β羥基丁酸在治療安非它明類精神藥物成癮中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供了β羥基丁酸在治療安非它明類精神藥物成癮中的應用。本發明經藥理學和行為學實驗證實，β羥基丁酸促進安非它明類精神藥物成癮消退，并減少安非它明類精神藥物成癮重現的發生。
【專利說明】β羥基丁酸在治療安非它明類精神藥物成癮中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及β羥基丁酸的應用，具體涉及β羥基丁酸在安非它明類藥物成癮治療中的應用。
【背景技術】
[0002]上世紀90年代以來，安非它明類中樞興奮劑濫用增長迅速，聯合國禁毒署公布安非它明類中樞興奮劑是最廣泛的毒品，如冰毒、搖頭丸等。給個人、家庭和社會帶來巨大危害。
[0003]安非它明類中樞興奮劑成癮是慢性、復發性腦病，其精神依賴性非常嚴重，其核心特征是對藥物強烈的渴求感，以及在渴求感的驅使下，形成強迫性藥物尋覓和使用行為。學習記憶在安非它明類藥物成癮及復發過程中占重要地位。成癮患者一旦來到與以前接受藥物有關環境中(人、地點或其他與藥物有關的暗示)就會表現出對藥物強烈的渴求感和覓藥行為。致依賴性藥物所導致的成癮記憶十分深刻，甚至在戒斷若干年后，再接觸與成癮有關的暗示(如人、物、與過去用藥有關的環境等)都可以誘發復吸。
[0004]因此，安非它明成癮治療中迫切需要能促使成癮消退，使患者回歸正常社會，避免復發的治療方案。β羥基丁酸是機體能量代謝中間產物，在持續運動和禁食饑餓狀態下的重要能源物質。饑餓狀態下，肝臟增強脂肪酸代謝，血中β羥基丁酸升高至1-2 mM，長時間禁食，升高至6-8 mM以上。本發明人在研究中發現，β羥基丁酸在安非它明類精神藥物成癮治療中的作用。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是公開β羥基丁酸的一種新用途。
[0006]具體的說，本發明提供了 β羥基丁酸在治療安非它明類興奮劑成癮中的應用，即β羥基丁酸能促進安非它明類成癮消退，并減少成癮重現的發生。
[0007]本發明公開了 β羥基丁酸在治療安非它明類興奮劑成癮中的用途。
[0008]本發明所述的成癮指與成癮有關的行為，主要包括強迫性覓藥和用藥，在動物模型中通常表現為條件位置偏愛(conditioned place preference, CPP)。
[0009]本發明所述的β羥基丁酸在治療安非它明類興奮劑精神藥物成癮中的應用，其特征在于β羥基丁酸促進安非它明類精神藥物成癮消退。
[0010]本發明所述的β羥基丁酸在治療安非它明類興奮劑精神藥物成癮中的應用，其特征在于β羥基丁酸減少安非它明類精神藥物成癮行為消退后重建。
[0011]本發明所述的 安非它明類藥物為安非它明(Amphetamine, A)、甲基安非它明(Methamphetamine, MA)、搖頭丸、冰毒等社會常見毒品。
[0012]本發明所述的藥物β羥基丁酸通過市售得到。
[0013]本發明通過動物行為學實驗，采用條件位置偏愛(CPP)來判斷安非它明類精神藥物成癮獲得、消退、重建，以進行成癮研究。[0014]本發明所述的β羥基丁酸在治療安非它明類興奮劑精神藥物成癮中的應用，β羥基丁酸的有效劑量范圍為100-2000 mg/kg，最佳劑量范圍為300-600 mg/kg。
[0015]本發明研究了 β羥基丁酸在安非它明類成癮行為消退中的作用，結果發現β羥基丁酸促進安非它明類成癮小鼠條件位置偏愛的消退。
[0016]本發明研究了 β羥基丁酸在安非它明類成癮消退后重建中的作用，結果發現β羥基丁酸減少安非它明類成癮小鼠成癮消退后的重建。
[0017]本發明研究了 β羥基丁酸的成癮性，結果表明β羥基丁酸(100-2000 mg/kg)本身并不引起條件性位置偏愛，也不產生條件性的厭惡效應，不具有成癮性。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0018]圖1是甲基安非它明CPP建立流程示意圖。其中MA為甲基安非它明，NS為生理鹽水。
[0019]圖2是甲基安非它明誘導CPP建立結果。其中MA為甲基安非它明，β-OHB為β羥基丁酸。
[0020]圖3是非限制性消退實驗流程圖。其中MA為甲基安非它明，NS為生理鹽水，β-OHB為β羥基丁酸。
[0021]圖4是在甲基安非它明成癮一消退操作中，β羥基丁酸促進CPP非限制性消退結果O
[0022]圖5是限制性消退實驗流程圖。其中MA為甲基安非它明，NS為生理鹽水，β -OHB為β羥基丁酸。
[0023]圖6是在甲基安非它明成癮一消退操作中，β羥基丁酸促進CPP限制性消退結果。
[0024]圖7是消退后重建實驗流程圖。其中MA為甲基安非它明，NS為生理鹽水，β -OHB為β羥基丁酸。
[0025]圖8是在甲基安非它明成癮一消退一重建操作中，β羥基丁酸減少消退后重建結果。其中A圖表示經4次重復的限制性消退程序，小鼠CPP完全消退。B圖顯示重建Test3結果，消退期β羥基丁酸使用明顯減少偏愛重建。
[0026]圖9是安非它明誘導CPP建立結果。
[0027]圖10是在安非它明成癮一消退操作中，β羥基丁酸促進CPP非限制性消退結果。
[0028]圖11是在安非它明成癮一消退操作中，β羥基丁酸促進了 CPP限制性消退結果。
[0029]圖12是在安非它明成癮一消退一重建操作中，β羥基丁酸減少消退后重建結果。其中A圖表示經4次重復的限制性消退程序，小鼠CPP完全消退；Β圖顯示重建Test 3結果，消退期β羥基丁酸使用明顯減少偏愛重建。
【具體實施方式】
[0030]以下通過實施例進一步描述本發明，應該理解的是，這些實施例僅用于例證的目的，不限制本發明的范圍。
[0031]本發明實施例中所使用的甲基安非它明(MA)和安非它明(A)為標準品，購自中國藥品檢定所羥基丁酸購自TOKYO CHEMICAL INDUSTRY CO。
[0032]本實施例中所使用的CPP實驗系統為紅外視頻跟蹤-計算機自動分析的條件位置偏愛黑白箱實驗系統(上海移數信息科技有限公司型號:RD1111-CPP-M-4)。
[0033]計量資料以均數土標準差表示，應用SPSS16.0軟件進行方差分析，p〈0.05為有顯著性差異，圖中用*標識。
[0034]實施例1:甲基安非它明誘導的條件位置偏愛(CPP)形成
小鼠分層隨機分為4組,生理鹽水組、MA paired組、MA無關環境組和β -OHB paired組，每組8只小鼠。只是在CPP建立訓練時，四組處理不同，其余相同。甲基安非它明誘導條件位置偏愛(CPP)實驗流程見圖1。
1)天然偏愛測試:實驗前三天(dl、d2、d3)，每天8:30左右，先將實驗動物(每亞組小鼠4只同籠)運送至CPP裝置測試室，開啟CPP裝置，打開CPP穿梭盒中間通道型隔板，將小鼠(頭朝向白盒)輕柔放置兩盒交界處，讓其在兩盒內自由活動15分鐘，并于d3測試攝錄活動情況，由電腦輔助系統紀錄各小鼠在每個盒子中的停留時間，即記錄偏愛基礎值t black(秒)、t white (秒)分析其天然偏愛情況。根據天然偏愛測試結果確定小鼠的天然偏愛箱。記錄各小鼠的CPP基礎值,即TO =非天然偏愛盒時間-天然偏愛盒時間。
2)CPP建立:
MA paired 組
訓練:根據天然偏愛結果以及相關文獻，天然偏愛盒不易建立CPP，故選擇非偏愛盒作為甲基安非它明伴藥盒，進行條件化訓練。訓練期間采用封閉型隔板，將穿梭盒分隔成兩個獨立的盒子，甲基安非它明處理(MA paired)小鼠在d4、d6, d8腹腔注射lmg/kg的鹽酸甲基安非它明后放置非偏愛盒訓練30分鐘；d5、d7，d9腹腔注射0.2ml/10g生理鹽水后放置自然偏愛盒訓練30分鐘。
生理鹽水組小鼠6天內均給 予生理鹽水，其它處理訓練同MA paired實驗組小鼠。甲基安非它明無關環境組小鼠，d4-9，均在所設無關環境內處置，并不放入CPP裝置，給藥同MA-paired 組。β-OHB paired 組 β-OHB 劑量為 300 mg/kg,其處理訓練同 MA-paired 實驗組。
偏愛測試:實驗dlO，開啟CPP裝置，打開CPP穿梭盒中間通道型隔板，將小鼠(頭朝向白盒)輕柔放置兩盒交界處，讓其在兩盒內自由活動15 min，由電腦輔助系統紀錄各小鼠在每個盒子中的停留時間，記錄CPP測試值t black (秒)、t white (秒),取其值為Tl,為非天然偏愛盒時間_天然偏愛盒時間的差。
CPP結果計算:
為了減少系統誤差，平衡實驗各因素，CPP值定義為:測試值-基礎值，即:Τ (η)(非天然偏愛盒時間[即伴藥側]-天然偏愛盒時間)-TO (非天然偏愛盒時間-天然偏愛盒時間)。
3)MA paired組建立對伴藥箱的偏愛。見附圖2。
與生理鹽水對照組和無關環境組相比，MA-paired組建立對伴藥箱的偏愛，差異有顯著性意義。而β-OHB本身并不引起條件性位置偏愛，也不產生條件性的厭惡效應，不具有成癮性。
在實施例1中確定了小鼠形成CPP的實驗方案。實施例2 — 4以MA paired組的實驗流程先建立CPP，此基礎上進行消退和重建實驗研究。
[0035]實施例2:甲基安非它明成癮非限制性消退實驗小鼠分2組，β羥基丁酸組和生理鹽水組，每組8只。
DDl-1O同實施例1 1 ）~2)中的MA paired組，進行天然偏愛(Test 0)、CPP訓練和偏愛測試(Test I)。
2) D10-17:每天接受15 min偏愛測試(test 1-test 8),并與每次偏愛測試后,按分組立即給予①β羥基丁酸注射(100 mg/kg,腹腔注射)，或②蒸餾水注射(0.2 ml/10g，腹腔注射)，注射后放入home cage。
本實施例有10次測試結果Test 0，1，2，3，4，5，6，7，8。
4)結果顯示:甲基安非它明成癮一非限制性消退操作中，非限制性消退期使用β羥基丁酸促進CPP消退。見圖4。
[0036]實施例3:甲基安非它明成癮限制性消退實驗
小鼠分2組，β羥基丁酸組和生理鹽水組。每組8只。限制性消退實驗流程見圖5。OD1-9同實施例1 I)~2)中的MA-paired組，進行天然偏愛(Test O)、CPP訓練和偏愛測試(Test I)。
2)Dll-12為限制性消退期。
Dll,動物限制在MA-paired側3 min,然后立即，β羥基丁酸組給予100 mg/kg β輕基丁酸，生理鹽水組給生理鹽水；
D12,動物限制在MA-unpaired側3 mi n,然后立即，2組均給生理鹽水。
3)D13，進行偏愛測試(Test 2)。
本實施例有3次測試結果Test 0,l,2o
4)結果顯示:甲基安非它明成癮一限制性消退操作中，限制性消退期使用β羥基丁酸促進CPP消退。見圖6。
[0037]實施例4:甲基安非它明成癮消退后重建實驗
小鼠分2組，β羥基丁酸組和生理鹽水組。①β羥基丁酸組注射(100 mg/kg, ip)②蒸餾水注射(0.2 ml/10g)。每組8只。消退后重建實驗流程見圖7。
OD1-9同實施例1 I 2)中的MA paired組，進行天然偏愛(Test O)、CPP訓練和偏愛測試(Test I)。
2)Dll-18為限制性消退期。
D11，動物限制在MA伴藥側3 min，然后β羥基丁酸組給予β羥基丁酸100 mg/kg，生理鹽水組給生理鹽水；D12，動物限制在MA非伴藥側3 min，然后2亞組均給生理鹽水；D13-18:再重復 Dll-12，3 次；
3)D19:進行偏愛測試(Test 2)。
4)D20:Test 2 后 24 小時，進行重建試驗 reinstatement test (Test 3)。即給予 MA(0.2 mg/kg)立即進行偏愛測試。
本實施例有有4次測試結果Test 0,l,2,3o
5)結果顯示:在甲基安非它明成癮一消退一重建操作中，β羥基丁酸組減少消退后的重建。見圖8，其中A圖表示經4次重復的限制性消退程序，小鼠CPP完全消退。B圖顯示重建Test 3結果，消退期β羥基丁酸使用明顯減少偏愛重建。
[0038]實施例5: β羥基丁酸對安非它明成癮消退和重建的影響
同實施例1-4實驗步驟，研究β羥基丁酸對安非它明(A)成癮消退和重建的影響。安非它明誘導小鼠CPP的劑量為I mg/kg，重建試驗中安非它明劑量為0.2 mg/kg。
O安非它明誘導的條件位置偏愛(CPP)形成，操作流程同實施例1，其中MA組在本實驗中為安非它明(A)組。安非它明劑量為I mg/kg。結果顯示與生理鹽水對照組和無關環境組相比，A paired組建立對伴藥箱的偏愛，差異有顯著性意義，見圖9。
2)安非它明成癮非限制性消退，操作流程同實施例2，其中誘導小鼠CPP的藥物為安非它明。結果顯示:在安非它明成癮一非限制性消退操作中，非限制性消退期使用β羥基丁酸促進CPP消退。見圖10。
3)安非它明成癮限制性消退，操作流程同實施例3，其中誘導小鼠CPP的藥物為安非它明。結果顯示:在安非它明成癮一限制性消退操作中，限制性消退期使用β羥基丁酸促進CPP消退。見圖11。
4)安非它明成癮消退后重建，操作流程同實施例4，其中誘導小鼠CPP的藥物為安非它明。進行消退后重建試驗時給予安非它明的劑量為0.2 mg/kg。結果顯示:在安非它明成癮一消退一重建操作中，β羥基丁酸組減少成癮消退后的重建。見圖12，其中A圖表示經4次重復的限制性消退程序，小鼠CPP完全消退。B圖顯示重建Test 3結果，消退期β羥基丁酸使用明顯減少偏愛重建。
【權利要求】
1.β羥基丁酸在治療安非它明類興奮劑精神藥物成癮中的應用。
2.權利要求1所述的β羥基丁酸在治療安非它明類興奮劑精神藥物成癮中的應用，其特征在于β羥基丁酸促進安非它明類精神藥物成癮消退。
3.權利要求1所述的β羥基丁酸在治療安非它明類興奮劑精神藥物成癮中的應用，其特征在于β羥基丁酸減少安`非它明類精神藥物成癮行為消退后重建。
【文檔編號】A61P25/30GK103860534SQ201410048807
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年2月12日 優先權日:2014年2月12日
【發明者】趙營, 翟德勝, 王守英, 陳志國, 谷爭, 楊云雷, 張瑞嶺, 李嵩箕, 周度爽, 趙二奇, 何歡歡, 侯田田 申請人:新鄉醫學院