一種輻照滅菌條件下維持骨形態發生蛋白-2活性的方法
【專利摘要】本發明涉及一種利用射線輻照維持BMP-2活性的方法。將BMP-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用60Co、137Cs、192Ir源射線輻照，設定劑量為0.01-100kGy；實現對BMP-2的輻照過程。本發明的優點在于有效解決了BMP-2輻照過程中失活問題，推動了負載BMP-2的醫療器械的研究發展，大大提高了其應用前景。
【專利說明】—種輻照滅菌條件下維持骨形態發生蛋白-2活性的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及骨形態發生蛋白-2(819-2)輻照滅菌過程中的活性保持，其輻照對象為冊?-2，采用發射源，輻照劑量為0.01-100^670
【背景技術】
[0002]骨形態發生蛋白(819)被廣泛應用，主要是因為它可以誘導骨和軟骨的形成，可作為治療骨折和牙周缺陷的治療劑，并能夠在植入物和人工假體周圍誘導骨生長。傳統的基因剔除實驗表明，骨形態發生蛋白擁有著多種多樣的生物活性，比如在早期的胚胎發生、多方位的器官形成等方面都能通過調節細胞的增殖、分化和凋亡來實現功能。通過體外和體內試驗，一系列人骨形態發生蛋白已經被證實可以刺激骨形成，同時重組人骨形成蛋白也被應用。至今，已經有超過20種冊？被鑒定和表征，他們都是轉化生長因子0 (16^- 3 )超家族的成員。其中，81？-2具有幾乎和自體骨相當的骨修復能力，被認為具有最強的骨誘導活性。
[0003]滅菌是81？-2及負載81？-2醫療器械臨床使用前必需的操作。但是現行的幾種常規滅菌方式都會使81？-2失去活性。環氧乙烷可與蛋白類物質發生化學反應而使81？-2失活；高壓蒸汽滅菌使81？-2變性而失活。
[0004]輻照滅菌是通過放射性物質發出輻射線殺死大多數物質上的微生物的一種有效方法，在整個滅菌過程中，溫度并不明顯升高，對于熱敏性化合物是很好的滅菌方式。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于射線輻照有效地對81？-2滅菌同時維持其活性。
[0006]本發明的技術方案如下:
[0007]本發明將81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用6000^13708^19211~源射線輻照，設定劑量為0.01-1001^7，優選設定劑量為15-501^7 ；實現對81？~2的輻照過程。
[0008]然后將細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？~2組，細胞培養7天后檢測每個孔八…含量。通過八…含量的高低來確定81？-2的活性高低，實現對81？-2活性的檢測。
[0009]本發明檢測冊?-2活性的原理是41？是細胞向成骨細胞分化的重要指標，冊?-2活性高，細胞向成骨細胞分化的趨勢明顯，則八I？表達量高，通過八I？的含量高低可以檢測81？~2活性的高低。
[0010]本發明的優點在于有效解決了 81？-2輻照滅菌過程中失活問題，提高了其應用前旦
0
【專利附圖】
【附圖說明】
[0011]圖1:6°?射線25成7輻照后細胞中從？含量變化；
[0012]圖2:6000射線50成7輻照后細胞中從？含量變化；
[0013]圖3:6000射線35成7輻照后細胞中從？含量變化。
[0014]具體實施方法
[0015]下面通過例子對本發明專利進行進一步的闡述。
[0016]實施例1:
[0017]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用6%0源射線輻照，設定劑量為0.01成7。
[0018]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0019]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。
[0020]實施例2:
[0021]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用⑶化源射線輻照，設定劑量為0.01成7。
[0022]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0023]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。
[0024]實施例3:
[0025]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用19211~源射線輻照，設定劑量為0.01成7。
[0026]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0027]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。
[0028]實施例4:
[0029]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用6%0源射線輻照，設定劑量為100成7。
[0030]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0031]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。
[0032]實施例5:
[0033]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用137?:8源射線輻照，設定劑量為100成7。
[0034]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0035]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。
[0036]實施例6:
[0037]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用19211~源射線輻照，設定劑量為100成7。
[0038]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0039]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。
[0040]實施例7:
[0041〕 1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用6%0源射線輻照，設定劑量為25成7。
[0042]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0043]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。實驗結果如附圖1所示。
[0044]實施例8:
[0045]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用6%0源射線輻照，設定劑量為50成7。
[0046]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0047]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。實驗結果如附圖2所示。
[0048]實施例9:
[0049]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用6%0源射線輻照，設定劑量為35成7。
[0050]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0051]3.通過對八I？含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八I？表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。實驗結果如附圖3所示。
[0052]實施例10:
[0053]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用⑶化源射線輻照，設定劑量為25成7。
[0054]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0055]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。
[0056]實施例11:
[0057]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用19211~源射線輻照，設定劑量為50成7。
[0058]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0059]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。
[0060]實施例11:
[0061]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用19211~源射線輻照，設定劑量為28成7。
[0062]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0063]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。
[0064]實施例12:
[0065]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用6%0源射線輻照，設定劑量為15成7。
[0066]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0067]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。
[0068]實施例13:
[0069]1.準備81？-2溶液加入離心管中，用封口膜封好，放入保溫瓶中，裝滿冰，用137?:8源射線輻照，設定劑量為15成7。
[0070]2.臍帶血間充質干細胞在0？12完全培養液中常規培養，分別設立未輻照的冊?-2組、輻照的81？-2組。細胞培養7天后檢測每個孔八I？含量。
[0071]3.通過對八…含量的分析，我們可以看到，81？~2輻照之后，其八…表達量與未輻照的81？-2的八…表達量相近，并沒有顯著性差異，從而證明輻照之后81？-2活性得到維持。
【權利要求】
1.利用射線輻照維持BMP-2活性的方法，其特征在于:射線發射源為6°Co、137Cs或192Ir,輻照劑量為0.01-1OOkGy。
2.如權利要求書I所述的方法，其特征在于:輻照劑量為25-50kGy。
【文檔編號】A61L2/08GK104307005SQ201410583411
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年10月27日 優先權日:2014年10月27日
【發明者】亓洪昭, 楊賢金, 盧云峰, 李朝陽, 李雪, 崔振鐸, 原續波, 王思穎, 汪亞運 申請人:天津大學