專利名稱：乙酸銨提純尿促性素的方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，利用尿促性素蛋白質溶于一定濃度鹽溶液中的特性，采用低溫條件下こ酸銨溶液提純尿促性素，こ醇沉淀，最后用丙酮脫水得尿促性素提純物。
背景技術：
尿促性素(HMG)是由人腦下垂體前葉部分分泌的ー種糖蛋白促性腺激素，一般是從絕經期或絕經期后婦女的尿液中經提取純化而制得。婦女在行經期間HMG的含量有所波動，但較低，只有婦女進入絕經期或之后的十幾年中，其尿中HMG的含量方達到高峰(60-100iu/L尿)，并能維持在一個穩定的水平上，HMG含有卵泡刺激素(FSH)和黃體生成素(LH)，其所含比例近似1:1。臨床主要用于治療婦女因功能性不排卵所致的不育癥；男性因激素水平低下所引起的精子過少或活力不足。另外，還用于治療諸如婦女閉經、月經不調、男女性機能失調等癥。1928年Ascbheim首先報道了從更年期婦女尿液中發現了活性物質，之后報道雖不少，但真正對HMG的了解和制備，是從20世紀60年代的Donimi開始，并逐漸形成比較規范化的エ藝來制備的。我國從20世紀70年代開始研究，80年代正式進入臨床試驗階段，90年代開始大量生產。在實際生產中，由于尿促性素粗品中雜質成分過多(有效成分少于10% )，如果尿促性素粗品直接通過柱吸附純化，會增加樹脂使用量，因樹脂價格昂貴，造成生產成本升高。且在吸附操作過程中，雜質易堵塞柱體，甚至可能發生柱體脹裂的危險。本發明針對這些問題，提出了用こ酸銨提純尿促性素粗品的技術方法，提純后的尿促性素除出了 80%的雜質，在后續協和樹脂吸附過程中不僅節約了樹脂的使用量，避免了柱體脹裂的危險，還節約了整個エ序的時間
發明內容
本發明提出的こ酸銨提純尿促性素的具體方法，包括以下步驟I) 5%-20%こ酸銨溶液的配制將50g_200gこ酸銨溶解于IOOOml 70%的こ醇溶液中，即得5% -20%的こ酸銨溶液。2)將尿促性素粗品按lg_3g 15ml-35ml比例加入5% -20%的こ酸銨溶液中，在0-20°C條件下攪拌0. 5-4. 5小時，離心，留取上清液。3)離心渣按lg-3g : 15ml-30ml比例加入5%-20%的こ酸銨溶液，在0-20°C條件下攪拌0. 5-4. 5小吋，離心，留取上清液。4)合并兩次上清液，按lml-2ml 1. 5ml_4. 5ml比例加入95%こ醇，攪拌30-60分鐘，置低溫0-20°C下靜置10-24小時。5)離心，收集沉淀物，用適量丙酮脫水，離心，將沉淀物置有五氧化ニ磷作吸水劑的真空干燥箱中干燥，得尿促性素提純物。本發明公開了こ酸銨提純尿促性素的技術方法，其優點和積極效果在于尿促性素粗品經過乙酸銨溶液溶解、乙醇沉淀，丙酮脫水后，可以有效去除尿促性素粗品中的雜質成分，使其在樹脂處理過程中節約樹脂用量，降低生產成本，另外還可以避免因尿促性素粗品雜質過多導致堵塞柱體、甚至發生柱體脹裂危險的隱患。具體實施例
1)7%乙酸銨溶液的配制將70g乙酸銨溶解于1000ml70%的乙醇溶液中，即得 7%的乙酸銨溶液。
2)將400g尿促性素粗品加入15L的7%的乙酸銨溶液中，在10°C條件下攪拌3小時。離心，留取上清液。
3)離心渣加入8L的7%的乙酸銨溶液，在10°C條件下攪拌2小時。離心，留取上清液。
4)合并兩次上清液，加入40L的95%乙醇，攪拌50分鐘，置低溫10°C下靜置過夜。
5)離心，收集沉淀物，用適量丙酮脫水，離心，將沉淀物置有五氧化二磷作吸水劑的真空干燥箱中干燥，得尿促性素提純物120g。
本發明的優點和積極效果
120g尿促性素提純物再經后續協和樹脂吸附工序，與400g尿促性素粗品直接通過協和樹脂吸附，進行了操作時間、成本、成品效價的對比試驗，結果見下表
權利要求
1.一種乙酸銨提純尿促性素的方法，其特征在于，在低溫條件下使用乙酸銨溶液提取尿促性素粗品，之后將得到的上清液使用乙醇沉淀，最后將所得沉淀物用丙酮脫水得尿促性素提純物。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將尿促性素粗品投入乙酸銨溶液中，在低溫條件下攪拌，離心，留取上清液；(2)離心渣再加入乙酸銨溶液，在低溫條件下攪拌，離心，留取上清液；(3)合并兩次上清液，加入95%乙醇，攪拌，置低溫環境下，靜置；(4)離心，收集沉淀物，用丙酮脫水，離心，將沉淀物真空干燥，得尿促性素提純物。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(I)中尿促性素粗品與乙酸銨溶液的比例為lg-3g 15ml-35ml ;低溫條件為0-20°C ;攪拌時間0. 5-4. 5小時。
4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)中離心渣與乙酸銨提取液的比例為lg-3g 15ml-30ml ;低溫條件0-20°C ;攪拌時間0. 5-4. 5小時。
5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中上清液與95%乙醇的體積比為1-2 1. 5-4. 5 ;低溫環境溫度:0-200C ;靜置時間:10-24小時。
6.根據權利要求1-5任意之一所述的方法，其特征在于，所述乙酸銨溶液是通過將 50g-200g乙酸銨溶解于1000ml70%的乙醇溶液中制備得到的。
7.根據權利要求1-6任意之一所述的方法，其特征在于，制備得到的尿促性素提純物再經過樹脂吸附工序制備得到尿促性素成品。
8.按照權利要求1-7任意之一所述方法制備得到的尿促性素。
全文摘要
本發明公開了一種采用乙酸銨提純尿促性素的方法，其特征是尿促性素粗品(有效成分低于10％)在低溫條件下，用乙酸銨溶液提取，乙醇沉淀，最后用丙酮脫水得尿促性素提純物。此技術去除了尿促性素粗品中雜質成分的80％以上；尿促性素提純物在后續工序中通過樹脂柱吸附純化，此技術還節約樹脂使用量，降低生產成本；避免在操作過程中可能因尿促性素粗品雜質過多，導致樹脂柱體堵塞、甚至發生柱體脹裂危險的隱患。
文檔編號C07K1/30GK103059126SQ20121059800
公開日2013年4月24日 申請日期2012年12月30日 優先權日2012年12月30日
發明者王麗, 施曉春, 劉翠珍, 呂金花 申請人:青島九龍生物醫藥有限公司