專利名稱：一種乙酰哈巴苷對照品的高效制備方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥化學對照品的制備方法，屬中藥現代化技術領域，具體而言， 本發明涉及一種從中藥材筋骨草中快速分離乙酰哈巴苷對照品的方法。
背景技術：
筋骨草(Ajugae Herba),為唇形科(Labiatae)筋骨草屬(Ajuga L.)植物筋骨草 (Ajuga decumbens Thunb.)的干燥全草，又名金瘡小草、青魚膽草、苦地膽草、散血草。性味苦，寒，歸肺經。具有清熱解毒，涼血消腫的功效。用于咽喉腫痛，肺熱咯血，跌打腫痛。為 《中國藥典》2010年版新增收載品種。乙酰哈巴苷(8-0-Acetylharpagide)，分子式為C17H26O11,結構式如下脂柱進行吸附，然后分別用2、倍量柱體積的水和廣3倍量柱體積的體積分數為40%的乙醇溶液洗脫雜質，再用廣3倍量柱體積的體積分數為60%乙醇溶液洗脫目標物質，收集洗脫液，濃縮至原體積的1/10 ；
C.高效制備液相分離將步驟B所得濃縮溶液用微孔濾膜過濾后，上高效制備液相色譜柱分離，在線監測，針對性收集目標化合物色譜峰段制備溶液；
所述高效制備液相色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18)，柱規格為 50cmX 10cm、50cmX8cm 或 50cmX5cm 等。所述高效制備液相的色譜條件為流動相為體積分數20-30%的甲醇溶液，檢測波長 210nm。D.產品回收將步驟C所得制備溶液減壓回收甲醇，水溶液以2-5BV的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行富集，然后用1-3倍量柱體積的體積分數95%乙醇洗脫，濃縮洗脫液至干，固體于50 70°C溫度下干燥6 8小時，得乙酰哈巴苷對照品。所述大孔吸附樹脂選自DlOl或AB-8型。本發明的優點在于
1、步驟少，耗時短，得率高，操作簡便，易于工業化生產。2、溶劑消耗少，制備液相色譜分離步驟中的溶劑都可回收再利用。3、溶劑毒性小，所用的有機溶劑甲醇、乙醇等，環境污染小。4、具有較高的學術價值。目前國內關于乙酰哈巴苷分離純化的文獻報道很少，高效制備液相色譜用于乙酰哈巴苷對照品的分離純化屬首次。
圖1為本發明實施例1 C步驟所述高效制備液相分離在線監測圖譜圖2為本發明實施例1所得乙酰哈巴苷產品的HPLC檢測圖譜。
具體實施例方式實施例1
一種乙酰哈巴苷對照品的高效制備方法，其特征在于按如下工藝步驟進行
A.原料提取將筋骨草藥材^cg粉碎成粗粉，加入20L體積分數為40%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小時，合并提取液，冷卻至室溫；
B.大孔樹脂富集稱取IkgDlOl大孔吸附樹脂，用直徑IOcm玻璃柱填裝成樹脂柱，樹脂床體積約3L ；將冷卻后的提取液以3BV的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行吸附， 然后分別用9L水和6L體積分數為40%的乙醇溶液洗脫雜質，再用6L體積分數為60%的乙醇溶液洗脫目標物質，收集洗脫液，濃縮至約0. 6L ；
C.高效制備液相分離將步驟B所得濃縮溶液用微孔濾膜過濾，上高效制備液相色譜柱分離，色譜柱填料為C18，流動相為體積分數25%的甲醇溶液，檢測波長210nm，在線監測， 針對性收集目標化合物色譜峰段制備溶液；
D.產品回收稱取500gDlOl大孔吸附樹脂，用直徑IOcm玻璃柱填裝成樹脂柱，樹脂床體積約1. 5L ；將步驟C所得制備溶液減壓回收甲醇，水溶液以:3BV的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行富集，然后用3L體積分數95%的乙醇洗脫，濃縮洗脫液至干，固體50°C干燥8小時，得乙酰哈巴苷對照品。 實施例2
一種乙酰哈巴苷對照品的高效制備方法，其特征在于按如下工藝步驟進行
A.原料提取將筋骨草藥材^g粉碎成粗粉，加入40L體積分數為45%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小時，合并提取液，冷卻至室溫；
B.大孔樹脂富集稱取^gAB-8大孔吸附樹脂，用直徑IOcm玻璃柱填裝成樹脂柱，樹脂床體積約6L ；將冷卻后的提取液以4BV的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行吸附， 然后分別用18L水和12L體積分數為40%的乙醇溶液洗脫雜質，再用12L體積分數為60% 的乙醇溶液洗脫目標物質，收集洗脫液，濃縮至約1. 2L ；
C.高效制備液相分離將步驟B所得濃縮溶液用微孔濾膜過濾，上高效制備液相色譜柱分離，色譜柱填料為C18，流動相為體積分數30%的甲醇溶液，檢測波長210nm，在線監測， 針對性收集目標化合物色譜峰段制備溶液；
D.產品回收稱取IkgAB-8大孔吸附樹脂，用直徑IOcm玻璃柱填裝成樹脂柱，樹脂床體積約3L ；將步驟C所得制備溶液減壓回收甲醇，水溶液以4BV的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行富集，然后用7L體積分數95%的乙醇洗脫，濃縮洗脫液至干，固體70°C干燥 6小時，得乙酰哈巴苷對照品。 所得乙酰哈巴苷對照品重11. 3g，HPLC純度分析為99.覬。
權利要求
1.一種乙酰哈巴苷對照品的高效制備方法，其特征在于按如下工藝步驟進行A.原料提取將筋骨草藥材粉碎成粗粉，按照質量體積比kg/L加入8-10倍量的體積分數為40-60%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小時，合并提取液，冷卻至室溫；B.大孔樹脂富集將步驟A冷卻后的提取液以2 5BV的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行吸附，然后分別用2、倍量柱體積的水和廣3倍量柱體積的體積分數為40%的乙醇溶液洗脫雜質，再用廣3倍量柱體積的體積分數為60%乙醇溶液洗脫目標物質，收集洗脫液，濃縮至原體積的1/10 ；C.高效制備液相分離將步驟B所得濃縮溶液用微孔濾膜過濾后，上高效制備液相色譜柱分離，在線監測，針對性收集目標化合物色譜峰段制備溶液；D.產品回收將步驟C所得制備溶液減壓回收甲醇，水溶液以2-5BV的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行富集，然后用1-3倍量柱體積的體積分數95%乙醇洗脫，濃縮洗脫液至干，固體于50 70°C溫度下干燥6 8小時，得乙酰哈巴苷對照品。
2.如權利要求1所述乙酰哈巴苷對照品的高效制備方法，其特征在于所述高效制備液相色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，柱規格為50cmX10cm、50cmX8cm或50cmX5cm。
3.如權利要求1所述乙酰哈巴苷對照品的高效制備方法，其特征在于所述高效制備液相的色譜條件為流動相為體積分數20-30%的甲醇溶液，檢測波長210nm。
4.如權利要求1所述乙酰哈巴苷對照品的高效制備方法，其特征在于所述大孔吸附樹脂選自DlOl或AB-8型。
全文摘要
本發明公開了一種乙酰哈巴苷對照品的高效制備方法，屬中藥現代化技術領域。該方法按如下工藝步驟進行A.原料提取采用40-60%乙醇回流提取3次，每次2小時；B.大孔樹脂富集以水、乙醇除雜后，再以乙醇洗脫目標物質；C.高效制備液相分離流動相為20-30%的甲醇溶液，檢測波長210nm；D.產品回收以乙醇洗脫，濃縮干燥得純度99%以上乙酰哈巴苷對照品。本發明方法簡易快速，溶劑消耗少，得率高，經濟環保，具有較高的經濟價值和學術價值。
文檔編號C07H17/04GK102399250SQ20111042010
公開日2012年4月4日 申請日期2011年12月15日 優先權日2011年12月15日
發明者劉丁, 夏柯, 文煥松, 郭建華 申請人:成都普思生物科技有限公司