專利名稱：包被板封閉液的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種包被板封閉液。
背景技術：
目前，臨床領域應用的免疫檢測方主要有比濁測定、免疫層析、酶聯診斷試劑 (EIA)，以及近些年發展應用的化學發光免疫分析(CLIA)。其中，由于微量生物活性物質 (例如抗原或抗體)包被吸附到包被板上后很容易喪失活性，板式EIA和CLIA法都涉及到 一項關鍵的技術，即保持包被板的穩定性。目前常用的包被板封閉液只能對包被板起到封閉的效果，并不能有效地保持其上 的生物活性物質的活性。保持包被板上生物活性物質活性的方法通常是將包被板長期保存 在-20°C以下的環境中，而在2 8°C冰箱存放一周或37°C破壞一天，其生物活性就損失了 50%以上。可見，相關技術中存在包被板離開低溫儲藏的環境后，容易喪失活性的問題。
發明內容
有鑒于此，本發明提出了一種包被板封閉液，用以解決相關技術中存在的包被板 離開低溫儲藏的環境后容易喪失活性的問題。根據本發明的一個方面，提供了 一種包被板封閉液。根據本發明的包被板封閉液的組成為0. 5 10g/L的蛋白質物質，0. 5 5g/L的 糖類物質，0. 5 10g/L的氨基酸類物質，0. 2 2g/L的表面活性劑，50 500萬單位/L的 硫酸慶大霉素，0. 1 2g/L的Proclin 300，ρΗ7· 4的0. 02mol/L的磷酸鹽緩沖液。優選地，上述蛋白質物質包括以下之一牛血清白蛋白、酪蛋白。優選地，上述糖類物質包括以下之一海藻糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖。優選地，上述氨基酸類物質包括以下之一甘氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、絲 氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸。優選地，上述表面活性劑包括以下之一吐溫-20 (TWeen-20)、吐 溫-80 (Tween-80)、曲拉通 X-100 (TritonX-IOO)。借助于本發明提供的技術方案，使用本發明的封閉液的包被板，不但能夠對生物活 性物質起到封閉效果，而且在離開低溫環境后能夠更長時間地保持生物活性物質的活性，從 而能夠解決相關技術中包被板離開低溫儲藏的環境后容易喪失活性的問題。此外，本發明提 供的封閉液容易配制、不影響靈敏度、成本低、操作簡單、無壞境污染、對人體無毒無害等。本發明的其它特征和優點將在隨后的說明書中闡述，并且，部分地從說明書中變 得顯而易見，或者通過實施本發明而了解。
具體實施例方式以下本發明的實施例進行說明，應當理解，此處所描述的實施例僅用于說明和解釋本發明，并不用于限定本發明。在對本發明的實施例進行說明之前，首先對本發明實施例的配制方法和使用方法 進行說明。根據本發明實施例的包被板封閉液的配置方法包括首先，取一個潔凈燒杯，先加 入600ml的去離子水；然后，準確稱量下述實施例中的各成分(例如蛋白質物質、糖類物質、 氨基酸類物質、表面活性劑、硫酸慶大霉素、Proclin 300)；最后，在磁力攪拌器上攪拌至各 類物質完全溶解，定容至IOOOml，如有沉渣過濾去除。根據本發明實施例的包被板封閉液使用方法包括首先，把抗原或抗體以 PH7. 40. 02mol/L的磷酸鹽緩沖液稀釋成一定濃度；其次，按IOOul/孔加入稀釋好的包被 液，在2 8°C下包被16 20小時；然后，棄去包被板內的包被液，將包被板拍干后，按 IOOul 300/孔加入上述配制好的包被板封閉液，在2 8°C下包被16 20小時；最后， 棄去包被板內的封閉液，將包被板拍干后，放置于濕度小于30%的35 39°C干燥箱中烘干 4 6小時即可。下面對本發明的實施例進行說明。實施例1以本發明實施例包被的抗促甲狀腺激素(TSH)單抗建立的TSH化學發光免疫分析 方法包括以下步聚步驟1、按照上述配制方法配制包被板封閉液，其組分和濃度為0. 02mol/L 磷酸鹽(PBS)緩沖體系 pH7. 4牛血清白蛋白(BSA)0. 5g/L葡萄糖0. 5g/L酪氨酸0. 5g/L吐溫-20 (Tween-20)0. 2g/L硫酸慶大霉素50萬單位/LProclin 3000. lg/L步驟2、以抗TSH單抗包被白色發光板，包被濃度為5ug/ml，IOOul/孔，37°C包被 2小時，洗板后，以上述封閉液按200/孔4°C包被18小時后，棄去包被板內的封閉液，拍干 后，放置于濕度為25%的37°C干燥箱中烘干4小時；再把多個包被好的包被板分別放置于 37°C的恒溫箱中3天、7天、15天、30天、60天后取出，與2 8°C存放的包被板平行比較；步驟3、把抗TSH單抗-HRP酶結合物以BSA/0. OlM PBSpH 7. 4作為酶稀釋液 配成lug/ml的濃度；步驟4、配制 0μ IU/ml、0. 1 μ IU/ml、0. 5μ IU/ml、2. 5μ υ/πι1、15μ IU/ml、 100 μ IU/ml系歹Ij TSH定標品；步驟5、設定好加樣孔，將50 μ 1系列TSH定標品和質控品QCL、QCH加在存放在 2 8°C的TSH包被板和分別放置于37°C的恒溫箱中3天、7天、15天、30天、60天破壞后 的TSH包被板上，再加50 μ 1稀釋抗TSH單抗HRP酶結合物，37°C反應1小時后，用加入吐 溫-20的磷酸鹽緩沖液(PBS-T)洗板5次，拍干；步驟6、每孔加入底物液100μ 1，第5分鐘以光子計數儀檢測發光信號值，其結果
如下表一所示。
權利要求
1.一種包被板封閉液，其特征在于，其組成為0. 5 10g/L的蛋白質物質，0. 5 5g/ L的糖類物質，0. 5 10g/L的氨基酸類物質，0. 2 2g/L的表面活性劑，50 500萬單位 /L的硫酸慶大霉素，0. 1 2g/L的Proclin 300，ρΗ7· 4的0. 02mol/L的磷酸鹽緩沖液。
2.根據權利要求1所述的包被板封閉液，其特征在于，所述蛋白質物質包括以下之一牛血清白蛋白、酪蛋白。
3.根據權利要求1所述的包被板封閉液，其特征在于，所述糖類物質包括以下之一海藻糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖。
4.根據權利要求1所述的包被板封閉液，其特征在于，所述氨基酸類物質包括以下之甘氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、絲氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸。
5.根據權利要求1所述的包被板封閉液，其特征在于，所述表面活性劑包括以下之一 吐溫-20、吐溫-80、曲拉通X-100。
全文摘要
本發明提供了一種包被板封閉液，該包被板封閉液的組成為0.5～10g/L的蛋白質物質，0.5～5g/L的糖類物質，0.5～10g/L的氨基酸類物質，0.2～2g/L的表面活性劑，50～500萬單位/L的硫酸慶大霉素，0.1～2g/L的Proclin 300，pH7.4的0.02mol/L的磷酸鹽緩沖液。借助于本發明提供的技術方案，使用本發明的封閉液的包被板，不但能夠對生物活性物質起到封閉效果，而且在離開低溫環境后能夠更長時間地保持生物活性物質的活性，從而能夠解決相關技術中包被板離開低溫儲藏的環境后容易喪失活性的問題。此外，本發明提供的封閉液容易配制、不影響靈敏度、成本低、操作簡單、無壞境污染、對人體無毒無害等。
文檔編號G01N33/543GK101995459SQ200910166559
公開日2011年3月30日 申請日期2009年8月26日 優先權日2009年8月26日
發明者劉萍, 欒大偉 申請人:劉萍;欒大偉