小球藻提取物在花椰菜種子萌發中應用及其制備方法
【技術領域】
[0001 ]本發明涉及小球藻提取物在農業技術領域的應用，具體涉及小球藻提取物在花椰 菜種子萌發中應用及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 小球藻（Ch 1 ore 1 la Iryreno idosa)隸屬于綠藻門 Chlorphy ta、綠球藻目 〇11〇1'〇6〇6〇3168、卵囊藻科0〇〇5^〖3〇636、小球藻屬〇11〇^11&，為海洋常見單細胞藻類，具 有重要經濟價值和巨大的應用和開發潛力。小球藻天然含豐富的蛋白質、脂質、食用纖維、 生物素、纖維素、不飽和脂肪酸、生物活性多糖、核酸、維生素、微量元素、礦物質、葉酸與葉 綠素。這些特殊的有效成分具有防治消化性潰瘍、抗腫瘤、增強免疫、抗輻射、抗病原微生 物、防治貧血、降血脂和抗動脈粥樣硬化等保健和藥理作用。其干粉的蛋白質含量在50%以 上，是優良的單細胞飼料蛋白源，在飼料中添加能提高肉豬、肉雞和蛋雞的生產性能，應用 于水產飼料能提高魚類生長速度。小球藻提取物以500-1000倍稀釋，噴施于蔬菜、果樹等 葉面，具有增強植物的光合作用、促使根部生長旺盛、提高對養分的吸收能力以及提高對細 菌的抵抗力的效果。因此，近些年對小球藻的關注度也越來越高。從小球藻的培養、應用等 各個方面都深入研究。專利CN 102586116 B公開了"一種普通小球藻及其培養方法和應 用"，該發明培養方法把污水處理和生產生物能源與其他副產品（如，蛋白質、化妝品原料及 動物飼料等)相結合，降低生產成本，達到廢物資源的綜合利用，實現節能減排的綠色生產。 專利CN 103519035 B公開了"一種小球藻發酵型果凍的制備方法"該發明本發明以小球藻 為原料，利用其本身具有的高蛋白和天然色素，無需添加香精及色素，制得的果凍具有天然 的綠色，發酵乳的清香，及酸甜適宜的口感，同時又具有很高的營養價值。根據相關數據得 知，近幾年來，我國小球藻的研究熱點在小球藻的生物培養、生物柴油以及在保健品、食品 方面的研究，在農業技術領域的研究卻寥寥無幾。
[0003] 為了解決上述現有技術的不足之處，本發明的首要目的是提供一種易培養、易提 取的小球藻提取物。該發明提高了花椰菜種子的發芽率、縮短了種子萌發周期。
[0004] 本發明的另一個目的在于提供上述小球藻提取物的制備方法。
[0005] 本發明的再一個目的在于提供上述小球藻提取物在花椰菜種子萌發中應用。
[0006] 本發明的上述目的是通過如下技術方案實現：
[0007] 1、配制葡萄糖液體培養基于120°(：、11^&，條件下高壓滅菌1.51 1，冷卻后接入小球 藻藻種，置于培養箱中光照培養，培養溫度25-30°C，培養時間3d后按1:1比例擴培至試管 中，生長至深綠時進一步擴培至l〇〇ml錐形瓶中；
[0008] 2、小球藻提取物的制備：取生長狀態良好的小球藻液30mL，密度為2.0 X 107CFU/ 1111，搖勾，離心51]1；[11(25001'/1]1；[11)，離心完畢后沉淀為藻泥。向小球藻泥中加入95%乙醇制成 懸濁液，加入纖維素酶和果膠酶(比例為1: l)2-6ml，酶解24h，酶解溫度25°C。酶解之后進行 再次離心，時間lOmin，轉速是4000r/min。取上清液，減壓蒸餾除去乙醇溶劑得小球藻提取 物；
[0009] 3、花椰菜種子的處理與培養:取大小一致，顆粒飽滿的花椰菜種子，用2%雙氧水 消毒2遍，蒸餾水沖洗3次，然后均勻置于鋪有濾紙的玻璃培養皿中，加入配制成4%濃度的 小球藻提取液至種子完全浸泡，放入保溫箱于25 °C恒溫靜置24h，后置于室溫自然光照培養 發芽。
[0010]所述的葡萄糖液體培養基為:食品工業廢水l〇〇ml、葡萄糖10.0g、微量元素。
[0011] 所述的微量元素為FeC6H5〇 · 5H20 3.9g、NaEDTA 4.35g、MnCI · 4H20 2.188g、 ZnS04*7H20 0.0278g、CoCl*6H20 0.0687g、CuS〇4*5H2〇 0.0102g、H3B03 0.08gNa2Mo〇4 2.0g〇
[0012] 所述的纖維素酶與果膠酶活性之比為1. 〇萬單位:2.0萬單位。
[0013] 經過小球藻提取液的浸泡處理，花椰菜種子發芽率高于95%，發芽周期縮短2到3 天。
[0014] 小球藻提取物促進種子萌發作用機理為小球藻提取物含有氨基酸、多糖、蛋白質、 維生素等功能性成分，補充了種子萌發過程所需要的營養成分，活化種子細胞，促進種子細 胞分化與生長，從而促使種子萌發。
[0015] 本發明具有以下有益效果：
[0016] 1、本發明采用工業廢水作為小球藻培養基，為小球藻提供各種豐富的氮磷元素的 同時達到凈化污水的效果，為實現工業綠色減排生產提供依據。
[0017] 2、由于小球藻提取液中富含各種功能性營養成分，為花椰菜種子萌發提供所需的 綠色純天然各種營養物質，縮短種子發芽周期，提高了種子發芽率。
【具體實施方式】
[0018] 實施例1
[0019] 1、配制葡萄糖液體培養基于120°(：、11^&，條件下高壓滅菌1.51 1，冷卻后接入小球 藻藻種，置于培養箱中光照培養，培養溫度25°C，培養時間3d后按1:1比例擴培至試管中，生 長至深綠時進一步擴培至l〇〇ml錐形瓶中；
[0020] 2、小球藻提取物的制備：取生長狀態良好的小球藻液30mL，密度為2.0 X 107CFU/ 1111，搖勾，離心51]1；[11(25001'/1]1；[11)，離心完畢后沉淀為藻泥。向小球藻泥中加入95%乙醇制成 懸濁液，加入纖維素酶和果膠酶(比例為1:1 )4ml，酶解24h，酶解溫度25°C。酶解之后進行再 次離心，時間lOmin，轉速是4000r/min。取上清液，減壓蒸餾除去乙醇溶劑得小球藻提取物；
[0021] 3、花椰菜種子的處理與培養:選取大小一致，顆粒飽滿的100粒花椰菜種子，用2% 雙氧水消毒2次，蒸餾水沖洗3次，然后均勻置于鋪有濾紙的玻璃培養皿中，加入配制成4% 濃度的小球藻提取液至種子完全浸泡，放入保溫箱于25 °C恒溫靜置24h，后置于室溫自然光 照培養發芽。
[0022] 經測定花椰菜種子發芽率為96%，發芽周期為4天。
[0023] 實施例2
[0024] 1、配制葡萄糖液體培養基于120°(：、11^&，條件下高壓滅菌1.511，冷卻后接入小球 藻藻種，置于培養箱中光照培養，培養溫度28°C，培養時間3d后按1:1比例擴培至試管中，生 長至深綠時進一步擴培至l〇〇ml錐形瓶中；
[0025] 2、小球藻提取物的制備：取生長狀態良好的小球藻液30mL，密度為2.0 X 107CFU/ 1111，搖勾，離心51]1；[11(25001'/1]1；[11)，離心完畢后沉淀為藻泥。向小球藻泥中加入95%乙醇制成 懸濁液，加入纖維素酶和果膠酶(比例為l:l)6ml，酶解24h，酶解溫度25°C。酶解之后進行再 次離心，時間lOmin，轉速是4000r/min。取上清液，減壓蒸餾除去乙醇溶劑得小球藻提取物； [0026] 3、花椰菜種子的處理與培養:選取大小一致，顆粒飽滿的150粒花椰菜種子，用2% 雙氧水消毒2次，蒸餾水沖洗3次，然后均勻置于鋪有濾紙的玻璃培養皿中，加入配制成4% 濃度的小球藻提取液至種子完全浸泡，放入保溫箱于25 °C恒溫靜置24h，后置于室溫自然光 照培養發芽。
[0027]經測定花椰菜種子發芽率為98%，發芽周期為5天。
[0028] 對比例1
[0029] 選取大小一致，顆粒飽滿的100粒花椰菜種子，用2%雙氧水消毒2次，蒸餾水沖洗3 次，然后均勻置于鋪有濾紙的玻璃培養皿中，加入普通種子培養液至種子完全浸泡，放入保 溫箱于25 °C恒溫靜置24h，后置于室溫自然光照培養發芽。
[0030] 對比例2
[0031] 選取大小一致，顆粒飽滿的150粒花椰菜種子，用2%雙氧水消毒2次，蒸餾水沖洗3 次，然后均勻置于鋪有濾紙的玻璃培養皿中，加入普通種子培養液至種子完全浸泡，放入保 溫箱于25 °C恒溫靜置24h，后置于室溫自然光照培養發芽。
[0032]所述的普通種子培養液為:硝酸鉀3g，硝酸鈣5g硫酸鎂3g，磷酸銨2g;硫酸鉀lg，磷 酸二氫鐘lg、乙二銨四乙酸二鈉 l〇〇mg，硫酸亞鐵75mg;硼酸30mg，硫酸猛20mg，硫酸鋅5mg， 硫酸銅lmg，鉬酸銨2mg，蒸餾水100mL。
[0033] 花椰菜種子發芽率、發芽勢的測定方法如下：
[0034] 發芽率=(發芽結束發芽種子數/播種種子數）X 100%
[0035] 發芽勢=[第2天發芽種子數/播種種子數]X 100%;
[0036] 實施例1、對比例1中花椰菜種子發芽率如下表：
[0037]
[0038] 實施例1、對比例1中花椰菜種子發芽勢如下表：
[0039]
[0040] 實施例2、對比例2中花椰菜種子發芽率如下表：
[0041]
[0042] ~實施例2、對比例2中花椰菜種子發芽勢如下表:^' '
[0043]
【主權項】
1. 小球藻提取物在花椰菜種子萌發中應用及其制備方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 、配制葡萄糖液體培養基于120°c、lkpa，條件下高壓滅菌1.5h，冷卻后接入小球藻藻 種，置于培養箱中光照培養，培養溫度25-30°C，培養時間3d后按1:1比例擴培至試管中，生 長至深綠時進一步擴培至l〇〇ml錐形瓶中； 2) 、小球藻提取物的制備:取生長狀態良好的小球藻液30mL，密度為2.0 X 107CFU/ml，搖 勻，離心5min(2500r/min)，離心完畢后沉淀為藻泥。向小球藻泥中加入95%乙醇制成懸濁 液，加入纖維素酶和果膠酶（比例為1:1) 2-6ml，酶解24h，酶解溫度25 °C。酶解之后進行再次 離心，時間lOmin，轉速是4000r/min。取上清液，減壓蒸餾除去乙醇溶劑得小球藻提取物； 3) 、花椰菜種子的處理與培養:取大小一致，顆粒飽滿的花椰菜種子，用2%雙氧水消毒 2遍，蒸餾水沖洗3次，然后均勻置于鋪有濾紙的玻璃培養皿中，加入配制成4%濃度的小球 藻提取液至種子完全浸泡，放入保溫箱于25°C恒溫靜置24h，后置于室溫自然光照培養發 芽。2. 根據權利要求1所述的小球藻提取物在花椰菜種子萌發中應用及其制備方法其特征 在于:葡萄糖液體培養基為:食品工業廢水l〇〇ml、葡萄糖10.0 g、微量元素。3. 根據權利要求2所述的小球藻提取物在花椰菜種子萌發中應用及其制備方法其特征 在于：微量元素為FeC6H5〇 · 5H20 3.9g、NaEDTA 4.35g、MnCI · 4H20 2.188g、ZnS〇4· 7H20 0.0278g、CoCl*6H20 0.0687g、CuS〇4*5H20 0.0102g、H3B03 0.08g Na2Mo〇4 2.0g。4. 根據權利要求1所述的小球藻提取物在花椰菜種子萌發中應用及其制備方法其特征 在于:步驟(2)中纖維素酶與果膠酶活性之比為1.0萬單位:2.0萬單位。
【專利摘要】本發明公開了小球藻提取物在花椰菜種子萌發中應用及其制備方法，具體包括：小球藻提取物制備、花椰菜種子的處理與培養。本發明采用工業廢水作為小球藻培養基，為小球藻提供各種豐富的氮磷元素的同時達到凈化污水的效果，為實現工業綠色減排生產提供依據。再者由于小球藻提取液中富含各種功能性營養成分，為花椰菜種子萌發提供所需的綠色純天然各種營養物質，縮短種子發芽周期，提高種子發芽率。
【IPC分類】A01C1/00, A01G31/00, C05F11/10
【公開號】CN105601357
【申請號】CN201510657894
【發明人】支秀芳
【申請人】支秀芳
【公開日】2016年5月25日
【申請日】2015年10月12日