專利名稱：己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法
技術領域：
本發明涉及的是一種電化學分析技術領域的檢測方法，特別的是一種己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法。
背景技術：
己烯雌酚(diethylstilbestrol，(E)-3，4-Bis(4-hydroxyphenyl)-3-hexene，DES)誕生于20世紀40年代，為第一個口服有活性的人工合成雌激素。己烯雌酚在人造雌激素中是作用較強的一種。醫學上主要用于治療雌激素缺乏癥，但是由于其具有促進動物生長、增加蛋白質沉積和提高飼料轉化率的作用，曾經作為促生長劑廣泛應用于畜牧養殖業。己烯雌酚在獸醫臨床上主要用于不明顯發情動物的催情，還可用治療胎衣不下、排出死胎、治療子宮炎等。自從人們發現動物因食用含DES的飼料在組織中殘留給人類健康帶來危害以來，世界上絕大多數國家禁止在食品動物中使用DES。2002年我國農業部規定，DES及其鹽、酯制劑禁用于所有食品動物的所有用途。但在畜牧養殖業上非法添加DES情況不時出現，因而建立快速、靈敏并能實現現場檢測己烯雌酚的方法非常必要。目前國內外文獻報道用于DES殘留檢測的方法很多，主要有免疫學方法如放射免疫法(RIA)酶聯免疫吸附法(ELISA)等；色譜學方法如氣相色譜法(GC)、氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS)、高效液相色譜法(HPLC)、薄層色譜法(TLC)、氣液色譜法(GLC)等；其它方法如輻射分光光度法、電化學法，生物分析法等。在這些分析方法中，氣相色譜-質譜聯機法、放射免疫法以及帶電子捕獲檢測器的氣相色譜法是目前已有的最能有效、靈敏地測定DES ppb水平含量的檢測方法。但這些分析方法均需要大型分析儀器，操作過程繁瑣，不能實現現場檢測。本發明研制的修飾電極可直接用于現場樣品中DES的富積及與便攜式電化學傳感器組裝后進行現場測試。
經對現有技術文獻的檢索發現，Shenghui Zhang，Kangbing Wu and Shengshui Hu.Voltammetric determination of diethylstilbestrol at carbonpaste electrode using cetrylpyridine bromide as medium.Talanta，2002，58747-754(張勝輝、吳康斌、胡勝水于2002年，在《國際純粹》58期747頁-754頁，發表的“以溴代十六烷基吡啶為電子媒介體的碳糊電極上檢測己烯雌酚的電化學方法”)。但該方法的缺陷是由于使用碳糊電極，其重復性不佳，且檢測限較高，為0.00268μg/g，不能滿足檢測動物性產品中己烯殘留最低檢測限的要求。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術中的不足，提供一種己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法。本發明的工作電極的修飾過程簡單且能重復利用，該修飾電極對己烯雌酚的選擇性富積能力強，測試的重現性良好及靈敏度高，檢測限可達到0.001μg/g。
本發明是通過以下技術方案實現的，本發明包括如下步驟第一步，電極的預處理將玻碳電極在麂皮上用TiO2納米粉按“8”字形打磨，使其成鏡面，用蒸餾水沖洗，再用超聲波清洗10分鐘～30分鐘；將清洗后的玻碳電極依次放入體積比為1∶1的硝酸、丙酮溶液中各浸泡3分鐘～15分鐘，然后用蒸餾水沖洗電極；將電極在紅外燈下烘干。
第二步，納米金溶膠液的制備；第三步，聚乙烯亞胺-納米金修飾玻碳電極的制備可先后分為聚乙烯亞胺修飾玻碳電極的制備與聚乙烯亞胺-納米金修飾電極的制備兩個步驟；第四步，用聚乙烯亞胺-納米金修飾電極測試己烯雌酚含量a.在不同的電化學測試杯中分別加入6毫升～10毫升pH6.8的0.01M的磷酸鹽緩沖液作為支持溶液，然后在每個小燒杯中分別加入100微升～300微升的7％乙醇水溶液配制的己烯雌酚標準液或樣品待測液。(作標準曲線時，使每個燒杯中己烯雌酚的最終濃度分別為0.06mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.6mg/L、1.2mg/、2.4mg/L，4.8mg/L、6.0mg/L及9.0mg/L。)b.將修飾好的聚乙烯亞胺-納米金修飾玻碳電極、Ag/AgCL參比電極(市售)及鉑電極(市售)連接到MF-1A多功能伏安儀(市售，江蘇江分電分析儀器有限公司)上，(調節MF-1A多功能伏安儀的測試參數掃描電位范圍為0.0V～0.7V，靈敏度選0.5μA/mV～2μA/mV)富積時間為60秒～120秒，用微分脈沖伏安法(即DPV法，為常規技術)記錄己烯雌酚的氧化峰電流值。每測完一個樣品，將該修飾電極置于0.2mol/L的氫氧化鈉溶液中清洗3分鐘～5分鐘以除去電極表面己烯雌酚的殘留。
c.根據己烯雌酚的濃度值與對應的氧化峰電流繪制出己烯雌酚的標準曲線，并根據標準曲線計算相應樣品中己烯雌酚的含量。
所述的第二步，納米金溶膠液的制備方法，具體是a.將氯金酸溶液加到裝有200ml蒸餾水的大燒杯中；b.將燒杯放在電爐上，大火煮沸；c.用移液槍將0.5ml～2ml新配制的1％的檸檬酸三鈉邊攪拌邊加入到正在沸騰的大燒杯內；d.改用中火繼續加熱；e.觀察溶液顏色變化由無色到深紫色，再到紫紅色(紅葡萄酒色)；f.注意一旦發現溶液顏色有轉變為紫紅色的趨勢，即開始計時，繼續煮沸后關火；g.待溶液冷卻至室溫后，儲存于4℃冰箱中，待下一步處理(所得膠體金粒子的平均直徑可以在電子顯微鏡下觀察得到，約20nm)。
所述的氯金酸溶液，其取量及濃度是1％氯金酸溶液，0.5ml～1ml。
所述的繼續煮沸后關火，其持續的時間是5分鐘。
所述的第三步，聚乙烯亞胺修飾玻碳電極的制備，具體是取市售的質量百分比濃度為30％～50％的聚乙烯亞胺原液0.5毫升～1毫升，相應地以0.5毫升～1毫升異丙醇作為助溶劑，并用pH6.8濃度為0.01M的磷酸鹽緩稀釋成0.5％的聚乙烯亞胺溶液。取該溶液5毫升加入到電化學測試池中。在電化學測試池中經過沉積附著，在玻碳電極表面形成一層均勻的聚乙烯亞胺薄膜。
所述的在電化學測試池中經過沉積附著，具體是將先玻碳柱狀電極(外形直徑為8.0mm，反應面直徑為6.0mm)與Ag/AgCl參比電極及鉑電極構成三電極結構，插入到含有0.5％的聚乙烯亞胺溶液的電化學測試池中，連接MF-1A型多功能伏安儀，進行循環伏安掃描，取出后在紅外燈下烘干(或空氣中自然晾干)，即在玻碳電極表面形成一層均勻的聚乙烯亞胺薄膜；所述的進行循環伏安掃描，條件是在-0.5V～0.5V的范圍內，掃描10圈～30圈。
所述的第三步，聚乙烯亞胺-納米金修飾電極的制備，具體是將上述聚乙烯亞胺-修飾的電極(即PEI-修飾的電極)浸入膠體金溶液中，用三蒸水清洗后，在空氣中自然干燥。最后在已修飾的電極表面直接滴加2μl～6μl的5％的聚乙烯亞胺(即PEI)，在空氣中干燥后待用。
所述的浸入膠體金溶液中，時間是3分鐘～10分鐘。
主要發明的方法原理是首先在預處理過的玻碳電極上用電化學沉積法修飾一層聚乙烯亞胺層，然后將該修飾電極浸入到納米金膠體溶液中來吸附帶負電荷的納米金離子形成第二修飾層，再在此修飾電極上通過吸附聚乙烯亞胺形成三層“夾心式”玻碳修飾電極，由于這種修飾方法增加了電極的富積能力及增大了電極表面的反應面積，因而增加了該方法檢測己烯雌酚的靈敏度及特異性。本發明所采用的核心技術是先將玻碳電極預處理后(主要包括在TiO2納米粉上拋光、超聲清洗及在硝酸、丙酮及蒸餾水中的清洗)，用電化學沉積法在玻碳電極表面沉積一層聚乙烯亞胺膜，然后將該膜浸入納米金溶液中使溶液中的納米金顆粒沉積于聚乙烯亞胺膜表面，最后又在納米金層外面再電沉積一層聚乙類亞胺膜。其中鈉米金溶液是用檸檬酸鈉還原氯金酸溶液而制得。將該“三明治”式修飾電極與便攜式的電化學分析儀組裝后，便可用于測試樣品中的己烯雌酚的殘留。
本發明的應用利用己烯雌酚在聚乙烯亞胺——納米金修飾電極上發生高效吸附及特征性氧化還原反應，通過氧化微電流測試被檢樣品中己烯雌酚的含量，該測試方法步驟簡單，分析時間短，檢測下限可達0.001μg/g，可適用于生物樣品中雌激素類物質殘留的現場檢測。可應用于快速、靈敏、現場檢測動物性產品、飼料樣品中己烯雌酚的電化學傳感器檢測，從源頭控制動物性食品的安全性。
本發明的有益效果是現有的有關測試雌激素的電化學方法是采用未修飾碳糊電極進行直接測定，檢測限達到0.4μg/g，因而該方法的靈敏度低而不適合運用于動物性產品中雌激素的檢測。本發明所闡述的方法優點在于工作電極的修飾過程簡單且能重復利用，該修飾電極的對己烯雌酚的選擇性富積能力強，測試的重現性良好及靈敏度高，檢測限可達到0.001μg/g。該方法克服了色譜法檢測DES時需要大型儀器及耗費時間及人力的缺點，同時也克服了現有檢測己烯雌酚免疫金標試紙條假陽性及假陰性較高的缺點。
圖1是本發明實施例1的“三明治”式聚乙烯亞胺——納米金修飾電極的結構模式。
具體實施例方式
下面對本發明的實施例作詳細說明本實施例在以本發明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發明的保護范圍不限于下述的實施例。
實施例1本實施例1是在以下實施條件和技術要求條件下實施的(一)聚乙烯亞胺-納米金修飾電極的制備(1)電極的預處理首先將玻碳電極在麂皮上用TiO2納米粉按“8”字形打磨好，使其成鏡面，用蒸餾水沖洗后，再用超聲波清洗10分鐘。然后將清洗后的玻碳電極依次放入體積比為1∶1的硝酸、丙酮溶液中各浸泡3分鐘，用蒸餾水沖洗電極。最后將電極在紅外燈下烘干。
(2)納米金膠體粒子的制備先將0.5ml 1％的氯金酸溶液加到裝有200ml蒸餾水的大燒杯中。然后將燒杯放在電爐上，大火煮沸。用移液槍將0.5ml新鮮配制的1％的檸檬酸三鈉邊攪拌邊加入到正在沸騰的大燒杯內，改用中火繼續加熱。發現溶液顏色有轉變為酒紅色的趨勢，即開始計時繼續煮沸5分鐘后關火。待溶液冷卻至室溫后，儲存于4℃冰箱中。電子顯微鏡下觀察膠體金粒子的平均直徑約為38nm。
(3)聚乙烯亞胺修飾玻碳電極的制備取質量百分比濃度為30％的聚乙烯亞胺原液0.5毫升，以0.5毫升異丙醇作為助溶劑，用pH6.8濃度為0.01M的磷酸鹽緩稀釋成0.5％的聚乙烯亞胺溶液，取該溶液5毫升加入到電化學測試池中。將玻碳柱狀電極(外形直徑為8.0mm，反應面直徑為6.0mm)與Ag/AgCl參比電極及鉑電極構成三電極結構，插入到含有0.5％的聚乙烯亞胺溶液的電化學測試池中，連接MF-1A型多功能伏安儀，在-0.5V到0.5V的范圍內進行循環伏安掃描10圈，取出后在紅外燈下烘干(或空氣中自然晾干)，即在玻碳電極表面形成一層均勻的聚乙烯亞胺薄膜。
(4)聚乙烯亞胺-納米金修飾電極的制備將上述PEI-修飾的電極浸入膠體金溶液中3分鐘，用三蒸水清洗后，在空氣中自然干燥。最后在已修飾的電極表面直接滴加2μl的5％的PEI，在空氣中干燥后待用，完成聚乙烯亞胺-納米金修飾電極的制備，參見圖1所示“三明治”式聚乙烯亞胺——納米金修飾電極的結構模式，在該結構中，具有陽離子活性劑性質的聚乙烯亞胺可吸附帶負電的納米金顆粒，納米金顆粒怪又可吸附聚乙烯亞胺層。這樣由于夾層中的納米金與聚乙烯亞胺組合后，大大提高了吸附面積及反應面積，使電流數百倍放大，因而可使檢測己烯雌酚的檢測限下降。
(二)聚乙烯亞胺-納米金修飾玻碳電極的測試己烯雌酚電化學分析方法的建立。
(1)標準曲線的繪制①在不同的電化學測試杯(25ml)中分別加入6毫升pH6.8的0.01M的PBS作為支持溶液，然后在每個小燒杯中分別加入100微升的7％乙醇水溶液配制的己烯雌酚標準液，使每個燒杯中己烯雌酚的最終濃度分別為0.06mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.6mg/L、1.2mg/、2.4mg/L，4.8mg/L、6.0mg/L及9.0mg/L。
②將修飾好的聚乙烯亞胺-納米金修飾玻碳電極、Ag/AgCL參比電極及鉑電極連接到MF-1A多功能伏安儀上(江蘇江分電分析儀器有限公司)。
③調節儀器測試參數掃描電位范圍為0.0V～0.7V。儀器靈敏度選0.5μA/mV，富積時間為60秒，用微分脈沖伏安法(DPV法)記錄己烯雌酚的氧化峰電流值。該方法的測試調制參數如下脈沖幅度為50mV，脈沖寬度20ms，脈沖期為200ms，掃描速度50mV.s-1。每測完一個樣品，將該修飾電極置于0.2mol/L的氫氧化鈉溶液中清洗3分鐘以除去電極表面己烯雌酚的殘留。
④根據己烯雌酚的濃度值與對應的氧化峰電流繪制出聚乙烯亞胺-納米金修飾玻碳電極法檢測己烯雌酚的標準曲線。
(二)實際樣品的測試①樣品的前處理從上海市食品質量檢驗部門獲得豬肉冷凍樣品30份，于室溫下解凍，準確稱取5.0g組織置于30mL塑料離心管中，加入10mL乙醚，混勻后旋渦振蕩3min，再用超聲震蕩15分鐘，6000r/min離心5min，吸取上清液至30mL玻璃管中，殘余物中再加10mL乙醚重復提取一次，合并乙醚相在40℃水浴條件下氮氣流吹干。用2mL 70％甲醇溶液溶解殘留物，旋渦混勻，加4mL石油醚后再旋渦混勻。靜置片刻后吸除上層石油醚，再加石油醚重復提取2次。下層的甲醇相在45℃水浴條件下氮氣流吹干。剩余的水溶液再用4mL乙醚提取，充分混勻，靜置分層后，吸取上層的乙醚相至10mL玻璃離心管中，重復上述操作一次，合并乙醚相，在0℃水浴下氮氣流吹干。以1毫升的1％甲醇水溶液溶解后，冷藏待測。
②測試方法及結果在與測試標準樣品相同的測試條件下，取待檢樣品液100微升，加入電化學測試池，用微分脈沖伏安法記錄己烯雌酚的氧化峰電流值。并根據標準曲線計算相應樣品中己烯雌酚的含量。測試結果表明，30份樣品中，有2份樣品中檢測到己烯雌酚，含量分別0.025μg/g及0.086μg/g，其它樣品均為陰性。經高效液相色譜確證法檢測時，只有一份檢測到己烯雌酚殘留，含量為0.096μg/g。說明該方法的靈敏度要高于色譜法，檢測程序簡單且檢測時間短，每個樣品檢測時間為3分鐘，可用于快速、現場檢測生物樣品中己烯雌酚殘留。
實施例2本實施例2是在以下實施條件和技術要求條件下實施的(一)聚乙烯亞胺-納米金修飾電極的制備(1)電極的預處理首先將玻碳電極在麂皮上的打磨及蒸水沖洗過程同實施例1。然后用超聲波清洗30分鐘，再將清洗后的玻碳電極依次放入體積比為1∶1的硝酸、丙酮溶液中各浸泡15分鐘，用蒸餾水沖洗電極。最后將電極在空氣中自然晾干。
(2)納米金膠體粒子的制備先將1.0ml 1％的氯金酸溶液加到裝有200ml蒸餾水的大燒杯中。然后將燒杯放在電爐上，大火煮沸。用移液槍將2.0ml新鮮配制的1％的檸檬酸三鈉邊攪拌邊加入到正在沸騰的大燒杯內，改用中火繼續加熱。發現溶液顏色有轉變為紫紅色的趨勢，即開始計時繼續煮沸5分鐘后關火。待溶液冷卻至室溫后，儲存于4℃冰箱中。電子顯微鏡下觀察膠體金粒子的平均直徑約為22nm。
(3)聚乙烯亞胺修飾玻碳電極的制備0.5％的聚乙烯亞胺溶液的配制同實施例1，取該溶液5毫升加入到電化學測試池中。將玻碳柱狀電極、Ag/AgCl參比電極及鉑電極構成三電極結構，插入到含有0.5％的聚乙烯亞胺溶液的電化學測試池中，連接MF-1A型多功能伏安儀(江蘇江分電分析儀器有限公司)，在-0.5V到0.5V的范圍內進行循環伏安掃描30圈，取出后在或空氣中自然晾干，即可在玻碳電極表面形成一層均勻的聚乙烯亞胺薄膜。
(4)聚乙烯亞胺-納米金修飾電極的制備將上述PEI-修飾的電極浸入膠體金溶液中10分鐘，用三蒸水清洗后，在空氣中自然干燥。最后在已修飾的電極表面直接滴加6μl的5％的PEI，在空氣中干燥后待用。
(二)聚乙烯亞胺-納米金修飾玻碳電極的測試己烯雌酚電化學分析方法的建立。
(1)標準曲線的繪制標準曲線的繪制方法及步驟同實施例1，不同之處是在本次實施例實施中，運用本次修飾的聚乙烯亞胺-納米金修飾電極為測試電極。儀器參數調節如下掃描電位范圍為0.0V～0.7V。儀器靈敏度選2.0μA/mV，富積時間為120秒，用微分脈沖伏安法(DPV法)記錄己烯雌酚的氧化峰電流值。該方法的測試調制參數如下脈沖幅度為100mV，脈沖寬度40ms，脈沖期為400ms，掃描速度100mV.s-1每測完一個樣品，將該修飾電極置于0.2mol/L的氫氧化鈉溶液中清洗5分鐘以除去電極表面己烯雌酚的殘留。
(二)實際樣品的測試①樣品的前處理樣品的采集及前處理過程同實施例1。
②測試方法及結果在與測試標準樣品相同的測試條件下，取待檢樣品液100微升，加入電化學測試池，用微分脈沖伏安法記錄己烯雌酚的氧化峰電流值。并根據標準曲線計算相應樣品中己烯雌酚的含量。測試結果表明，30份樣品中，有2份樣品中檢測到己烯雌酚，含量分別0.016μg/g及0.058μg/g，其它樣品均為陰性。說明同實施例1相比較，靈敏度稍有下降，但仍要高于色譜測定方法，且檢測時間短，操作過程比色譜法簡單。
實施例3本實施例3是在以下實施條件和技術要求條件下實施的(一)聚乙烯亞胺-納米金修飾電極的制備(1)電極的預處理首先將玻碳電極在麂皮上的打磨及蒸水沖洗過程同實施例1。然后用超聲波清洗20分鐘，再將清洗后的玻碳電極依次放入體積比為1∶1的硝酸、丙酮溶液中各浸泡9分鐘，用蒸餾水沖洗電極。最后將電極在空氣中自然晾干。
(2)納米金膠體粒子的制備先將0.75ml 1％的氯金酸溶液加到裝有200ml蒸餾水的大燒杯中。然后將燒杯放在電爐上，大火煮沸。用移液槍將1.0ml新鮮配制的1％的檸檬酸三鈉邊攪拌邊加入到正在沸騰的大燒杯內，改用中火繼續加熱。發現溶液顏色有轉變為深紅色的趨勢，即開始計時繼續煮沸5分鐘后關火。待溶液冷卻至室溫后，儲存于4℃冰箱中。電子顯微鏡下觀察膠體金粒子的平均直徑約為31nm。
(3)聚乙烯亞胺修飾玻碳電極的制備0.5％的聚乙烯亞胺溶液的配制同實施例1，取該溶液5毫升加入到電化學測試池中。將玻碳柱狀電極、Ag/AgCl參比電極及鉑電極構成三電極結構，插入到含有0.5％的聚乙烯亞胺溶液的電化學測試池中，連接MF-1A型多功能伏安儀(江蘇江分電分析儀器有限公司)，在-0.5V到0.5V的范圍內進行循環伏安掃描20圈，取出后在或空氣中自然晾干，即可在玻碳電極表面形成一層均勻的聚乙烯亞胺薄膜。
(4)聚乙烯亞胺-納米金修飾電極的制備將上述PEI-修飾的電極浸入膠體金溶液中6分鐘，用三蒸水清洗后，在空氣中自然干燥。最后在已修飾的電極表面直接滴加4μl的5％的PEI，在空氣中干燥后待用。
(二)聚乙烯亞胺-納米金修飾玻碳電極的測試己烯雌酚電化學分析方法的建立。
(1)標準曲線的繪制標準曲線的繪制方法及步驟同實施例1，不同之處是在本次實施例實施中，運用本次修飾的聚乙烯亞胺-納米金修飾電極為測試電極。儀器參數調節如下掃描電位范圍為0.0V～0.7V。儀器靈敏度選1.0μA/mV，富積時間為90秒，用微分脈沖伏安法(DPV法)記錄己烯雌酚的氧化峰電流值。該方法的測試調制參數如下脈沖幅度為25mV，脈沖寬度10ms，脈沖期為100ms，掃描速度25mV.s-1。每測完一個樣品，將該修飾電極置于0.2mol/L的氫氧化鈉溶液中清洗4分鐘以除去電極表面己烯雌酚的殘留。
(二)實際樣品的測試①樣品的前處理樣品的采集及前處理過程同實施例1。
②測試方法及結果在與測試標準樣品相同的測試條件下，取待檢樣品液100微升，加入電化學測試池，用微分脈沖伏安法記錄己烯雌酚的氧化峰電流值。并根據標準曲線計算相應樣品中己烯雌酚的含量。測試結果表明，30份樣品中，仍有2份樣品中檢測到己烯雌酚，含量分別0.083μg/g及0.117μg/g，其它樣品仍均為陰性。說明同實施例1及實施例2相比較，靈敏度更高且檢測限更低。
權利要求
1.一種己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法，其特征在于，包括如下步驟第一步，電極的預處理將玻碳電極在麂皮上用TiO2納米粉按“8”字形打磨，使其成鏡面，用蒸餾水沖洗，再用超聲波清洗10分鐘～30分鐘；將清洗后的玻碳電極依次放入體積比為1∶1的硝酸、丙酮溶液中各浸泡3分鐘～15分鐘，然后用蒸餾水沖洗電極；將電極在紅外燈下烘干；第二步，納米金溶膠液的制備；第三步，聚乙烯亞胺-納米金修飾玻碳電極的制備先后分為聚乙烯亞胺修飾玻碳電極的制備與聚乙烯亞胺-納米金修飾電極的制備兩個步驟；第四步，用聚乙烯亞胺-納米金修飾電極測試己烯雌酚的含量a.在不同的電化學測試杯中分別加入6毫升～10毫升pH6.8的0.01M的磷酸鹽緩沖液作為支持溶液，然后在每個小燒杯中分別加入100微升～300微升的7％乙醇水溶液配制的己烯雌酚標準液或樣品待測液；b.將修飾好的聚乙烯亞胺-納米金修飾玻碳電極、Ag/AgCL參比電極及鉑電極連接到MF-1A多功能伏安儀上，富積60秒～120秒，記錄己烯雌酚的氧化峰電流值；c.根據己烯雌酚的濃度值與對應的氧化峰電流繪制出己烯雌酚的標準曲線，并根據標準曲線計算相應樣品中己烯雌酚的含量。
2.如權利要求1所述的己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法，其特征是，所述的第二步，納米金溶膠液的制備方法，具體是a.將氯金酸溶液加到裝有200ml蒸餾水的大燒杯中；b.將燒杯放在電爐上，大火煮沸；c.用移液槍將0.5ml～2ml新配制的1％的檸檬酸三鈉邊攪拌邊加入到正在沸騰的大燒杯內；d.改用中火繼續加熱；e.觀察溶液顏色變化由無色到深紫色，再到紫紅色；f.發現溶液顏色有轉變為紫紅色的趨勢，即開始計時，繼續煮沸后關火；g.待溶液冷卻至室溫后，儲存于4℃冰箱中，待下一步處理。
3.如權利要求2所述的己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法，其特征是，所述的氯金酸溶液，其取量及濃度是1％氯金酸溶液，0.5ml～1ml。
4.如權利要求2所述的己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法，其特征是，所述的繼續煮沸后關火，其持續的時間是5分鐘。
5.如權利要求1所述的己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法，其特征是，所述的第三步，聚乙烯亞胺修飾玻碳電極的制備，具體是取質量百分比濃度為30％～50％的聚乙烯亞胺原液0.5毫升～1毫升，相應地以0.5毫升～1毫升異丙醇作為助溶劑，并用pH6.8濃度為0.01M的磷酸鹽緩稀釋成0.5％的聚乙烯亞胺溶液，取該溶液5毫升加入到電化學測試池中，在該電化學測試池中經過沉積附著，在玻碳電極表面形成一層均勻的聚乙烯亞胺薄膜。
6.如權利要求5所述的己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法，其特征是，所述的在電化學測試池中經過沉積附著，具體是將先玻碳柱狀電極與Ag/AgCl參比電極及鉑電極構成三電極結構，插入到含有0.5％的聚乙烯亞胺溶液的電化學測試池中，連接MF-1A型多功能伏安儀，進行循環伏安掃描，取出后在紅外燈下烘干。
7.如權利要求6所述的己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法，其特征是，所述的進行循環伏安掃描，條件是在-0.5V～0.5V的范圍內，掃描10圈～30圈。
8.如權利要求1所述的己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法，其特征是，所述的第三步，聚乙烯亞胺-納米金修飾電極的制備，具體是將上述聚乙烯亞胺-修飾的電極浸入膠體金溶液中，用三蒸水清洗后，在空氣中自然干燥，最后在已修飾聚乙烯亞胺-納米金修飾電極表面直接滴加2μl～6μl的5％的聚乙烯亞胺，在空氣中干燥后待用。
9.如權利要求8所述的己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法，其特征是，所述的浸入膠體金溶液中，時間是3分鐘～10分鐘。
全文摘要
一種己烯雌酚的玻碳電極修飾的電化學檢測方法，屬于電化學分析技術領域。具體包括電極的預處理；納米金溶膠液的制備；聚乙烯亞胺－納米金修飾玻碳電極的制備先后分為聚乙烯亞胺修飾玻碳電極的制備與聚乙烯亞胺－納米金修飾電極的制備兩個步驟；用聚乙烯亞胺－納米金修飾電極測試己烯雌酚的含量。本發明的工作電極的修飾過程簡單且能重復利用，該修飾電極對己烯雌酚的選擇性富積能力強，測試的重現性良好及靈敏度高，檢測限可達到0.001μg/g。
文檔編號G01N27/413GK101059480SQ20071004047
公開日2007年10月24日 申請日期2007年5月10日 優先權日2007年5月10日
發明者劉國艷, 柴春彥 申請人:上海交通大學