專利名稱：一種適應玉米淀粉污水做培養基碳源的枯草芽孢桿菌篩選和可濕粉劑的生產方法
技術領域：
本發明屬于枯草芽孢桿菌菌種篩選和培養的技術領域，尤其涉及用玉米淀粉污水培養枯草芽孢桿菌的方法。
背景技術：
微生態制劑是利用正常微生物成員和促進物質制成的微生物制劑，其具有補充或充實微生態系群落的內涵，維持或調整微生態平衡的作用。作為一種天然的生物活菌及生物活性物質，因具有無毒副作用、無留污染及不產生抗藥性等優點而成為抗生素的替代品，并且越來越被人們所重視。微生態制劑與其他藥物不同，能起到“已病輔治、未病防病、無病保健”重要作用。我國農業部早在2003年就公布了能夠用于生產微生態制劑的芽孢桿菌屬菌種有枯草芽抱桿菌(Bacillussubtilis )、地衣芽抱桿菌(Bacilluslicheniformis )等。由枯草芽孢桿菌制備而成的微生態制劑具有如下優良特性:1)能調節動物腸道菌群平衡，改善腸道微生態環境，促進動物生長和提高抗病力。2)在不利環境條件下能以孢子形式存在，在飼料制粒、貯存及胃酸環境中仍能保持高活性。3)能刺激動物免疫器官的生長發育，激活淋巴細胞，提高免疫球蛋白和抗體水平，增強細胞免疫和體液免疫功能，提高機體免疫力。4)能自身合成消化性酶類，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纖維素酶等，與內源消化酶共同發揮作用，促進養分的消化吸收。5)能自身合成抗生素，抑制有害菌生長。傳統的枯草芽孢桿菌生產方法都要消耗大量的成品糖和淀粉等價格較高的工業產品，生產成本高。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術的不足，篩選一種適應玉米淀粉污水做培養基碳源的枯草芽孢桿菌菌株，以及用其培養枯草芽孢桿菌的新方法。不僅降低了生產成本，而且達到了環保的目的。該方法所產產品益生活力高、安全可靠、完全符合國家標準(醫藥級標準)。本發明提供的適應玉米淀粉污水做培養基碳源的枯草芽孢桿菌菌株為枯草芽孢桿菌心subti I is) XffJLSP-1,已于2012年8月28日在中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心保藏，保藏號為CGMCC N0.6478，
保藏地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號。本發明所述枯草芽孢桿菌{Bacillus sub tills ) XffJLSP-1的篩選、培養方法如下:
1、篩選用培養基
(1)富集用液體培養基:玉米淀粉過程污水10-15%、玉米漿1-15% (w/w)，NaCl10.0g/L，碳酸鈣粉 10-50g/L，pH 值 7.0 7.2，(2 )分離培養基:富集用液體培養基中加入2%瓊脂， (3 )生理生化鑒定培養基:參考《常見細菌鑒定手冊》
2、菌株的培養、分離、鑒定方法
(1)土壤溶液的制備
從西王玉米淀粉廠污水排出口附近、下水道內和西王污水處理廠爆氣池附近及污水處理廠內的草地、林地分別取了土樣。把上述土樣混合均勻后取IOg 土壤，放入盛90mL無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖約20min，使土樣與水充分混合，使細胞分散，待用。(2)菌種的分離
取土壤溶液煮沸IOmin 30in，然后取100 U L加入富集用液體培養基中，37 °C、200r/min振蕩培養15_20h。再取100 u L富集后的培養液加入富集用液體培養基中，37 °C、200r/min振蕩培養15_20h，這樣反復做2_10次。把最后一次富集培養液進行IO3-1O9倍梯度稀釋，用劃線分離法在分離培養基上分離芽孢桿菌，選取疑似菌落純化，斜面保藏，鑒定。( 3)菌種的鑒定
與同樣條件培養的標準枯草芽孢桿菌菌株比較，選擇菌落與標準枯草芽孢桿菌菌株干燥型菌落相近的菌株編號進行鏡檢，革蘭氏染色實驗，取桿狀、產芽孢革蘭氏陽性的菌落進行各項生化反應鑒定(參考《伯杰氏細菌鑒定手冊》和《微生物學實驗手冊》和《常見細菌鑒定手冊》進行)，得到鑒定結果，列表對比。
權利要求
1.一種適應淀粉污水做培養基碳源的枯草芽孢桿菌菌株(ifeciBys subtil is)XWJLSP-1，已于2012年8月28日在中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心保藏，保藏號為 CGMCC N0.6478。
2.如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌XWJLSP-1的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)培養基的制備: a.富集用液體培養基:玉米淀粉過程污水10-15%、玉米漿1-15%(w/w)及NaCl10.0g/L、碳酸鈣粉 10-50g/L，pH 值 7.0 7.2， b.分離培養基:含有2%瓊脂的富集用液體培養基a； (2)菌種的分離: a.取土壤溶液煮沸l(T30min，然后取IOOiiL加入富集用液體培養基中，振蕩培養15-20h ； b.取IOOul富集后的培養液加入富集用液體培養基中，振蕩培養15-20h，重復2-10次； c.將最后一次富集培養液IO3-1O9倍梯度稀釋，用劃線分離法在分離培養基上分離芽孢桿菌； d.選取分離得到的菌落純化、斜面保藏、鑒定。`
3.如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌XWJLSP-1的可濕粉劑的生產方法，其特征在于，操作步驟和工藝條件如下: (I)取淀粉污水10-15%、玉米漿0.5-1%、硫酸鎂0.5% (w/w)及碳酸鈣粉20g/L制成發酵培養基； (2)向培養基罐內通入無菌空氣，通氣量(VVm)為0.5-1.0，攪拌速度為100-300 r/min，培養溫度為32-39 V ； (3)培養15-20小時，當培養液中的菌體數量達到IX10 10 ml ―1以上后，加入發酵液10% (w/v)的填充材料，所述填充材料由硅藻土 90%、羧甲基纖維素10%構成； (4)將發酵液減壓蒸發到含水量為60%時，進行噴霧干燥得到成品枯草芽孢桿菌可濕粉制劑。
4.根據權利要求3所述的枯草芽孢桿菌XWJLSP-1的可濕粉劑的生產方法，其特征在于所說的發酵培養基中，淀粉污水含固量為5%-20%，玉米漿含量為5%-15%，硫酸鎂含量為2%-5% (w/w)0
全文摘要
本發明為一種適應淀粉污水做培養基碳源的枯草芽孢桿菌的篩選和可濕粉制劑的生產方法。本發明所篩選枯草芽孢桿菌菌株(Bacillussubtilis)XWJLSP-1，已于2012年8月28日在中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心保藏，保藏號為CGMCCNo.6478。本發明所述的枯草芽孢桿菌XWJLSP-1可濕粉制劑的生產方法為取淀粉污水、玉米漿、硫酸鎂及碳酸鈣粉制成發酵培養基；向培養基罐內通入無菌空氣發酵培養；當培養液中的菌體數量達到1×1010·ml-1以上后，加入由硅藻土、羧甲基纖維素構成填充材料，減壓蒸發到含水量為60%時進行噴霧干燥。
文檔編號A61P1/00GK103103148SQ20121054974
公開日2013年5月15日 申請日期2012年12月18日 優先權日2012年12月18日
發明者王棣, 王巖, 王方明, 李偉, 王一, 王居亮, 王茜, 王非 申請人:山東西王糖業有限公司