四數九里香及其提取物在制備藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明屬于中藥【技術領域】，具體涉及一種天然植物藥材和/或其提取物在治療心臟病藥物中的新用途。本發明涉及四數九里香和/或其提取物在制備治療心臟病的藥物中的應用。所述的四數九里香是四數九里香的葉、枝、根、花、果實中任意一種或其組合，粉碎入藥；所述提取物為四數九里香粉碎后在室溫浸提、加熱回流、超臨界萃取中所獲得的提取物，提取所使用的溶劑為水與乙醇以任何比例相混溶的液體；或者是丙酮、乙醚、石油醚、氯仿、乙酸乙酯以任何比例相混溶的液體；或者是液態CO2。本發明主要用于對冠心病、風濕性心臟病、高血壓性心臟、肺源性心臟、心肌病、心臟腫瘤、血管病變的綜合治療。本發明所制成的藥物制劑經動物試驗及臨床試驗表明無明顯不良反應及毒副作用，能為患者提供安全、高效的治療心臟病的天然植物藥物。
【專利說明】四數九里香及其提取物在制備藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于中藥【技術領域】，具體涉及一種天然植物藥材和/或其提取物在治療心臟病藥物中的新用途。
技術背景
[0002]當今，人們普遍關注“奪命沒商量”的癌癥；卻不知動脈硬化才是人類壽命的“第一終結者”。根據世衛組織的統計數字，心血管疾病是世界頭號殺手，每年大約有1750萬人因心臟病和中風死亡。目前心臟病多以手術及西藥進行治療，然而由于西藥治療心臟病需長期服用，導致對患者的肝、腎、腸、胃等器官傷害很大，因而國內外的醫生、專家和患者都在尋找低毒高效的綠色藥品，而中醫藥在這方面正是自己的優勢，中醫藥治療心臟病不但對患者的心臟有一定的獨到之處，而且對患者的其它臟腑也有調理，保健作用。
[0003]四數九里香Murraya tetramera C.C.Huang為蕓香科九里香屬植物,是一種落葉喬木，生長于石灰巖山頂陽光充足的地方。四數九里香入藥，辛、微苦，性微溫，具有祛風解表、行氣止痛、活血散瘀、抗炎、鎮痛、解熱之功效。
[0004]歷代本草及各少數民族將四數九里香用于治療感冒發熱、咳嗽氣踹、胃痛、風濕麻痹、跌打淤腫、皮膚瘙癢、濕疹等癥，與之相關的專利及文獻也比比皆是，但將四數九里香作為治療心臟病的藥物尚無文獻報道。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于提供一種四數九里香和/或其提取物在制藥領域中的新應用。
[0006]本發明涉及四數九里香和/或其提取物在制備治療心臟病的藥物中的應用。
[0007]本發明涉及四數九里香和/或其提取物在制備治療冠心病的藥物中的應用。
[0008]本發明涉及四數九里香和/或其提取物在制備治療風濕性心臟病的藥物中的應用。
[0009]本發明涉及四數九里香和/或其提取物在制備治療高血壓性心臟的藥物中的應用。
[0010]本發明涉及四數九里香和/或其提取物在制備治療肺源性心臟病的藥物中的應用。
[0011]本發明涉及四數九里香和/或其提取物在制備治療心肌病的藥物中的應用。
[0012]本發明涉及四數九里香和/或其提取物在制備治療心臟腫瘤的藥物中的應用。
[0013]本發明涉及四數九里香和/或其提取物在制備治療血管病變的藥物中的應用。
[0014]本發明所述的四數九里香是四數九里香的葉、枝、根、花、果實中任意一種或其組合，粉碎入藥；所述提取物為四數九里香粉碎后在室溫浸提、加熱回流、超臨界萃取中所獲得的提取物，提取所使用的溶劑為水與乙醇以任何比例相混溶的液體；或者是丙酮、乙醚、石油醚、氯仿、乙酸乙酯以任何比例相混溶的液體；或者是液態co2。
[0015]本發明所述的四數九里香和/或其提取物可以單獨作為主要活性成分制成藥物制劑，也可以與其它成分共同作為主要活性成分制成藥物制劑。
[0016]本發明所述的藥物劑型包括各種口服、注射、腔道、經皮等不同給藥途徑的藥物制齊U。可以是本發明所述原料與相應的藥用輔料經常規工藝制成的膠囊、片劑、顆粒劑、丸劑、外用搽劑、噴劑、注射劑等，也可以是本發明所述原料與其它中藥材組成的復方制劑。
[0017]本發明提供了四數九里香和/或其提取物的新應用，為心臟病治療提供了新的天然藥物植物。本發明主要用于對冠心病、風濕性心臟病、高血壓性心臟、肺源性心臟、心肌病、心臟腫瘤、血管病變的綜合治療。本發明所制成的藥物制劑經動物試驗及臨床試驗表明無明顯不良反應及毒副作用，能為患者提供安全、高效的治療心臟病的天然植物藥物。
[0018]本發明藥物安全性試驗
[0019]一、急性毒性試驗
[0020]I材料與方法
[0021]1.1動物:健康合格清潔級昆明種小鼠50只，體重18?22g，雌雄各半，由昆明醫科大學實驗動物中心提供。
[0022]1.2受試藥物及其配制:四數九里香膠囊(制法見實施例1，下同)由云南名揚藥業有限公司提供，規格0.5g/粒。取40粒四數九里香膠囊除去膠囊外殼，傾出藥粉，于研缽中研磨5min后逐漸加入2 %的羧甲基纖維素鈉，配為糊狀混懸液，粘稠，終末濃度為23.4 %，為四數九里香膠囊的最高濃度。
[0023]1.3實驗方法
[0024]1.3.1預實驗取禁食12h以上(不禁水)的小鼠10只，雌雄各半，用四數九里香膠囊的最大濃度(23.4%)及最大容積(0.3ml/10g)灌胃，每日2次給藥，觀察7天，結果無動物死亡，無法按常規測定LD5tl，故改為測定四數九里香膠囊的最大耐受量。
[0025]1.3.2四數九里香膠囊最大耐受量(MTD)的測定另取小鼠40只，隨機分為兩組，每組20只，雌雄各半，四數九里香膠囊組用小鼠能耐受的最大濃度和最大容積，一日內灌胃3次，測定其最大給藥量，生理鹽水組給予同體積生理鹽水，兩組小鼠連續觀察7天，每天稱體重并記錄。觀察動物的活動、皮毛飲食、糞便有無異常改變，并觀察有無中毒癥狀及死亡(若有死亡，則進行解剖并進行病理學檢驗)，連續觀察I周，I周后復稱體重，處死并解剖動物，觀察心、肝、脾、肺、腎、腦等主要臟器有無異常變化。
[0026]2實驗結果
[0027]2.1 —般情況第一次給藥后5min后，小鼠表現明顯好動，2h內動物極少進食，4h后動物的活動、飲食等逐漸恢復正常。未見其它異常或不良反應，也無動物死亡。二次給藥后，狀態同前一樣，未見明顯異常。處死解剖動物后，其主要臟器均未見明顯的異常病變。一般情況見表I所示。
[0028]表I小鼠灌服四數九里香膠囊后結果(X±S)
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[0030]
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[0031]2.2四數九里香膠囊最大耐受量(MTD)小鼠灌胃給藥的日累計劑量為21.06g/kg，此劑量相當于擬臨床人用量的281倍(臨床成人體重按60kg計算，每日用藥量按0.075g/kg計算)。
[0032]3 結論
[0033]四數九里香膠囊給小鼠灌胃給藥日累積劑量為21.06g/kg，相當于擬臨床人體用量的281倍，除給藥后因劑量過大小鼠有短時間的不適外，未見明顯的毒性反應。
[0034]本發明藥效學試驗:
[0035]二、四數九里香膠囊抗實驗性動脈粥樣硬化作用
[0036]I材料與方法
[0037]1.1試劑與藥物膽固醇、膽鹽購于天津市永大化學試劑公司；豬油自制；蛋黃粉與全脂奶粉市場購買；基礎飼料由昆明醫科大學實驗動物中心提供。丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒:南京聚力生物醫學工程研究所。兔抗鼠細胞間黏附分子-1 (ICAM-1)抗體、過氧化物酶(HRP)標記羊抗兔IgG、即用型SABC(過氧化物酶)免疫組化試劑盒及DAB顯色液(武漢博士德生物工程有限公司)。四數九里香膠囊由云南名揚藥業有限公司研制。
[0038]1.2儀器5804R低溫超速離心機(德國印pendorf公司)；UV_2401分光光度儀(日本島津)；AMS-18A全自動生化分析儀(張家口奧普森科技發展有限公司)；奧林帕斯CH30光學顯微鏡。
[0039]1.3分組及取材健康SD大鼠30只，?，體重(205±20) g，購自昆明醫科大學實驗動物中心。將大鼠隨機分為組3組:對照組、模型組和中藥組，每組10只。對照組喂食以標準飼料，模型組和四數九里香膠囊組喂以高脂飼料(1%膽固醇、0.1%膽鹽、10%豬油、5%蛋黃粉、5%全脂奶粉、78.9%基礎飼料)，四數九里香膠囊組在喂以高脂飼料的同時給以四數九里香膠囊1.2g/kg。各組均自由飲水，連續喂養8周后急性處死，腹腔靜脈取血，離心取血清，_20°C冰箱放置，大鼠迅速開胸取出主動脈胸腹段血管，清除周圍組織，_70°C冰箱保持，備用。
[0040]1.4生化指標測定測定血清膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)。血清MDA水平和SOD活性測定按試劑盒說明書操作。
[0041]1.5光鏡組織學檢測在大鼠主動脈弓與胸主動脈交界處取材，10%中性甲醛固定，石蠟包埋，制備橫切面石蠟切片，厚度約4微米，HE染色，光鏡觀察。
[0042]1.6主動脈管壁ICMA-1檢測腹主動脈剪切0.6cm左右一段血管，10%中性甲醛固定，其余的血管用于提取蛋白，75 %乙醇脫水，石蠟包埋橫切面切片，厚4微米，每隔4張取I張，每份血管標本5張片子。SABC免疫組織化學法檢測ICMA-1:3% H2O2室溫封閉min，以滅火內源性酶，沸水浴修復后，正常三羊血清室溫封閉阻斷非特異性結合，兔抗大鼠ICMA-1抗體(1:100)37°C Ih,生物素化三羊抗兔IgG37°C孵育20min，PBS洗后滴加試劑SABC。DAB顯色，蘇木素輕度復染，脫水，透明，封片、顯微鏡觀察，以不加兔抗大鼠ICMA-1抗體的切片作為陰性對照，陽性細胞的細胞膜和細胞質染成黃褐色，提示有ICMA-1表達。選取細胞分布均勻的高倍視野作為觀察區，將鏡下陽性細胞數同總細胞數相比較，得到陽性細胞的表達率，每份血管標本取其4張片子的平均值，得出ICMA-1陽性細胞表達率
[0043]1.7主動脈血管壁ICMA-1蛋白表達量檢測提取蛋白，將蛋白提取液進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后轉膜，5%脫脂奶粉37°C封閉Ih，TBS洗膜后，先與兔抗大鼠ICMA-1抗體(1: 100) 4°C過夜反應，再與過氧化物酶(HRP)標記羊抗兔IgG(l:200) 37°C反應lh，T-TBS洗膜，DAB顯色，分析。
[0044]1.8統計學處理所有實驗數據采用SPSSl1.5軟件包統計分析。
[0045]2 結果
[0046]2.1血脂的比較與對照組比較，模型組大鼠血清TC、TG和LDL-C水平明顯升高，差異顯著(P < 0.01);與模型組比較，四數九里香膠囊組TC、TG顯著降低，HDL-C顯著升高，差異有顯著性(P < 0.01或P < 0.05)，而LDL-C影響不明顯(見表2)。
[0047]表2 血清 TC、TG、LDL-C 及 HDL-C 水平(J 土 S)
[0048]
【權利要求】
1.四數九里香和/或其提取物在制備治療心臟病的藥物中的應用，所述的四數九里香是四數九里香的葉、枝、根、花、果實中任意一種或其組合，粉碎入藥；所述提取物為四數九里香粉碎后在室溫浸提、加熱回流、超臨界萃取中所獲得的提取物，提取所使用的溶劑為水與乙醇以任何比例相混溶的液體；或者是丙酮、乙醚、石油醚、氯仿、乙酸乙酯以任何比例相混溶的液體；或者是液態co2。
2.權利要求1所述的四數九里香和/或其提取物在制備治療冠心病的藥物中的應用。
3.權利要求1所述的四數九里香和/或其提取物在制備治療風濕性心臟病的藥物中的應用。
4.權利要求1所述的四數九里香和/或其提取物在制備治療高血壓性心臟的藥物中的應用。
5.權利要求1所述的四數九里香和/或其提取物在制備治療肺源性心臟病的藥物中的應用。
6.權利要求1所述的四數九里香和/或其提取物在制備治療心肌病的藥物中的應用。
7.權利要求1所述的四數九里香和/或其提取物在制備治療心臟腫瘤的藥物中的應用。
8.權利要求1所述的四數九里香和/或其提取物在制備治療血管病變的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P9/10GK104127545SQ201410379420
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年8月4日 優先權日:2014年8月4日
【發明者】溫先敏 申請人:溫先敏