一種具有治療炎性腸病作用的復方組合物及其制備方法與應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種具有治療炎性腸病作用的復方組合物及其制備方法和應用，它是由黃蜀葵花10～50份、烏梅10～60份制成。本發明根據炎性腸病的發病機制，在中醫藥理論的指導下，辨證論治通過大量實驗篩選得到本發明的中藥組方，實驗結果表明，本發明提供的組合物能夠明顯抑制TNBS誘導的慢性結腸炎小鼠炎性腸病，能顯著降低長期給予TNBS引起的模型小鼠升高的死亡率、并能顯著降低結腸重量/長度比值；病理檢查結果表明本發明提供的復方組合物還能降低TNBS誘導所產生的腸道炎癥，限制病變嚴重程度，減輕隱窩損害，能明顯減輕TNBS誘導的炎性腸病。
【專利說明】一種具有治療炎性腸病作用的復方組合物及其制備方法與應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種中藥組合物，具體涉及一種具有治療炎性腸病作用的復方組合物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002]炎性腸病是一種特殊的慢性腸道炎癥性疾病，包括潰瘍性結腸炎和克羅恩病，臨床患者會表現為反復的腹痛、腹瀉、粘液血便，多數患者反復發作，遷延不愈，一方面它嚴重影響病人生活質量，另一方面它能使結直腸癌變風險增加，病程越長炎性程度越高癌變的可能性越大；其中UC能使癌變的風險增加約2.4倍；患者病程10年、20年和30年的癌變率分別為2%、8%和18%。同時，IBD相關的結直腸癌(colorectal cancer, CRC)具有年輕化、呈散播性和多灶性病變的特點，其病理學及發病機制均不同于散發性CRC ;“炎性腸病-異常增生-結直腸癌”是CRC發生的重要途徑。結直腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤，發生率僅次于胃癌和食道癌，目前我國結直腸癌的發病率呈上升趨勢，國內發病的上升速度約為4.8%遠遠超過國際水平2%，因此炎性腸病的治療及結直腸癌的防治受到國內外學者的普遍關注。
[0003]目前炎性腸病一線治療方法包括口服或直腸給予美沙拉嗪及前體藥物柳氮磺吡啶和巴柳氮等，柳氮磺吡啶雖然為治療UC的有效藥物,但對克羅恩病的療效存在爭議，同時約20%的患者因磺胺類過敏或不能耐受而停用；美沙拉嗪治療過程中也會發生白細胞下降、肝功能異常、皮疹及惡心、嘔吐等胃腸道副作用，且停藥后復發率高。其他的傳統治療炎性腸病的藥物皮質激素類、免疫抑制劑(硫唑嘌呤，環抱素A，甲氨蝶吟)等具有嚴重的毒副作用，限制了它們的應用。英夫利希是目前唯一證實能有效改善病程的新型生物制劑，但價格昂貴，只是適用于經濟條件好的患者，應用一年后也只有50%的緩解率。改善腸道炎性損傷能降低炎性腸病相關結直腸癌(colitis associated colorectalcarcinogenesis, CACC)的發生率。目前結直腸癌的治療原則是以手術切除為主的綜合治療，聯合化療放療等以提高患者生存率對于轉移擴散不能切除的結直腸癌主要采用化療聯合靶向治療和放療等方法來延長生存期和提高生存質量。目前用于結直腸癌治療的藥物主要有奧沙利鉬、氟尿嘧啶、伊立替康、葉酸和貝伐單抗等。然而結直腸癌根治術后五年生存率仍不足50%，晚期更是不到30%。因此，開發有效治療炎癥性腸病及防治結直腸癌的藥物具有重要意義和良好應用前景。
[0004]炎性腸病及結直腸癌患者經常會輔以中醫藥進行綜合治療。中醫采取辨證論治，局部與整體相結合，應用健脾益氣、活血化瘀、清熱解毒燥濕、澀腸止瀉等原則，對炎性腸病進行治療，臨床取得滿意的療效。黃蜀葵花為錦葵科秋葵屬植物黃蜀葵AbelmoschusManihot (L.)Medic的干燥花，是我國傳統的藥物。具有清熱利濕、消炎解毒之功效。烏梅為薔薇科落葉喬木植物梅Prunus mume的近成熟果實,經煙火熏制而成。具有“五止”功效，即止渴、止咳、止瀉、 止痛及止血功效。[0005]以黃蜀葵花和烏梅中藥飲片為原料制成用于治療炎性腸病的復方組合藥物及其制備方法，目前文獻中尚未有相關報道。
【發明內容】
[0006]發明目的:本發明的目的是為了解決現有技術的不足，提供一種具有治療炎性腸病作用的復方組合物，本發明另一個目的是提供復方組合物的制備方法及其應用。
[0007]技術方案:為了實現以上目的，本發明采取的技術方案為:
[0008]一種具有治療炎性腸病作用的復方組合物，其特征在于，它是由下列重量份數的原料制成:
[0009]黃蜀葵花10~50份、烏梅10~60份。
[0010]作為優選方案，以上所述的具有治療炎性腸病作用的復方組合物，它是由下列重量份數的原料制成:
[0011]黃蜀葵花10~20份、烏梅10~30份。
[0012]作為優選方案，以上所述的具有治療炎性腸病作用的復方組合物，它是由下列重量份數的原料制成 :
[0013]黃蜀葵花10份、烏梅12份。
[0014]本發明所述的具有治療炎性腸病作用的復方組合物，將各原料的提取物和藥學上可接受的載體制備成顆粒劑，片劑，膠囊劑或口服液制劑。
[0015]本發明所述的具有治療炎性腸病作用的復方組合物的制備方法，包括以下步驟:
[0016](I)首先按重量份數取烏梅，加入烏梅5~15倍量水，煎煮提取2~3次，每次I~3小時，合并煎液，濃縮至60°C時相對密度1.10，冷卻至室溫，加乙醇至含醇量達60%~90%，靜置12~24小時，濾過，濾液回收乙醇，得烏梅浸膏，備用；
[0017](2)按重量份數取黃蜀葵花，加黃蜀葵花5~15倍量乙醇，加熱回流提取2~3次，每次I~3小時,合并提取液,減壓回收乙醇,并繼續濃縮每Iml藥液相當于3g黃蜀葵花飲片量，室溫放置12~24小時，去除沉淀，得黃蜀葵花浸膏；
[0018](3)合并步驟(1)的烏梅浸膏和步驟(2)的黃蜀葵花浸膏和藥學上可接受的載體制備成顆粒劑，片劑，膠囊劑或口服液制劑。
[0019]本發明在制成片劑時把中藥提取物細粉添加載體乳糖或玉米淀粉，需要時加入潤滑劑硬脂酸鎂，混合均勻，然后壓片制成片劑。
[0020]本發明在制成膠囊劑時，把中藥提取物細粉添加載體乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，然后裝膠囊制成膠囊劑。
[0021]本發明在制成顆粒劑時，把中藥提取物細粉和稀釋劑乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，干燥，制成顆粒劑。
[0022]本發明所述的具有治療炎性腸病作用的復方組合物在制備炎性腸病藥物中的應用。
[0023]本發明所述的具有治療炎性腸病作用的復方組合物在制備炎性腸病藥物中的應用，所述的炎性腸病包括潰瘍性結腸炎或局限性腸炎。
[0024]有益效果:本發明提供的具有治療炎性腸病作用的復方組合物和現有技術相比具有以下優點:[0025](I)本發明提供的具有治療炎性腸病作用的復方組合物，根據炎性腸病的發病機制，在中醫藥理論的指導下，辨證論治通過大量實驗篩選得到本發明的中藥組方，實驗結果表明，本發明提供的組合物能夠明顯抑制TNBS誘導的慢性結腸炎小鼠炎性腸病，能顯著降低長期給予TNBS引起的模型小鼠升高的死亡率、并能顯著降低結腸重量/長度比值；病理檢查結果表明本發明提供的復方組合物還能降低TNBS誘導所產生的腸道炎癥，限制病變嚴重程度，減輕隱窩損害，能明顯減輕TNBS誘導的炎性腸病。
[0026](2)本發明提供的具有治療炎性腸病作用的復方組合物，可以方便和藥學載體制備成多種劑型，臨床上服用方便，且實驗結果表明本發明提供的組合物，療效可靠，使用安全，長期服用無毒副作用。
【專利附圖】
【附圖說明】 [0027]圖1為各組對TNBS誘導的慢性結腸炎小鼠死亡率的影響情況。
[0028]圖2為各組對TNBS誘導的慢性結腸炎小鼠結腸長度/重量比值的影響情況。
[0029]圖3為各組對TNBS誘導的慢性結腸炎小鼠結腸病理的影響情況。
【具體實施方式】
[0030]根據下述實施例，可以更好地理解本發明。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結果僅用于說明本發明，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本發明。
[0031]實施例1
[0032]1、一種具有治療炎性腸病作用的復方組合物，它是由下列重量份數的原料制成:
[0033]黃蜀葵花10份、烏梅20份。
[0034]2、具有治療炎性腸病作用的復方組合物的制備方法，包括以下步驟:
[0035](I)取烏梅20份，加10倍量水，煎煮提取3次，每次I小時。合并煎液,濃縮至相對密度1.11 (60°c測)，加乙醇至含醇量達60%，靜置24小時，濾取上清液，回收乙醇至盡，并濃縮至相對密度約1.30 (60°C)，得烏梅浸膏。
[0036](2)取黃蜀葵花10份，加15倍量乙醇，加熱回流提取3次，每次I小時。合并提取液，減壓回收乙醇，并繼續濃縮每Iml藥液相當于3g黃蜀葵花飲片量，室溫放置24小時，去除沉淀，得黃蜀葵花浸膏。
[0037](3)合并上述烏梅及黃蜀葵花浸膏，加入單糖漿，并加純化水至每ml相當飲片lg，分裝，滅菌，即得。
[0038]實施例2
[0039]1、一種具有治療炎性腸病作用的復方組合物，它是由下列重量份數的原料制成:
[0040]黃蜀葵花10份、烏梅12份。
[0041]2、具有治療炎性腸病作用的復方組合物的制備方法，包括以下步驟:
[0042](I)取烏梅12份，加10倍量水，煎煮提取2次，每次3小時。合并煎液，濃縮至相對密度1.12 (60°C測)，加乙醇至含醇量達70%，靜置24小時，濾取上清液，回收乙醇至盡，并濃縮至相對密度約1.30 (60°C)，得烏梅浸膏。
[0043](2)取黃蜀葵花10份，加10倍量乙醇，加熱回流提取2次，每次2小時。合并提取液，減壓回收乙醇，并繼續濃縮每Iml藥液相當于3g黃蜀葵花飲片量，室溫放置24小時，去除沉淀，得黃蜀葵花浸膏。
[0044](3)合并上述烏梅及黃蜀葵花浸膏，加入純化水至每ml相當飲片lg，分裝，滅菌，即得(合劑)。
[0045]實施例3
[0046]1、一種具有治療炎性腸病作用的復方組合物，它是由下列重量份數的原料制成:
[0047]黃蜀葵花20份、烏梅30份。
[0048]2、具有治療炎性腸病作用的復方組合物的制備方法，包括以下步驟:
[0049](I)取烏梅30份，加15倍量水，煎煮提取2次，每次3小時。合并煎液，濃縮至相對密度1.13 (60°C測)，加乙醇至含醇量達80%，靜置24小時，濾取上清液，回收乙醇至盡，并濃縮至相對密度約1.10 (60°C)，得烏梅浸膏。
[0050](2)取黃蜀葵花20份，加6倍量乙醇，加熱回流提取3次，每次I小時。合并提取液，減壓回收乙醇，并繼續濃縮每Iml藥液相當于3g黃蜀葵花飲片量，室溫放置24小時，去除沉淀，得黃蜀葵花浸膏。
[0051](3)合并上述烏梅及黃蜀葵花浸膏，充分混勻，加入適量糊精、阿斯巴甜，制粒，干燥，整粒，分裝，即得整粒劑。
[0052]實施例4
[0053]1、一種具有治療 炎性腸病作用的復方組合物，它是由下列重量份數的原料制成:
[0054]黃蜀葵花50份、烏梅60份。
[0055]2、具有治療炎性腸病作用的復方組合物的制備方法，包括以下步驟:
[0056](I)取烏梅60份，加12倍量水，煎煮提取2次，每次2小時。合并煎液，濃縮至相對密度1.10 (60°C測)，加乙醇至含醇量達90%，靜置24小時，濾取上清液，回收乙醇至盡，并濃縮至相對密度約1.32 (60°C)，得烏梅浸膏。
[0057](2)取黃蜀葵花50份，加8倍量乙醇，加熱回流提取2次，每次2小時。合并提取液，減壓回收乙醇，并繼續濃縮每Iml藥液相當于3g黃蜀葵花飲片量，室溫放置24小時，去除沉淀，得黃蜀葵花浸膏。
[0058](3)合并上述烏梅及黃蜀葵花浸膏，充分混勻，加入淀粉適量，制粒，干燥，過篩，加入適量助流劑，壓片，即得片劑。
[0059]實施例5
[0060]1、一種具有治療炎性腸病作用的復方組合物，它是由下列重量份數的原料制成:
[0061]黃蜀葵花20份、烏梅40份。
[0062]2、具有治療炎性腸病作用的復方組合物的制備方法，包括以下步驟:
[0063](I)取烏梅40份，加10倍量水，煎煮提取3次，每次I小時。合并煎液，濃縮至相對密度1.12 (60°C測)，加乙醇至含醇量達60%，靜置24小時，濾取上清液，回收乙醇至盡，并濃縮至相對密度約1.32 (60°C)，得烏梅浸膏。
[0064](2)取黃蜀葵花20份，加10倍量乙醇，加熱回流提取I次，每次3小時。合并提取液，減壓回收乙醇，并繼續濃縮每Iml藥液相當于3g黃蜀葵花飲片量，室溫放置24小時，去除沉淀，得黃蜀葵花浸膏。
[0065](3)合并上述烏梅及黃蜀葵花浸膏，充分混勻，加入適量淀粉，制粒，干燥，裝膠囊，即得膠囊劑。
[0066]實施例6對TNBS誘導的小鼠慢性結腸炎治療作用研究
[0067]1、材料與方法
[0068]1.1實驗用藥物及試劑
[0069]實驗用藥:本發明實施例2制備得到的復方組合物
[0070]Picylsulfonic acid solution (TNBS), sigma,批號:SLBD6811V
[0071]柳氮磺吡啶:上海中西三維藥業有限公司，批號:20130307
[0072]無水乙醇:上海實意化學試劑有限公司，批號:2010030102
[0073]1.2實驗動物及飼養
[0074]BABLc小鼠，18_22g，雌雄各半，由揚州大學比較醫學中心提供，合格證號:SCXK(蘇)2012-0004.[0075]全價營養顆粒飼料:由江蘇省協同醫藥生物技術有限公司提供
[0076]飼養條件:室溫20±2°C，濕度55-65%，明暗交替，光照適度，通風潔凈良好。
[0077]1.3實驗儀器
[0078]FA1004電子天平:上海精科天平廠
[0079]1.4實驗分組:分為對照組，模型組，本發明實施例2制備得到的復方組合物組:(6g/kg灌胃給藥)，柳氮磺吡啶組:(0.5g/kg灌胃給藥)。
[0080]2、實驗方法
[0081](I)TNBS誘導的小鼠慢性結腸炎造模方法。
[0082]小鼠于實驗前剃毛，皮膚外涂TNBS3.75mg[48%乙醇(V/V溶解)]，分別于外涂TNBS后的第7天、14天、21天直腸給予TNBS0.75mg、1.5mg、2.25mg[40%乙醇(V/V溶解)],
[0083](2)黃蜀葵花烏梅復方組合物對TNBS誘導的慢性結腸炎小鼠的治療作用。
[0084]采用上述方法造模，于皮膚外涂TNBS前復方組合物組和柳氮磺吡啶組分別灌胃給予6g/kg和0.5g/kg的實施例2復合組合物和柳氮磺吡啶，連續灌胃28天每天一次,記錄小鼠體重和死亡率，于實驗結束時處死小鼠，取血，取結直腸組織，測量長度和厚度、稱重。用10%中性福爾馬林固定，常規取材，脫水，石蠟包埋。切片經HE染色，光學顯微鏡觀察:
(1)腸壁炎癥的嚴重程度，記為I分，2分，3分，分別代表輕度，中度，重度炎癥；(2)病變嚴重程度，記為1分，2分，3分，即病變位于粘膜層，粘膜和粘膜下層，或透壁性損害；(3)隱窩損害程度，記為1分，2分，3分，4分。即1/3隱窩損害(輕度)，2/3隱窩損害(中度)，隱窩缺失、表面上皮完整，隱窩表面上皮都缺失。上述3項指標的打分再分別乘以病變區域所占比例(參與比例)為最后得分。無明顯病變記為O分，累加所有分數，得出總分，計算出每組每
只動物的均分(x±s),進行組間t檢驗。
[0085]3、統計學處理
[0086]實驗結果采用X±s表示，樣本統計分析采用獨立樣本t檢驗。
[0087]4、實驗結果
[0088]4.1各組對TNBS誘導的慢性結腸炎小鼠死亡率的影響如圖1所示，由圖1的實驗結果表明，常對照小鼠實驗過程中未出現死亡，模型組小鼠分別于第7天、第14天直腸給予TNBS后2-3天均出現動物死亡，28天動物存活率為35.7%，柳氮磺吡啶組于第9天和第10天出現動物死亡，28天動物存活率為60% ;本發明提供的黃蜀葵花烏梅復方組合物于第9天出現動物死亡，28天動物存活率為75%。表明本發明提供的黃蜀葵花烏梅復方組合物能夠明顯降低TNBS誘導的慢性結腸炎模型小鼠的死亡率，提高慢性結腸炎小鼠的存活率，效果優于柳氮磺吡啶組。
[0089]4.2黃蜀葵花烏梅復方組合物對TNBS誘導的慢性結腸炎小鼠結腸長度/重量比值的影響，如圖2所示，由圖2的黃蜀葵花烏梅復方組合物對TNBS誘導的慢性結腸炎小鼠結腸長度/重量比值的結果表明，TNBS誘導的慢性結腸炎小鼠結腸重量/長度的比值升高，與正常對照組比較有顯著性差異(P〈0.001);柳氮磺吡啶能顯著降低模型組小鼠升高的結腸重量/長度比值(P〈0.05);而本發明提供的黃蜀葵花烏梅復方組合物能顯著降低模型組小鼠升高的結腸重量/長度比值(P〈0.01)。表明黃蜀葵花烏梅復方組合物能降低TNBS誘導的慢性結腸炎模型小鼠升高的結腸重量/長度比值，顯示出很好的抗結腸炎的功效。
[0090]4.3黃蜀葵花烏梅復方組合物對TNBS誘導的慢性結腸炎小鼠結腸病理的影響如圖3所示，有圖3的實驗結果表明，正常對照組(圖3A)小鼠結腸未見明顯病變，結腸由粘膜層、粘膜下層、肌層和漿膜四層結構組成。粘膜層表被單層柱狀上皮，有多量杯狀細胞。肌層為平滑肌，漿膜單層扁平上皮。光鏡下各層次結構清楚，黏膜上皮細胞無變性、壞死，黏膜固有層無水腫或炎細胞浸潤。粘膜下層、肌層、漿膜層無充血、水腫，無炎細胞浸潤。
[0091]模型組(圖3B)小鼠結腸炎癥嚴重程度為輕度或中度，多數累及粘膜層和粘膜下層，個別的累及肌層。炎癥嚴重程度為中度，炎細胞類型主要為單核巨噬細胞和中性粒細胞及嗜酸性粒細胞。4只病變局限于粘膜層，2只達粘膜下層，I只超過粘膜下層、深入肌層和漿膜層。隱窩損害:1只粘膜全層壞死，壞死處隱窩消失，表面上皮缺失，形成潰瘍。2只隱窩缺失、表面上皮尚可見。5只有2/3或1/3隱窩損害。
[0092]柳氮磺吡啶組(圖3 C)結腸炎癥較模型組明顯減輕炎癥嚴重程度:輕度或中度炎癥各4只，炎細胞類型同模型組。病變嚴重程度:2只病變深及粘膜下層，6只局限于粘膜層。隱窩損害:2只隱窩輕度損害，6只無損害。
[0093]黃蜀葵花烏梅復方組合物(圖3D)結腸炎癥較模型組明顯減輕，輕度炎癥7只，I只無明顯炎癥。炎細胞類型同前，病變均局限于粘膜層，均無隱窩損害。
[0094]病理評分結果(圖3E)，實驗結果表明:TNBS誘導的慢性結腸炎小鼠病理評分升高，與正常對照組比較有顯著性差異(P〈0.05);柳氮磺吡啶能顯著降低模型組小鼠結腸炎癥的病理評分(P〈0.05);本發明實施例2制備得到的黃蜀葵花烏梅復方組合物能顯著降低模型組小鼠結腸炎癥的病理評分(P〈0.05)。表明本發明提供的黃蜀葵花烏梅復方組合物能顯著降低TNBS誘導的慢性結腸炎模型小鼠的病理評分。
[0095]由以上實驗結果表明，本發明提供的黃蜀葵花烏梅復方組合物能降低TNBS誘導的慢性結腸炎模型小鼠的死亡率，能顯著降低TNBS誘導的慢性結腸炎模型小鼠升高的結腸重量/長度比值，能顯著降低TNBS誘導的慢性結腸炎模型小鼠的病理評分，表明本發明提供的黃蜀葵花烏梅復方組合物能明顯減輕TNBS誘導的炎性腸病。
[0096]以上實施方式只為說明本發明的技術構思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術的人了解本
【發明內容】
并加以實施，并不能以此限制本發明的保護范圍，凡根據本發明精神實質所做的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發明的保護范圍內。
【權利要求】
1.一種具有治療炎性腸病作用的復方組合物，其特征在于，它是由下列重量份數的原料制成: 黃蜀葵花10~50份、烏梅10~60份。
2.根據權利要求1所述的具有治療炎性腸病作用的復方組合物，其特征在于，它是由下列重量份數的原料制成: 黃蜀葵花10~20份、烏梅10~30份。
3.根據權利要求1所述的具有治療炎性腸病作用的復方組合物，其特征在于，它是由下列重量份數的原料制成: 黃蜀葵花10份、烏梅12份。
4.根據權利要求1至3任一項所述的具有治療炎性腸病作用的復方組合物，其特征在于，將各原料的提取物和藥學上可接受的載體制備成顆粒劑，片劑，膠囊劑或口服液制劑。
5.權利要求1至3任一項所述的具有治療炎性腸病作用的復方組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)首先按權利要求1至3所述的重量份數取烏梅，加入烏梅5~15倍量水，煎煮提取2^3次，每次I~3小時，合并煎液，濃縮至60°C時相對密度1.10，冷卻至室溫，加乙醇至含醇量達60%~90%，靜置12~24小時，濾過，濾液回收乙醇，得烏梅浸膏，備用； (2)按權利要求1至3所述的重量份數取黃蜀葵花，加黃蜀葵花5~15倍量乙醇，加熱回流提取2~3次，每次I~3小時，合并提取液，減壓回收乙醇，并繼續濃縮每Iml藥液相當于3g黃蜀葵花飲片量，室溫放置12~24小時，去除沉淀，得黃蜀葵花浸膏； (3)合并步驟(1)的烏梅浸膏和步驟(2)的黃蜀葵花浸膏和藥學上可接受的載體制備成顆粒劑，片劑，膠囊劑或口服液制劑。
6.權利要求1至3所述的具有治療炎性腸病作用的復方組合物在制備炎性腸病藥物中的應用。
7.根據權利要求6所述的具有治療炎性腸病作用的復方組合物在制備炎性腸病藥物中的應用，其特征在于，所述的炎性腸病包括潰瘍性結腸炎或局限性腸炎。
【文檔編號】A61P1/04GK103599216SQ201310643618
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年12月3日 優先權日:2013年12月3日
【發明者】陳玉根, 楊柏霖, 劉志輝, 王瓊, 周錦勇, 周青 申請人:江蘇省中醫院