一種中藥組合物、其提取物及應用的制作方法
【專利摘要】本發明一種中藥組合物、其提取物及應用，屬于中醫藥【技術領域】。所述中藥組合物由青龍衣和淫羊藿按重量比1:1組成。中藥組合物的提取物是通過將重量比1:1的青龍衣與淫羊藿加水浸泡后回流提取2次，合并濾液后減壓濃縮干燥即得浸膏粉末。本發明還公開了所述中藥組合物及其提取物在制備治療肝癌藥物中的應用。本發明具有配制簡單，療效好，無副作用，安全性高，有利于患者及時減輕病狀，并且優于青龍衣與刺五加藥材組合對肝癌的治療，具有良好的開發前景及社會和經濟效益的優點。
【專利說明】一種中藥組合物、其提取物及應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于中醫藥【技術領域】，具體涉及一種中藥組合物、其提取物及應用。
【背景技術】
[0002] 隨著環境污染的日益嚴重，人們受病毒、化學因素（亞硝酸、黃曲霉素、農藥）、物 理因素（電離輻射、紫外線）等的影響，癌癥的發病率和死亡率都呈逐漸增加趨勢。其中， 原發性肝癌（primary hepatic carcinoma, PHC)簡稱肝癌（hepatoma),是指原發于肝細胞 或肝內膽管上皮細胞的惡性腫瘤，是最常見的惡性腫瘤之一，被稱為"腫瘤之王"。我國為原 發性肝癌高發區，起病隱匿，潛伏期長，惡性度高，生存期短，生存質量差，且治療棘手。若不 能早期發現并徹底手術切除，肝癌患者的總體5年生存率不超過5%。目前，肝癌的治療方 法有手術、放療、化療和介入治療。這些治療手段不僅價格昂貴，而且治療過程常給患者帶 來巨大的痛苦。因此，尋找高效、安全、經濟的抗腫瘤藥物也成為醫藥學者的重要課題。
[0003] 近年來，中醫藥在肝癌的治療中發揮著不可替代的作用。大量藥理實驗證明，中 藥復方如活血軟堅解毒方、"晚癌康2號"、仙蘆抗癌膠囊、蟾酥膠等，及單味中藥如龍葵、三 棱、姜黃、莪術等，具有直接抗肝癌作用。同時，已有臨床療效觀察研究表明，中醫藥治療肝 癌的優勢一方面在于能有效穩定病情，減輕毒副作用，改善臨床癥狀，延長患者帶瘤生存時 間，使部分患者腫瘤縮小；另一方面治療費用相對低廉。因此，中醫藥治療成為肝癌治療中 不可或缺的重要組成部分。
【發明內容】
[0004] 青龍衣（Pericarpium Juglandis)為胡桃科胡桃屬植物核桃楸（Juglans mandshurica Maxim.)和核桃（Juglans regia L.)未成熟的外果皮。該藥始載于《開寶本 草》，稱其為胡桃青龍，《救急方》中則稱之為青胡桃皮，自《山東中草藥手冊》稱之為"青龍 衣"后，現多延用此名稱。主產于河北、山東、東北等地，為民間常用中藥。古代諸家多以其 清熱解毒、祛風療癬、止痛止痢等功效入藥。現代研究表明，青龍衣在臨床應用廣泛，可用于 治療足部臭汗證、銀屑病以及多種癌癥等。
[0005] 淫羊藿又名仙靈脾、羊藿葉等，為小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.、箭葉淫羊藿 Epimedium sagittatum(Sieb. et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿 Epimedium pubescens. Maxim.或朝鮮淫羊藿 Epimedium koreanum Nakai 的干燥葉。李時 珍在《本草綱目》中稱其"益精氣、堅筋骨、補腰膝、強心力"之功效。現代藥理實驗研究表 明，淫羊藿能增加心腦血管血流量，促進造血功能、免疫功能及骨代謝，具有抗衰老、抗腫瘤 等功效。
[0006] 本發明的目的在于公開了一種中藥組合物。
[0007] 本發明的第二個目的在于公開了上述中藥組合物的提取物。
[0008] 本發明的第三個目的在于公開了上述中藥組合物和提取物的應用。
[0009] 本發明的目的是通過以下技術方案實現的：
[0010] 一種中藥組合物，其中，所述中藥組合物由青龍衣和淫羊藿組成，其中青龍衣與淫 羊藿的重量比為1:1。
[0011] 上述技術方案所述的中藥組合物，其中，青龍衣為30g，淫羊藿為30g。
[0012] 上述技術方案所述的中藥組合物，其中，所述中藥組合物用于制備治療肝癌的藥 物。
[0013] 一種中藥組合物的提取物，其中，所述提取物通過下述步驟制備所得：
[0014] (1)、按照重量比1:1稱取青龍衣與淫羊藿藥材；
[0015] ⑵、加水浸泡30min后回流提取2次，加水量分別為藥材總重量的8倍、6倍，每次 提取1小時，趁熱傾出上清液，濾過，合并濾液；
[0016] ⑶、減壓濃縮干燥即得浸膏粉末。
[0017] 上述技術方案所述的中藥組合物，其中，青龍衣為30g，淫羊藿為30g。
[0018] 上述技術方案所述的提取物，其中，所述提取物用于制備治療肝癌的藥物。
[0019] 上述技術方案所述的中藥組合物或上述技術方案所述的提取物在制備治療肝癌 藥物中的應用。
[0020] 上述技術方案所述的應用，其中，中藥組合物或提取物具有下調Bcl-2的表達和 上調Bax的表達的作用。
[0021] 上述技術方案所述的應用，其中，中藥組合物或提取物的劑型為醫學上可接受的 劑型。
[0022] 上述技術方案所述的應用，其中，中藥組合物或提取物的劑型為粉劑、注射液、膠 囊、片劑或口服液中的一種。
[0023] 本發明具有以下有益效果：
[0024] 1、本發明中藥組合物及其提取物不僅配制簡單，療效好，無副作用，安全性高，有 利于患者及時減輕病狀，并且優于青龍衣與刺五加藥材組合對肝癌的治療，具有良好的開 發前景及社會和經濟效益。
[0025] 2、本發明中藥組合物及其提取物對人肝癌細胞株Η印G2和鼠肝癌細胞株H22的抑 瘤效果明顯強于青龍衣與刺五加組合、單獨使用青龍衣和單獨使用淫羊藿。
[0026] 3、本發明中藥組合物及其提取物對人肝癌細胞株Η印G2移植性腫瘤生長和鼠肝 癌細胞株Η 22移植性腫瘤生長的抑瘤效果明顯強于青龍衣與刺五加組合、單獨使用青龍衣 和單獨使用淫羊藿。
【專利附圖】
【附圖說明】：
[0027] 1、圖1是各給藥組對HepG2肝癌細胞生長抑制率的影響；
[0028] 2、圖2是各給藥組對H22肝癌細胞生長抑制率的影響；
[0029] 3、圖3是各給藥組對小鼠 HepG2移植性腫瘤平均瘤重的影響；
[0030] 4、圖4是各給藥組對小鼠 H22移植性腫瘤平均瘤重的影響；
[0031] 5、圖5是各組Η印G2細胞中Bcl-2的表達；
[0032] 6、圖6是各組！fepG2細胞中Bax的表達。
【具體實施方式】：
[0033] 為使本發明的技術方案便于理解，以下結合具體實施例對本發明中藥組合物及其 提取物作進一步的說明。
[0034] 實施例1 : 一種中藥纟目合物:
[0035] -種中藥組合物，由重量比1:1的青龍衣與淫羊藿組成。
[0036] 實施例2 :-種中藥纟目合物:
[0037] -種中藥組合物，由30g的青龍衣和30g淫羊藿組成。
[0038] 實施例3 :中藥纟目合物提取物的制各:
[0039] (1)、按照重量比1:1稱取青龍衣與淫羊藿藥材；
[0040] (2)、加水浸泡30min后回流提取2次，加水量分別為藥材總重量的8倍、6倍，每次 提取1小時，趁熱傾出上清液，濾過，合并濾液，即得中藥組合物提取物。
[0041] 實施例4 :中藥纟目合物提取物的制各：
[0042] 本實施例與實施例3相同，區別在于：步驟（1)中青龍衣為30g，淫羊藿為30g。
[0043] 實施例5 :中藥組合物提取物浸膏粉末的制備:
[0044] 將實施例3或4得到的中藥組合物提取物減壓濃縮干燥即得中藥組合物提取物浸 膏粉末。
[0045] 以下結合具體實驗例對本發明中藥組合物（青龍衣與淫羊藿組合物）及其提取物 在肝癌治療中的有益效果作進一步說明。
[0046] 一、實驗材料：
[0047] 1、藥物及試劑：
[0048] 青龍衣、淫羊藿、刺五加均購自河北省安國中藥材市場，生產批號為20130322。環 磷酰胺片由天津金世制藥有限公司提供，生產批號20130613。生理鹽水、MTT(四甲基偶氮 唑鹽）、苦味酸均由國藥集團化學試劑北京有限公司提供，生產批號為20131012。胎牛血清 購置于四季青公司，生產批號20130623。DMS0購置于Sigma公司，生產批號20130215。Bax 及Bcl-2鼠抗人單抗、內參一抗（β-actin)購置Santa Cruz公司，生產批號20130808。
[0049] 2、細胞及動物：
[0050] (1)細胞株：HepG2細胞系，H22肝癌瘤株，RH-35細胞系，BRL細胞系，均由軍事醫 學科學院提供。
[0051] ⑵動物：BALB/c小鼠，清潔級，雄性，6-8周齡，體重（20±2)g，購自軍事醫學科學 院，動物合格證號SCXK-(軍）2007-004。
[0052] 3、材料及儀器：
[0053] Costar96孔細胞培養板（美國Corning公司）；一次性0· 22 μ m針筒式微孔濾膜 (上海興亞凈化材料廠）；RAK-2001耐高溫塑料染色架（福州邁新）；Forma恒溫C02培養 箱（Thermo Electron Shanghai Instruments Co. , Ltd.) ;BioTek 多功會泛酶標儀（Thermo Electron Shanghai Instruments Co·, Ltd.) ;ABI7500 突光定量 PCR 儀（美國 CY-TECH); FA2004分析天平（上海天平儀器廠）；ALC4239低溫高速離心機（美國Sigma公司產品）； 725型超低溫冰箱（美國Forma公司）；SW-CJ-2FD超凈工作臺（蘇州安泰空氣技術有限公 司）。
[0054] 二、實驗項目
[0055] 所有處理數據均以S±s表示，使用SPSS19. 0統計軟件中的單因素方差分析處理數 據，用LSD法進行組間比較；否則采用非參數秩和檢驗，P < 0. 05表示有差異，P < 0. 01表 示有顯著性差異。
[0056] 實驗例1 :以下實驗例2?6中的各實驗樣品的提取制備：
[0057] (1)、本發明中藥組合物（青龍衣與淫羊藿）的提取物浸膏粉末的制備：
[0058] 精密稱取青龍衣與淫羊藿藥材各30g置圓底燒瓶中，加水浸泡30min后回流提取 2次，加水量分別為藥材總重量的8倍、6倍，每次提取1小時，趁熱傾出上清液，濾過，合并 濾液，減壓濃縮干燥即得浸膏粉末。
[0059] (2)、青龍衣與刺五加提取物浸膏粉末的制備：
[0060] 精密稱取青龍衣與刺五加藥材各30g置圓底燒瓶中，其余提取步驟同上。
[0061] (3)、青龍衣提取物浸膏粉末的制備：
[0062] 精密稱取青龍衣藥材30g置圓底燒瓶中，其余提取步驟同上。
[0063] (4)、淫羊藿提取物浸膏粉末的制備：
[0064] 精密稱取青淫羊藿藥材30g置圓底燒瓶中，其余提取步驟同上。
[0065] (5)、刺五加提取物浸膏粉末的制備：
[0066] 精密稱取刺五加藥材30g置圓底燒瓶中，其余提取步驟同上。
[0067] 實駘例2 :MTT法檢測各給藥組對人肝癌細胞株IfepG2的影響：
[0068] 將處于對數生長期的人肝癌細胞株Η印G2用0.25%胰酶消化后，用含10%胎牛血 清的RPMI1640培養液稀釋成濃度為5 X 104個/mL的細胞懸液，接種于96孔培養板中，每 孔100 μ 1，在37°C、C02培養箱中培養。培養Η印G2細胞系至細胞生長到50-60%融合時， 對照組培養液中加入溶解化合物所用的DMS0 (二甲基亞砜）培養液，陽性組加入0. 005g/ mL環磷酰胺，青龍衣+淫羊藿組加入相當于原藥材2g/mL本發明中藥組合物提取物浸膏粉 末，青龍衣+刺五加組加入相當于原藥材2g/mL青龍衣與刺五加提取物浸膏粉末，青龍衣組 加入相當于原藥材2g/mL青龍衣提取物浸膏粉末，淫羊藿組加入相當于原藥材2g/mL淫羊 藿提取物浸膏粉末，刺五加組加入相當于原藥材2g/mL刺五加提取物浸膏粉末，各100μ 1， 每孔總液體量為200 μ 1。培養24h后，棄上清，加入0. 5mg/ml的ΜΤΤ檢測細胞活性。方法 如下：去上清，磷酸鹽緩沖液（PBS)洗2遍，MTT、37°C孵育4小時，PBS洗2遍，DMS0溶解結 晶，490nm測定吸光度。
[0069]
【權利要求】
1. 一種中藥組合物，其特征在于：所述中藥組合物由青龍衣和淫羊藿組成，其中青龍 衣與淫羊藿的重量比為1:1。
2. 根據權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于：青龍衣為30g，淫羊藿為30g。
3. 根據權利要求1或2所述的中藥組合物，其特征在于：所述中藥組合物用于制備治 療肝癌的藥物。
4. 一種中藥組合物的提取物，其特征在于，所述提取物通過下述步驟制備所得： (1) 、按照重量比1:1稱取青龍衣與淫羊藿藥材； (2) 、加水浸泡30min后回流提取2次，加水量分別為藥材總重量的8倍、6倍，每次提取 1小時，趁熱傾出上清液，濾過，合并濾液； (3) 、減壓濃縮干燥即得浸膏粉末。
5. 根據權利要求4所述的中藥組合物，其特征在于：青龍衣為30g，淫羊藿為30g。
6. 根據權利要求4或5所述的提取物，其特征在于：所述提取物用于制備治療肝癌的 藥物。
7. 權利要求1?3所述的中藥組合物或權利要求4?6所述的提取物在制備治療肝癌 藥物中的應用。
8. 權利要求7所述的應用，其特征在于：中藥組合物或提取物具有下調Bcl-2的表達 和上調Bax的表達的作用。
9. 權利要求7或8所述的應用，其特征在于：中藥組合物或提取物的劑型為醫學上可 接受的劑型。
10. 根據權利要求9所述的應用，其特征在于：中藥組合物或提取物的劑型為粉劑、注 射液、膠囊、片劑或口服液中的一種。
【文檔編號】A61P35/00GK104116778SQ201410361010
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2014年7月25日 優先權日:2014年7月25日
【發明者】趙艷玲, 肖小河, 王伽伯, 陳哲, 鄭全福 申請人:中國人民解放軍第三0二醫院