分離管的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種隔板式分離管，主要應用于生物學領域，適用于淋巴細胞，白細胞，干細胞等人體及動物細胞的分離，特別適用于細胞治療等高風險、大量細胞樣本分離的醫療技術領域。
【背景技術】
[0002]細胞細胞分離是生物學和醫學領域最常用的一中分離手段，常用于特定細胞的性能研究，擴大培養，疾病診斷和疾病治療。特別是免疫細胞治療技術，近年來得到飛速發展，并在臨床上得到大量的應用。
[0003]早在1992年，生物細胞免疫療法在美國臨床就得到廣泛應用，并被美國FDA正式通過。
[0004]2009年3月衛生部頒布《醫療技術臨床應用管理辦法》衛醫政發【2009】18號，將生物免疫治療納入第三類技術進行管理。2011年4月17日，中央電視臺《新聞聯播》節目對生物免疫治療作出了權威報道，稱“生物免疫治療獲得重大進展，早期癌癥三分之一可治愈”。
[0005]2011年10月3日，生物免疫治療領域的三位科學家榮獲2011諾貝爾醫學獎，分別是美國科學家布魯斯-博伊特勒、盧森堡的法國籍科學家朱爾斯-霍夫曼以及加拿大科學家拉爾夫-斯坦曼，以表彰他們在腫瘤生物免疫學領域取得的研究成果。2012年2月4日央視13套《新聞直播間》欄目對腫瘤生物治療進行了相關報道，報道中指出:生物免疫治療是腫瘤的綠色療法，它如同細胞“導彈”，對腫瘤的識別能力較強，能精確點殺腫瘤細胞，而不會傷及人體正常組織，為腫瘤治療提供了新的選擇。目前衛生部已經將這種療法列入《第三類醫療技術》在部分三甲醫院進行推廣。部分地區已將生物細胞免疫治療納入醫保報銷范圍。細胞治療與傳統治療可以優勢互補，腫瘤較大的患者現手術切除大部分腫瘤再結合細胞治療清除微小殘余細胞仍是最佳的治療方案。生物免疫治療在不損傷機體正常免疫的情況下，清除血液、淋巴中殘存的癌細胞，減少了腫瘤細胞復發轉移的幾率，而治療費用僅為化療及靶向藥物傳統方式的一半。
[0006]進入到21世紀，對于治癌、抗癌成果最為顯著的生物細胞免疫治療更是獲得了連續兩屆諾貝爾醫學獎，并且我國衛生部已將其納入醫療管理范疇，重點選擇部分三甲進行推廣。隨著生物技術的不斷發展，越來越多的患者受益于該項技術，經過了數十年的發展，如今的生物治療技術更加成熟，也更加個性化。已經從原有的DC、CIK細胞，發展為DC、CIK、NK、CD3AK、、γ δ T多種細胞治療模式，效果更有保障。腫瘤生物治療是繼手術、放療、化療之后的第四大治療方法。
[0007]治療流程
第一步、細胞采集:從患者體內抽取外周血,并分離出所需淋巴細胞；
第二步、實驗室細胞修飾、激活、擴增通過實驗室技術將采集的患者淋巴細胞負載腫瘤抗原，擴增抗癌細胞； 第三步、細胞質檢將培養好的細胞逐一篩檢，剔除發育不良，不合格的細胞；
第四步、細胞回輸將培養好的細胞按療程會輸到患者體內；
第五步、療效評估在每一個療程后醫生將按照療效指標，對患者的治療效果進行評估，以確定最好的治療方案。
[0008]從治療的流程可以看出，分離細胞該技術開端和基礎，分離細胞的純度、活性和數量，降低細胞分離過程污染的幾率，對整個治療的效果和患者安全有至關重要的影響。目前普遍采用淋巴細胞分離液通過密度梯度法實現細胞分離，但是分離過程中，特別是大批量樣本處理時，血液樣品加入和淋巴細胞分離液時，二者界面很容易發生混合，造成分離效果差，得率低，純度低。針對這種情況，美國的BD公司，greinerB1公司，Axis Shield公司，深圳市達科為生物工程有限公司等開發了淋巴細胞分離管產品，并申請了專利保護。大部門公司是采用特制離心管，中間卡上了一層壓聚的過濾板，從而把分離管分成兩個空間，避免血樣與分離液的混合。也有公司是采用一種醫用半固體組織，將普通離心管分割成3個空間，分離液，半固體組織與分離液的吸附物和上部空間，從而避免了血樣與分離液的混合。以上技術對于淋巴細胞分離技術進行了改進，并有效提高了分離效率，但是仍然存在一定局限性，限制此類產品的廣泛應用。
[0009]第一:國外公司采用的隔網式技術，要求技術含量高，成本昂貴。
[0010]第二:傳統隔板要把顆粒通過加熱或者膠水粘合壓聚在一起，內部死角很難清洗干凈，要想做到安全無殘留或滲出，基本沒有可能。醫用半固體組織，更是難以做到無滲出。特別是預裝分離液的分離管，分離液長期和隔板長期浸泡分離液中，化學滲出會更嚴重，會對細胞性能完成較大影響。
[0011]第三:預灌裝分離液的分離管，經過存放及貨物運輸，隔板下方或半固體組織內部或下面，很容易產生氣泡，使用前一般先要離心，操作不便。
[0012]第四:傳統分離管無法分離小體積樣本，很多科研用戶受樣品量的限制無法使用。
[0013]第五:傳統分尚管,分尚后,一般直接把隔板上部溶液直接倒出，進一步分尚，其中混入較大量的分離液，影響淋巴細胞的純度，同時也加大了分離液對細胞的影響。也可吸出位于中間的淋巴細胞層，這樣混入分離液和血清較少，但是操作麻煩，得率低。
【發明內容】
[0014]本發明提供了一種分離管，可以克服解決現有產品存在的問題和缺陷，應用更廣泛，操作更便捷，產品更加安全，細胞得率高。
[0015]本發明提了一種分離管，由離心管和隔板兩部分組成，以普通離心管和隔板配合使用。
[0016]上述的隔板有兩種規格，一種用于15ml分離管配合,直徑在12.5~14mm之間，另一種用于50ml分離管配合，直徑為24~26mm之間。
[0017]上述隔板有兩種型號，一種在下部有一根長腳，離心后隔板可以上浮，常規體積的樣本，另外一種規格下面沒有長腳，離心后，隔板下沉5~20mm，用于分離體積較小的非常規樣本。
[0018]上述隔板布滿小孔，小孔直徑為0.2-0.8mm之間，倒出隔板上層樣品時，避免下層樣本流出。
[0019]上述隔板，小孔與小孔之間由尖角設計，減少細胞通過隔板的阻力和減少阻擋細胞的數量。
[0020]上述隔板底部有一定體積(100~300uL)的盲孔，當離心時，盲孔內空氣被壓縮，隔板所受離心力大于浮力，離心完畢后，空氣恢復常壓，隔板所受浮力大于重力，緩慢上浮。
[0021]上述隔板上部有4根短角，長度為15~30mm。
【附圖說明】
[0022]圖1為產品組裝效果圖
圖2為常規隔板的上半部分3D效果圖圖3為常規隔板下半部分視3D效果圖圖4為小體積樣本隔板3D效果圖
圖中標記如下:1.短角；2.小孔；3.長腳；4.盲孔；5.尚心管；6隔板。
[0023]具體是實施方式
本實施例以分離人外周血淋巴細胞的分離
本實施例中采用50ml規格分離管，分離人外周血淋巴細胞，淋巴細胞分離液為國內購買，密度為 1.0770±0.001g/mL，滲透壓為 290±15 mOsmol/ kg。
[0024]1.取50ml無菌離心管，加入人外周血淋巴細胞分離液分離液16ml ；
2.放入隔板(如圖1所示，短角朝上)；
2.待隔板沉降到最下端時，25ml血液樣品加入分離管；
3.離心，設置離心力為800至100g,時間為20min到30分鐘；
5.靜置l~3min待隔板上浮到淋巴細胞層附近，倒出隔板上面的樣品；
6.加入約20ml生理鹽水清洗，離心去上清；
7.加入約25ml生理鹽水，混勻，取樣，計數。
[0025]經過本實施例分離的淋巴細胞回收率可達到:97%，純度可達到:80%以上，紅細胞去除率大于99.9%。隔板生產簡單，結構簡單，無死角，容易清洗全面，與分離液接觸時間短，混入淋巴細胞層的分離液體積只有2~4ml。
【主權項】
1.一種分離管，其特征在于該分離管由離心管和隔板兩部分組成，隔板外徑在離心管最大刻度處內徑和最小刻度處內徑之間。
2.權利要求1所述的分離管，其特征在于隔板無需預先固定在離心管之中。
3.一種隔板裝置，其特征在于隔板表面布滿小孔，小孔呈正方形漏斗狀結構，相鄰兩個小孔有一條頂邊重合。
4.權利要求3所述的隔板裝置，其特征在于其用于密度梯度法分離樣品。
5.一種隔板裝置，其特征在于其底部有一定體積的開口向下，頂端封閉的盲孔，在離心狀態和靜置狀態時，隔板在分離液中所受合力可變，在離心過程中盲孔中空氣被壓縮，隔板所受離心力大于浮力，隔板位于下端；離心后，空氣恢復到正常體積，隔板所受浮力大于重力，合力向上，隔板緩慢上浮。
6.一種隔板裝置，其特征在于隔板在離心前，通過重力與離心管之間的摩擦力和隔板的浮力作用，隔板可以停留在分離液液面位置；離心過程中，隔板會繼續下沉一段距離，離心后隔板與離心管之間通過摩擦力作用固定在一起，不會發生移動。
【專利摘要】本發明公布了一種分離管裝置及其使用方法，分離管裝置包括離心管和隔板兩部分組成，隔板在使用前放入離心管中，不僅可以分離常規樣本，也可以分離小體積樣本，與傳統分離管相比，容易清洗，化學殘留少，可減少物質溶出以及分離液對分離細胞的影響，可廣泛應用于醫學診斷及生物治療及科學研究工作。
【IPC分類】C12M1-00, C12M1-24
【公開號】CN104673659
【申請號】CN201510106353
【發明人】李小閣
【申請人】李小閣
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2015年3月12日