專利名稱：一種丹酚酸a制備方法
技術領域：
本發明涉及一種丹酚酸A制備方法。
背景技術：
丹參制劑是我國心腦血管疾病的基本治療藥物，因療效確切，丹參已成為我國用量最大、銷售額最高、制劑生產廠最多，臨床劑型最全的中藥之一。丹參有效化學成分主要有兩大類脂溶性丹參酮類化合物和水溶性酚酸類化合物。研究表明丹酚酸類在抗肝臟損傷、抗動脈粥樣硬化及細胞凋亡以及改善記憶功能障礙等方面有著顯著的活性。其中又以丹酹酸A(Salvianolic acid A)抗氧化活性最強,丹酹酸A結構如下
權利要求
1.一種丹參丹酚酸A制備方法，其特征在于以丹參為原料，制備方法如下 取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約Imm 5mm顆粒，每次加3 15倍量、45 95°C水溫浸提取，同時以10 50轉/分速度攪拌，或加3 15倍量水煎煮提取，共提取I 3次，每次提取I 4小時；提取液減壓濃縮至相對密度1. O 1. 25 (600C )，加入乙醇使含醇量在50% 85%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液；或者 取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約Imm 5mm顆粒，每次加3 15倍量30% 60%乙醇回流提取，每次提取I 4小時，共提取I 3次；減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液； 將上述丹參提取液加水稀釋至每Iml含丹酚酸BI 30mg，水溶液用堿調pH至3. 5 .6.5，加入與丹酚酸B摩爾百分比O.1 3%的氯化鋅作為催化劑，在100 140°C溫度加熱轉化I 6小時； 轉化液用酸調PH值至2. 5 4. 5，靜置、離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸Al 10mg，經HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 35 1 70，樹脂柱徑高比為1: 4 1: 30，分別用I 8倍柱體積水、I 10倍柱體積10% 40%乙醇洗脫，除去雜質，再用2 10倍柱體積20% 60%乙醇洗脫，HPLC檢測，收集含有丹酚酸A的20% 60%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味； 水溶液濃縮至每Iml含1-1Omg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 5 1: 25，樹脂柱徑高比為1: 4 1: 25，分別用I 10倍柱體積水、5 20倍柱體積20% 60%乙醇溶液洗脫除雜，再用4 15倍柱體積40% 90%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的40% 90%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味水溶液； 水溶液濃縮，調酸pH至2. O 4. 0，用水溶液I 8倍量的叔丁基甲基醚，分2 6次萃取，分離有機層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酹酸Alg IOg的萃取液,加入. 3倍量硅膠，攪拌，揮干； 把攪拌樣硅膠加到已裝好的5 20倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 4 1: 25，以正戊烷-叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4 6)洗脫6 30倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚出4)洗脫6 30倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收后的丹酚酸A加5 20倍量水溶解，微波真空干燥，得丹酚酸A。
2.如權利要求1所述的一種丹參丹酚酸A制備方法，其特征在于以丹參為原料，制備方法如下 取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約Imm 3mm顆粒，每次加5 12倍量、60 90°C水溫浸提取，同時以15 40轉/分速度攪拌，或加5 12倍量水煎煮提取，共提取2 3次，每次提取2 4小時；提取液減壓濃縮至相對密度1. O 1. 20 (600C )，加入乙醇使含醇量在60% 80%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液；或者 取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約Imm 3mm顆粒，每次加5 12倍量40% 55%乙醇回流提取，每次提取2 4小時，共提取2 3次；減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液； 將上述丹參提取液加水稀釋至每Iml含丹酚酸B5 20mg，水溶液用堿調pH至3. 5 .5.5，加入與丹酚酸B摩爾百分比O. 2 2%的氯化鋅作為催化劑，在100 140°C溫度加熱轉化2 6小時； 轉化液淋酸調PH值至;2. 5 4. 5，靜置、離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸A2 6mg，經HPD-1OO大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 40 1: 60，樹脂柱徑高比為1: 4 1: 20，分別用I 5倍柱體積水、3 8倍柱體積15% 30%乙醇洗脫，除去雜質，再用2 6倍柱體積30% 50%乙醇洗脫，HPLC檢測，收集含有丹酚酸A的30% 50%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味； 水溶液濃縮至每Iml含3-7mg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 7 1: 15，樹脂柱徑高比為1: 6 1: 15，分別用2 6倍柱體積水、8 18倍柱體積30% 50%乙醇溶液洗脫除雜，再用6 12倍柱體積50% 70%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的50% 70%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味水溶液； 水溶液濃縮，調H pH至2. O 4. 0，用水溶液2-5倍量的叔丁基甲基醚，分2 5次萃取，分離有機層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酹酸A3g 8g的萃取液,加入I 2倍量硅膠，攪拌，揮干； 把攪拌樣硅膠加到已裝好的7 15倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 7 1: 15，以正戊烷-叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4 6)洗脫12 25倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚出4)洗脫12 25倍柱體積，減壓回收洗脫齊[J，回收后的丹酚酸A加8 15倍量水溶解，微波真空干燥，得丹酚酸A。
3.如權利要求2所述的一種丹參丹酚酸A制備方法，其特征在于以丹參為原料，制備方法如下 取丹參藥材，切成飲片，每次加8倍量、85°C水保溫浸提取，同時以25轉/分速度攪拌，共提取3次，每次提取3小時；提取液減壓濃縮至相對密度1. O 1. 20 (600C )，加入乙醇使含醇量在70%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液； 提取液加水稀釋至每Iml含丹酚酸BlOmg，水溶液用堿調pH至3. 5 4. 5，加入與丹酚酸B摩爾百分比O. 5%的氯化鋅作為催化劑，在110 140°C溫度加熱轉化4小時； 轉化液_調pH倌至2. 5 4. 5，靜置、離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸A3mg，經HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 50，樹脂柱徑高比為1: 8，分別用2倍柱體積水、5倍柱體積25%乙醇洗脫，除去雜質，再用4倍柱體積40%乙醇洗脫，HPLC檢測，收集含有丹酚酸A的40%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味； 水溶液濃縮至每Iml含5mg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 10，樹脂柱徑高比為1: 8，分別用3倍柱體積水、12倍柱體積40%乙醇溶液洗脫除雜，再用8倍柱體積60%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的60%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味水溶液； 水溶液濃縮，調酸pH至2. 5 3. 0，用水溶液3倍量的叔丁基甲基醚，分3次萃取，分離有機層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酚酸A5g的萃取液，加入1. 5倍量硅膠，攪拌，揮干；把攪拌樣硅膠加到已裝好的10倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 10，以正戊烷-叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4 6)洗脫20倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚出4)洗脫20倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收后的丹酚酸A加10倍量水溶解，微波真空干燥，得丹酚酸A。
4.根據權利要求1 3所述的一種丹酚酸A制備方法，其特征在于微波真空干燥溫度20-100°C，回差溫度1-5°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率1-100KW，干燥10-200分鐘。
5.根據權利要求4所述的一種丹酚酸A制備方法，其特征在于微波真空干燥溫度50-85°C，回差溫度2-4°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率10-80KW，干燥100-150分鐘。
6.根據權利要求5所述的一種丹酚酸A制備方法，其特征在于微波真空干燥溫度55-80°C，回差溫度2-3°C，真空度-O. 07Mpa以上，微波功率25-60KW，干燥120-140分鐘。
7.根據權利要求1 3任一項所述的丹酚酸A制備方法，其中所述的丹酚酸B、丹酚酸A采用高效液相色譜法檢測，檢測條件如下 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 檢測波長286nm ;流速1. Oml/min ;柱溫30°C ； 理論塔板數按丹酚酸A計應不低于10000 ； 對照品溶液的制備精密稱取丹酚酸A對照品10mg、丹酚酸B對照品IOmg到IOOml容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度。
供試品溶液的制備精密量稱取IOmg相當于丹酚酸A及10丹酚酸B樣品到IOOml容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度，即得； 洗脫以甲醇為流動相A，以O. 1-0. 5%磷酸為流動相B，按下述條件進行梯度洗脫，運行60分鐘； 0-10分鐘時，甲醇的比例由30%升至40%，0. 1-0. 5%磷酸水溶液的比例由70%降至60% ； 10-30分鐘時，甲醇的比例由40%升至55%，O. 1-0. 5%磷酸水溶液的比例由50%降至45% ； 30-60分鐘時，甲醇的比例由55%升至80%，O. 1-0. 5%磷酸水溶液的比例由45%降至20% ； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各 ο μ 1，注入液相色譜儀，測定，計算丹酚酸B、丹酚酸A含量。
全文摘要
本發明涉及一種丹參丹酚酸A制備方法，取丹參藥材制成丹參提取液，丹參提取液通過催化轉化，再通過一系列的分離、洗脫處理等步驟后，采用微波真空干燥，提供了一種非常適合產業應用且生產成本較低的新的制備丹酚酸A的工藝方法。
文檔編號C07C69/732GK103044251SQ20121048764
公開日2013年4月17日 申請日期2012年11月20日 優先權日2012年11月20日
發明者呂武清, 楊小玲, 歐陽婷, 蔡元魁, 鐘陽桂, 崔剛 申請人:呂武清