厄貝沙坦在預防和治療乙型肝炎病毒感染疾病中的新用途
【專利摘要】本發明涉及化合物2-丁基-3-[4-[2-(1H-四唑-5-基)苯基]芐基]-1，3-二氮雜螺-[4.4]壬-1-烯-4-酮(厄貝沙坦，Irbesartan，CAS號138402-11-6，結構式見圖1)的一種醫藥新用途，具體地說，本發明涉及厄貝沙坦及其藥物組合物在預防和治療乙型肝炎病毒(hepatitis?B?virus，HBV)感染疾病中的新用途。本發明利用過表達人NTCP分子的HepG2穩定轉染單克隆細胞株發現厄貝沙坦可以顯著抑制HBV感染肝細胞，從而為抗HBV感染提供了一種新藥物。因此，本發明涉及的厄貝沙坦及其藥物組合物有望成為治療HBV感染相關疾病的新型治療藥物和手段。
【專利說明】厄貝沙坦在預防和治療乙型肝炎病毒感染疾病中的新用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及醫藥【技術領域】，具體地說，本發明涉及厄貝沙坦及其藥物組合物在預防和治療乙型肝炎病毒(h印atitis B virus, HBV)感染疾病中的新用途。
【背景技術】
[0002]HBV感染是當前威脅人類健康嚴重的傳染病之一，與HBV感染相關的肝衰竭、肝硬化和原發性肝細胞癌每年約導致100多萬人死亡。我國是HBV感染大國屬于高流行區，HBV感染不僅危害我國人民的健康，給患者及其家庭造成巨大的經濟和精神負擔，而且給國家造成了巨大的勞動力和經濟損失，乃至導致嚴重的就業等社會問題。目前臨床有效的治療HBV藥物主要包括干擾素和核苷類藥物。干擾素治愈率有限，副作用較多，，核苷類藥物存在容易引起HBV突變耐藥和停藥后易復發，因此新型抗HBV藥物的研發具有重要的社會和經濟價值。
[0003]厄貝沙坦是一種臨床廣泛應用于高血壓和II型糖尿病治療的藥物，其安全性已經得到了廣泛驗證。本研究應用自主構建的NTCP分子HepG2穩轉單克隆細胞株發現厄貝沙坦可以有效抑制HBV感染肝細胞，與目前核苷類藥物作用機制不同，其作用機制主要體現在抑制HBV進入肝細胞，從而為抗HBV治療提供了一種潛在的新型治療藥物。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于發現了厄貝沙坦在治療HBV感染中的新用途，具體地說，本發明涉及厄貝沙坦及其藥物組合在制備治療HBV感染引起的相關疾病的藥物中的應用。
[0005]本發明還涉及包含厄貝沙坦的藥物組合，已達到防止病毒變異引起的逃逸并提高病毒抑制效果的目的。
[0006]本發明的實施對嚴重危害人類健康的乙型肝炎及其相關疾病的治療具有重要的社會效益和經濟效益。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0007]為了更好的理解本發明的實質，下面將結合附圖來對本發明進行更詳細的說明。
[0008]圖1為厄貝沙坦化學結構式。
[0009]圖2顯示了厄貝沙坦抑制HBV感染HepG2.N9細胞后HBcAg的免疫熒光結果。
[0010]圖3顯示了厄貝沙坦抑制HBV感染HepG2.N9細胞后HBeAg的表達情況。
[0011]圖4顯示了厄貝沙坦抑制IfepG2.N9細胞生長活性的毒性結果。
【具體實施方式】
[0012]本發明涉及厄貝沙坦在預防和治療乙型肝炎病毒感染疾病中的新用途，以下通過實例對本發明做進一步的詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實例僅僅用于解釋本發明，除非特別說明， 本發明的術語具有本領域通常使用的含義。[0013]實施例一厄貝沙坦抑制HBV感染實驗
[0014]材料與方法
[0015]1.細胞培養
[0016]所用細胞為肝癌細胞H印G2的人NTCP分子穩定轉染細胞H印G2.N9，用含10%胎牛血清(FBS，Gibco)的MEM細胞培養液37°C、5% C02條件下培養。
[0017]2.HBV病毒為Ad38細胞上清PEG濃縮液，保存于_80°C。
[0018]3.病毒感染
[0019]感染前2h，HBV感染多肽抑制劑m47F(200nM)、小分子陽性對照Ezetimibe (50uM)、厄貝沙坦(50 μ M用于HBcAg免疫熒光實驗，3、10、30和100 μ M用于HBeAg梯度抑制實驗)預先與H印G2.Ν9細胞孕育2h，然后在相應藥物濃度和5% PEG8000的條件下進行HBV感染，
[0020]MOI為200，感染后培養于含1.5% DMSO的William E培養基。
[0021]4.HBcAg 免疫熒光
[0022]感染后第10天進行免疫突光實驗,按免疫突光通用流程進行，HBcAg多抗為Dako公司產品，抗兔二抗為life technology公司產品,共聚焦顯微鏡拍攝。
[0023]5.HBeAg 檢測
[0024]感染后每2天換一次液，收集第8-10天細胞培養液，按照HBeAg ELISA檢測試劑盒(上海科華生物工程股份有限公司)說明書操作`步驟檢測。
[0025]實施例二厄貝沙坦細胞毒性實驗
[0026]1.細胞培養
[0027]所用細胞為肝癌細胞H印G2的NTCP分子穩定轉染細胞H印G2.N9，用含10%胎牛血清(FBS，Gibco)的MEM細胞培養液37°C、5% C02條件下培養。
[0028]2.CCK8 實驗
[0029]厄貝沙坦在相應濃度作用H印G2.N9細胞24h后換液，72h后按照CCK-8說明書檢測厄貝沙坦的細胞毒性，細胞加入CCK-8后于37°C孵育箱中孵育0.5~lh，酶標儀上檢測450nm處吸光度。
【權利要求】
1.化合物2-丁基-3-[4-[2-(1H-四唑-5-基)苯基]芐基]_1，3-二氮雜螺-[4.4]壬-1-烯-4-酮(厄貝沙坦，Irbesartan)用于預防和治療乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus, HBV)感染的新用途。
2.根據權利要求1所述的化合物厄貝沙坦包含其藥物制劑上可接受的衍生物。
3.—種藥物組合物，其特征在于含有權利要求1和權利要求2所述的厄貝沙坦及其藥物制劑上可接受的衍生物。
4.根據權利要求1、權利要求2和權利要求3所述的厄貝沙坦及其藥物組合物，其特征在于所述厄貝沙坦有效預防和治療劑量的范圍是每kg體重0.1mg至20mg,優選劑量范圍是每kg體重Img至10mg。
【文檔編號】A61K31/4184GK103638019SQ201310646579
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年12月6日 優先權日:2013年12月6日
【發明者】王升啟, 王學軍, 胡偉, 張婷玉 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所