害ATP酶依賴性膜轉運功能；化學性抗腫瘤藥物和抗生素也可通過類似的直接作用傷及細胞。②代謝產物對靶細胞的細胞毒作用。肝、腎、骨髓、心肌常是毒性代謝產物的靶器官，如CC14本身并無活性，其在肝細胞被轉化為毒性自由基CC13后，便可引起滑面內質網腫脹，脂肪代謝障礙。③誘發過敏反應等免疫損傷，如青霉素引發I型變態反應。④誘發DNA損傷(見遺傳變異)。化學物質和藥物的劑量、作用時間、吸收蓄積和代謝排出的部位以及代謝速率的個體差異等，分別影響化學性損傷的程度、速度與部位。(六)遺傳變異，化學物質和藥物、病毒、射線等均可損傷核內DNA，誘發基因突變和染色體畸變，使細胞發生遺傳變異(genetic variation)。通過引起:①結構蛋白合成低下,細胞缺乏生命必需的蛋白質；②阻止重要功能細胞核分裂；③合成異常生長調節蛋白；④引發先天性或后天性酶合成障礙等環節，使細胞因缺乏生命必需的代謝機制而發生死亡。
[0003]疾病機理:1.皮肉筋骨病機，皮肉為人之外壁，內充衛氣，用于衛外，屬肺所主。筋，是指筋絡、筋膜、肌腱、韌帶、肌肉、關節囊、關節軟骨等的總稱。用以連屬關節，絡綴形體，主司關節運動，屬肝所主。骨，屬腎所主，是奇恒之府’為立身之主干，為髓之府。因此，肢體的運動，有賴于筋骨、氣血、肝腎的功能正常。皮肉筋骨的損傷，在傷科疾患中最為多見，一般分為“傷皮肉”、“傷筋”、“傷骨”，但又互相聯系。傷皮肉，則人體衛外門戶洞開，外邪容易侵入；或氣血瘀滯，郁而化熱，以致瘀熱為毒；亦可由皮肉失養，導致肢體痿弱或功能障礙。傷筋的臨床表現、病理變化復雜多端，如筋急、筋緩、筋縮、筋攣、筋痿、筋結、筋惕等。傷骨包括骨折、脫位，多因間接暴力或直接暴力所致。但筋骨損傷不是獨立存在，傷筋能損骨，損骨亦能傷筋。2.氣血精津病機,氣血與損傷的關系是損傷病機的核心內容。傷氣一般可分為氣滯與氣虛，但損傷嚴重者可出現氣閉、氣脫等證。傷血一般分為出血和瘀血兩種，其病理現象主要有血瘀、血虛和血熱等。但氣血之間有著不可分割的關系。《素問?陰陽應象大論》說:“氣傷痛，形傷腫”，痛是氣滯的主要證候，其特點為外無腫形，痛無定處，范圍較廣，體表無明顯壓痛點；腫是血瘀的常見表現，其特點是局部腫脹疼痛，痛有定處，局部壓痛明顯，出現青紫、瘀斑等.臨床上海多氣血兩傷，腫痛并見，但有偏勝。精是構成人體和維持生命活動的基本物質，即腎的先天之精與水谷后天之精。津液是人體內一切正常水液的總稱，主要是指體液而言。清而稀薄者稱為津，濁而濃稠者稱為液。津液有滑利關節，潤澤皮肉、筋骨，濡養腦髓和骨髓作用。損傷積瘀生熱，可灼傷津液，重傷久病，常能嚴重耗傷陰液，而津液大量丟失，可致“氣隨液脫”。精氣生而津液成，則表現為神；若精氣傷、津液損，則失神，臨床表現為危候。3.臟腑經絡`病機，臟腑是化生氣血、通調經絡、濡養皮肉筋骨，主持人體生命活動的主要器官。經絡是運行全身氣血，聯絡臟腑肢節，溝通上下內外，調節體內各部分的通路。
[0004]本發明公開了一種中藥組合物在制備治療細胞損傷藥物中的應用，本發明中藥組合物由赤芍、黃芪、生地黃等12味中藥組成，具有化瘀通絡，益氣養陰，臨床研究表明，本發明中藥組合物能夠有效治療細胞損傷。
【發明內容】
[0005]本發明目的是提供一種中藥組合物在制備治療細胞損傷藥物中的應用；
本發明優選為，該中藥組合物在制備保護血管內皮細胞損傷的藥物中的應用；
本發明還優選為，提供了該藥物在制備降低粘附分子粘附于血管引起的細胞損傷藥物中的應用。
[0006]本發明還優選為，提供了該藥物在制備降低粘附分子粘附于血管引起的細胞損傷藥物中的應用，其中所述粘附分子為細胞間粘附分子-1、血管細胞粘附分子-1、E-選擇素。
[0007]本發明所述中藥可以被有相同或相似功效果的中藥代替，并且這些藥材均可以按照《全國中藥炮制規范》或《中藥大辭典》炮制。
[0008]所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成:
赤芍180-230份、黃芪280-330份、生地黃180-230份、蒲黃130-170份、女貞子180-230份、墨旱蓮180-230份、銀杏葉280-330份、大黃80-130份、三七80-130份、地龍80-130份、決明子280-330份、葛根180-230份。
[0009]優選地，所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成:
赤芍180份、黃芪33 0份、生地黃180份、蒲黃170份、女貞子180份、墨旱蓮230份、銀杏葉280份、大黃130份、三七80份、地龍130份、決明子280份、葛根230份。
[0010]或:
赤芍230份、黃芪280份、生地黃230份、蒲黃130份、女貞子230份、墨旱蓮180份、銀杏葉330份、大黃80份、三七130份、地龍80份、決明子330份、葛根180份。
[0011]或:
赤芍200份、黃芪300份、生地黃200份、蒲黃150份、女貞子200份、墨旱蓮200份、銀杏葉300份、大黃100份、三七100份、地龍100份、決明子300份、葛根200份。
[0012]或:
赤芍220份、黃芪290份、生地黃190份、蒲黃160份、女貞子220份、墨旱蓮190份、銀杏葉290份、大黃90份、三七90份、地龍120份、決明子320份、葛根220份。
[0013]本發明中藥組合物的制劑劑型為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑。
[0014]本發明中藥組合物膠囊劑的制備方法:
(1)、按比例稱取蒲黃，以4-8倍量60-80%乙醇為溶劑，先用適量溶劑浸潤藥材，密閉10-30分鐘后裝滲漉柱，加剩余溶劑浸泡20-36小時，滲漉，收集滲漉液，備用；
(2)、按比例稱取生地黃、地龍，第一次加8-10倍量水，浸泡10-30分鐘，加熱煎煮1-2小時,過濾；第二次加6-9倍量的水，煎煮1-2小時，過濾，濾液合并，濃縮至60°C熱測相對密度1.15-1.20，放冷，加適量乙醇使含醇量達50-70%，充分攪拌，冷藏20-36小時，過濾，濾液備用；
(3)、按比例稱取黃芪、赤芍，加6-10倍量40-60%乙醇，浸泡10-30分鐘，回流提取2_3次，每次1-3小時，過濾，濾液合并,備用；
(4)、按比例稱取女貞子、墨旱蓮、葛根、銀杏葉、大黃、決明子，加6-9倍量70-90%乙醇，浸泡10-30分鐘，回流提取1-3次，每次1-3小時，過濾，濾液合并，備用；
(5)、將步驟(1)、(2)、(3)和(4)所得提取液合并，減壓回收乙醇，繼續濃縮至60°C熱測相對密度為1.25-1.30的清膏；
(6)、按比例稱取三七，粉碎成100-120目粉，加入上述清膏中，攪拌均勻，真空干燥，干浸膏粉碎成80-120目粉，備用；
(7)、取干膏粉和淀粉，混和均勻，用70-90%乙醇為粘合劑制軟材，篩網制粒，整粒，裝膠囊，即得。[0015]本發明中藥組合物中，作為活性組分的原料藥的拉丁名及其加工方法來自《中藥大辭典》(1977年7月，第一版，上海科學技術出版社)和《中國藥典》(2005年版，化學工業出版社)。
[0016]本發明中藥組合物還可以按常規的制劑工藝，例如，范碧亭《中藥藥劑學》(上海科學出版社1997年12月第I版)記載的制備工藝，制成藥劑學可接受的任意常規劑型，例如膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑等。
[0017]本發明的應用中，所述中藥組合物的制劑劑型為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑，為使上述劑型能夠實現，需在制備這些劑型時加入藥學可接受的輔料，例如:填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質等。填充劑包括:淀粉、預膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括:淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括:硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括:糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括:甜味劑及各種香精；防腐劑包括:尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質包括:PEG6000，PEG4000，蟲蠟等。為使上述劑型能夠實現中藥藥劑學，需在制備這些劑型時加入藥學可接受的其它輔料(范碧亭《中藥藥劑學》，上海科學出版社1997年12月第I版中各劑型記載的輔料)。
[0018]試驗例一為闡明本發明中藥組合物治療細胞損傷的活性，用按實施例1方法所制得的藥物(以下稱本發明藥物)進行了下列試驗。
[0019]1、臨床資料
1.1診斷標準采用2005年中國成人細胞損傷防治指南標準進行分級。I級:坐位收縮壓(SBP) 140-159 mmHg，坐位舒張壓(DBP) 90-99mrnHg ;II 級:坐位 SBP160-179 mmHg,坐位DBP100- 109 mmHg JII級:坐位SBP≥180 mmHg，坐位DBP≥110 mmHg ;單純性收縮細胞損傷:坐位 SBP ^ 140 mmHg,坐位 DBP〈90 mmHg (ImmHg=0.1333kPa,下同)。
[0020]1.2中醫辨證標準參照《中藥新藥治療細胞損傷病的臨床研究指導原則》及《中醫病證診斷療效標準》。陰虛陽亢型表現為眩暈、頭痛、腰膝酸軟、耳鳴健忘、五心煩熱、心悸失目民，舌質紅、苔薄白或少苔，脈弦細數。
[0021]1.3細胞損傷病入選標準
輕、中度(1-1I級)原發性細胞損傷患者，初診發現未用藥或近一周未用降壓藥，排除繼發性細胞損傷；重度細胞損傷坐位DBP ^ 110 mmHg或SBP ^ 180 mmHg，心、肝、腎功能不全，血糖未控制者。
[0022]1.4病例選擇
110例患者隨機分為對照組和治療組，對照組54例，男30例，女24例，平均年齡52.3歲；治療組56例，男28例，女28例，平均年齡53.4歲。兩組比較，無顯著性差異，具有可比性。
[0023]2、方法
2.1治療方法
對照組:服用氨氯地平(輝瑞制藥有限公司生產)5mg/片，每日一次口服。治療組:在對照組基礎上加服本發明藥物，3-4粒/次，每日三次。
[0024]2.2測定指標
觀察治療前后血壓，臨床癥狀體征，血尿、糞常規及不良反應等。
[0025]2.3統計學方法:采用t檢驗，Ridit檢驗。
[0026]3、結果
3.1降壓療效標準
降壓療效標準參照《中藥新藥臨床研究指導原則》中細胞損傷評定療效標準。(I)顯效:坐位DBP下降≥10 mmHg并降至正常或SBP下降≥20mmHg ； (2)有效:坐位DBP下降雖未達到≥10 mmHg,但降至正常,或SBP下降10-19 mmHg ； (3)無效:未達到上述標準。
[0027]3.2總有效率結果(見表1)
【權利要求】
1.一種中藥組合物在制備治療細胞損傷藥物中的應用，其特征在于所述中藥組合物是由如下重量份比例的原料藥制成的: 赤芍180-230份、黃芪280-330份、生地黃180-230份、蒲黃130-170份、女貞子180-230份、墨旱蓮180-230份、銀杏葉280-330份、大黃80-130份、三七80-130份、地龍80-130份、決明子280-330份、葛根180-230份。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述中藥組合物是由如下重量份比例的原料藥制成: 赤芍180份、黃芪330份、生地黃180份、蒲黃170份、女貞子180份、墨旱蓮230份、銀杏葉280份、大黃130份、三七80份、地龍130份、決明子280份、葛根230份。
3.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述中藥組合物是由如下重量份比例的原料藥制成: 赤芍230份、黃芪280份、生地黃230份、蒲黃130份、女貞子230份、墨旱蓮180份、銀杏葉330份、大黃80份、三七130份、地龍80份、決明子330份、葛根180份。
4.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述中藥組合物是由如下重量份比例的原料藥制成: 赤芍200份、黃芪300份、生地黃200份、蒲黃150份、女貞子200份、墨旱蓮200份、銀杏葉300份、大黃100份、三七100份、地龍100份、決明子300份、葛根200份。
5.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述中藥組合物是由如下重量份比例的原料藥制成: 赤芍220份、黃芪290份、生地黃190份、蒲黃160份、女貞子220份、墨旱蓮190份、銀杏葉290份、大黃90份、三七90份、地龍120份、決明子320份、葛根220份。
6.根據權利要求1-5任一所述的應用，其特征在于所述中藥組合物的制劑劑型為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于所述膠囊劑的制備方法是由以下步驟組成: (1)、按比例稱取蒲黃，以4-8倍量60-80%乙醇為溶劑，先用適量溶劑浸潤藥材，密閉10-30分鐘后裝滲漉柱，加剩余溶劑浸泡20-36小時，滲漉，收集滲漉液，備用； (2)、按比例稱取生地黃、地龍，第一次加8-10倍量水，浸泡10-30分鐘，加熱煎煮1-2小時,過濾；第二次加6-9倍量的水，煎煮1-2小時，過濾，濾液合并，濃縮至60°C熱測相對密度1.15-1.20，放冷，加適量乙醇使含醇量達50-70%，充分攪拌，冷藏20-36小時，過濾，濾液備用； (3)、按比例稱取黃芪、赤芍，加6-10倍量40-60%乙醇，浸泡10-30分鐘，回流提取2_3次，每次1-3小時，過濾，濾液合并,備用； (4)、按比例稱取女貞子、墨旱蓮、葛根、銀杏葉、大黃、決明子，加6-9倍量70-90%乙醇，浸泡10-30分鐘，回流提取1-3次，每次1-3小時，過濾，濾液合并，備用； (5)、將步驟(1)、(2)、(3)和(4)所得提取液合并，減壓回收乙醇，繼續濃縮至60°C熱測相對密度為1.25-1.30的清膏； (6)、按比例稱取三七，粉碎成100-120目粉，加入上述清膏中，攪拌均勻，真空干燥，干浸膏粉碎成80-120目粉，備用；(7)、取干膏粉和淀粉，混和均勻，用70-90%乙醇為粘合劑制軟材，篩網制粒，整粒，裝膠囊，即得。
8.根據權利要求1-5任一項所述的應用，其特征在于，該中藥組合物在制備保護血管內皮細胞損傷的藥物中的應用。
9.根據權利要求1-5任一項所述的應用，其特征在于，該中藥組合物在制備降低糖尿病視網膜粘附分子粘附于血管引起的細胞損傷藥物中的應用。
10.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，該中藥組合物在制備降低糖尿病視網膜粘附分子-1 (ICAM-1)、血管細胞粘附分子-1 (VCAM-1)、E-選擇素(E-selectin)和核因子-K B (NF-kB)表達藥 物中的應用。
【文檔編號】A61K36/88GK103623137SQ201210304729
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2012年8月25日 優先權日:2012年8月25日
【發明者】張會欣, 高學東, 齊曉琳, 王宏濤, 許紅輝, 杜彥霞, 谷春華, 張永峰, 田野, 仁君霞, 孫利, 楊立波 申請人:石家莊以嶺藥業股份有限公司