專利名稱：小麥茉莉酸誘導蛋白、其編碼基因及培育抗逆植物的方法
技術領域：
本發明涉及與小麥抵御病蟲害侵襲相關的茉莉酸誘導蛋白、編碼該蛋白的基因和含有該基因的表達載體，本發明還涉及一種使用編碼茉莉酸誘導蛋白的基因培育抗病蟲害的轉基因植株的方法。
背景技術：
茉莉酸類物質是環戊酮類的衍生物，通過亞麻酸合成(Sembdner和Parthier，1993，Annu.Rev.Plant Physiol 54328-332.1)。其主要的生理活性物質為茉莉酸(JA)及其甲酯(JM)。這兩種化合物廣泛存在于各種植物組織中，在快速生長的組織中含量比較高，如莖尖，根尖，未成熟的果實和幼葉等。最早證明茉莉酸具有信號傳導作用是通過研究茉莉酸促進葉片的衰老(Mueller-Uri等，1988，Planta，176241-247)。現在大量的證據表明茉莉酸在聯系外界環境變化和細胞內代謝變化的信號傳導過程中起重要作用，是一類新型的植物生長調節物質，特別是在植物的受傷反應和抵御病蟲害的防御反應中發揮重要作用(Creelman，和Mullet，1995，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，924114-41191)。在番茄中如果缺乏茉莉酸合成(茉莉酸合成缺失突變體)，將天蛾幼蟲在這種植物上放養時，幼蟲的生長量會增加四倍，反之在植物上噴灑茉莉酸不僅能降低有害毛蟲的生長，而且還使寄生性黃蜂對毛蟲的捕食增加兩倍(Thaler，1999，Nature，399686-688)。
茉莉酸作為一類植物生長調節物質，其作用主要是將各種信號傳遞到植物細胞中，并引起基因表達的改變，合成新的蛋白質和酶，從而發揮各種生理功能(Wasternack和Parthier，1997，Trends Plant Sci.，2302-307)。因此研究受茉莉酸誘導的基因，闡明其編碼的蛋白質，以及其生物學作用，對于了解茉莉酸的作用，更好的利用茉莉酸調節植物對病蟲害的防御反應，具有非常重要的意義。在植物中已經確定受茉莉酸誘導而新合成的蛋白質包括蛋白酶抑制劑、病理相關蛋白、植保素合成酶，細胞壁蛋白、滲調素、脂肪氧化酶等，這些蛋白質和酶在植物抵御病蟲害侵襲中也發揮著重要作用。對于禾本科中重要的糧食作物中有關茉莉酸誘導蛋白的研究還很少。至今，在國內外尚未見有關在小麥中發現與抵御病蟲害侵襲相關的茉莉酸誘導蛋白基因研究的報道。
無論在中國還是在世界范圍內，小麥都是最重要的農作物之一。它也是適應性最廣的作物，其產量在包括玉米、水稻和馬鈴薯在內的重要農作物中位居第一。但是小麥的病蟲害可以對產量造成嚴重的損失，如小麥吸漿蟲，在嚴重發生的田塊產量損失在80％以上，因此對農業生產造成的損失十分巨大。利用化學藥劑進行病蟲害的防治工作，雖然能取得很大的成效，但是卻會造成環境的污染和生態平衡的破壞。利用小麥的抵御病蟲害侵襲相關的茉莉酸誘導蛋白基因，通過基因工程手段，調節基因的表達活性，從而增加小麥抵御病蟲害的能力，對于獲得抗病蟲害的小麥新品種有著十分重要的意義，因而在植物基因工程技術領域中具有廣泛的應用潛力。
發明內容
本發明通過提供一種在小麥中與抵御病蟲害侵襲相關的茉莉酸誘導蛋白基因，和由其編碼的蛋白質，達到調節小麥的防御反應，增強小麥抵御病蟲害侵襲的目的。本發明的另一個目的是提供可將上述基因翻譯成完整蛋白質的表達質粒。
本發明的一個目的是提供一種小麥中與抵御病蟲害侵襲相關的茉莉酸誘導蛋白。
本發明的另一個目的是提供一種編碼小麥中與抵御病蟲害侵襲相關的茉莉酸誘導蛋白的基因。
本發明的再一個目的是提供一種含有本發明的基因并將基因翻譯成活性蛋白質的表達質粒，以及可以轉化植物細胞的植物表達載體。
本發明提供了一種編碼小麥中與抵御病蟲害侵襲相關的茉莉酸誘導蛋白基因的DNA序列，它選自下組(1).編碼SEQ ID NO2的氨基酸序列的DNA序列或(2).與(1)的序列能夠雜交，并能夠編碼小麥中與抵御病蟲害侵襲相關的茉莉酸誘導蛋白的DNA序列。
所述的雜交條件是指，將雜交膜置于預雜交液(0.25mol/L磷酸鈉緩沖液，pH 7.2，7％SDS)中，65℃預雜交30min；棄預雜交液，加入雜交液(0.25mol/L磷酸鈉緩沖液，pH7.2，7％SDS，同位素標記的核苷酸片段)，65℃雜交12hr；棄雜交液，加入洗膜液I(20mmol/L磷酸鈉緩沖液，pH7.2，5％SDS)，65℃洗膜2次，每次30min；加入洗膜液II(20mmol/L磷酸鈉緩沖液，pH7.2，1％SDS)，65℃洗膜2次，每次30min。
本發明的DNA序列為編碼小麥中一種與抵御病蟲害侵襲相關的茉莉酸誘導蛋白基因(Ta-JA1)的全長cDNA，命名為Ta-JA1。該序列共由1158個堿基組成，其中，5’端未翻譯區包括57個堿基，3’端未翻譯區包括186個堿基(其中包括17個堿基組成的PolyA)，編碼區由915個堿基組成，如圖SEQ ID NO1所示的序列，該序列中A占27.43％(251個)，C占23.50％(215個)，G占25.36％(232個)，T占23.72％(217個)，A+T占51.15％(468個)，C+G占48.85％(447個)。在國際基因序列數據庫(GenBank\EMBL\DDBJ)中的基因同源性分析表明，Ta-JA1基因是小麥中未曾報道的新基因，它與從大麥(Hordeum vulgare L.)中分離出的一個未鑒定基因具有同源性。
本發明還提供了一種由上述的DNA序列編碼的氨基酸序列。這種氨基酸序列優選具有SEQ ID NO2所示的序列。該蛋白質序列包括304個氨基酸，如SEQ ID NO2所示。在該蛋白質序列中，疏水氨基酸占104個，親水氨基酸占90個，堿性氨基酸占25個，酸性氨基酸占22個，該蛋白質的分子量為32.7KD，等電點為8.7。該蛋白質是國際上未曾報道的新蛋白質。
本發明還提供了一種含有上述DNA序列的表達載體，以及另外一種植物表達載體。它可以是含有上述的DNA序列的表達載體pET-29b(Novagen，USA)，或者用于植物細胞轉化的含有actin啟動子和Bar選擇基因標記的載體pTa-JA1(來源于pBluescriptSK，Stratagene Co，USA)。這兩種表達載體的構建過程如下在Ta-JA1基因編碼區兩側合成引物，并分別引入HindIII及NotI酶切位點，其引物序列分別為
5’-引物5’-CACAAGCTTATGGCCAATTTCCAGATAAC-3’，3’-引物5’-AATTGAATGCGGCCGCTTAGAGAGGGTGCACGTAG-3’。
經過PCR擴增出Ta-JA1基因的全長編碼區，以HindIII與NotI雙酶切下，連接到表達載體pET-29b的相應酶切位點上(見圖1)，通過酶切和序列分析證明此表達載體的完整性和正確性。將表達載體轉化大腸桿菌BL21菌株，經過IPTG誘導后，將大腸桿菌蛋白經SDS-PAGE凝膠電泳分析，并將蛋白質經過電轉移轉到硝酸纖維素膜上，利用S-Tag特異性抗體進行免疫檢測，證明Ta-JA1基因已在大腸桿菌中翻譯出正確的蛋白質。
經過PCR擴增出Ta-JA1基因的全長編碼區，以HindIII與NotI雙酶切下，連接到含有Actin啟動子和Bar選擇基因標記的載體(見圖2)，通過酶切分析證明此表達載體的完整性和正確性。此植物表達載體可以通過基因槍法或花粉管通道轉化植物細胞，從而提高其抵御病蟲害侵襲的能力。
分別從小麥的根、莖、葉組織中提取總RNA，經過電泳后用毛細管法轉移到尼龍膜上，與小麥Ta-JA1基因探針雜交，放射自顯影檢測雜交結果，以rRNA探針為對照使雜交信號標準化。以此方法檢測Ta-JA1基因在小麥不同部位的表達。得到的結果表明該基因在小麥莖中表達，在根、葉等組織部表達。
本發明提供了一種與小麥抵御病蟲害侵襲相關的茉莉酸誘導蛋白基因和與其相關的蛋白質產物。應當指出的是，在本發明技術領域的一般技術人員應用本發明的Ta-JA1基因或其Ta-JA1基因表達質粒，通過轉基因生物技術，構建植物表達載體，用構建的植物表達載體轉化植物細胞和將轉化的植物細胞培育成植株，轉化是通過農桿菌介導、基因槍法或花粉管通道，是能夠實現本發明的目的，可開發出具有增強抵御病蟲害能力的轉基因植物。正如本發明的一個優選實施例所表明的那樣，利用轉基因獲得小麥新品系，增加小麥營養生長組織中茉莉酸誘導蛋白的合成，增強其抵御病蟲害侵染的能力。
為此，本發明的最后的一個重要目的是提供一種培育抗病蟲害的轉基因植株的方法，包括用上述DNA序列構建植物表達載體；用構建的植物表達載體轉化植物細胞；和將轉化的植物細胞培育成植株。在本發明的一個實施方案中，所述植物表達載體是pTa-JA1。
圖1表示Ta-JA1基因表達質粒；圖2表示Ta-JA1基因的植物表達載體pTa-JA1；圖3包含Ta-JA1基因編碼區序列(SEQ ID1，58-962)的cDNA序列；圖4Ta-JA1基因編碼的氨基酸序列(SEQ ID2)。
具體實施例方式
實施例一、小麥中茉莉酸誘導蛋白基因探針的分離及序列分析將小麥(Triticum aestivum L，品種為H4564，中國科學院植物研究所)種植于溫室中，正常澆水和施肥，至生長到2-3個節間，采集根、莖、葉組織，用TRI試劑(Molecular Research Center，Inc，Cincinnati，USA)提取總RNA，用PolyAT tractmRNA Isolation試劑盒(Promega公司，Madison，USA)分離Poly(A)+RNA，用紫外分光光度計分析RNA的含量和純度。
反轉錄合成cDNA第一條鏈的條件為Poly(A)+RNA 1ug，5μmol/L引物5’-GACTCGAGTCGACATCGA(T)17-3’，0.5mmol/L dNTP，50單位RNasin，65℃保溫10分鐘，在冰上冷卻后，加入200U SuperScriptTMIIRNase H--Reverse Transcriptase(Gibco公司，Grand Island，NY，USA)，42℃保溫1小時，加EDTA至終濃度10mM，并于95℃保溫10分鐘，在冰上冷卻。
第一輪PCR的引物為J1J15’-GGnwsnAAyCArAAyCAr-3’，J25’-GACTCGAGTCGACATCG-3’條件為3μL cDNA反應液，1μmol/L引物，0.4mmol/L dNTP，2.5U Taq DNA聚合酶(Gibco公司，Grand Island，NY，USA)，于95℃變性5分鐘，50℃復性2分鐘，72℃延伸40分鐘，然后進行40個循環(95℃ 1分鐘，55℃ 1分鐘，72℃ 3分鐘)，最后72℃延伸10分鐘。
第二輪PCR引物為J35’-AThTGyGAyGGnCCnwsnCC-3’，J45’-AAnGGnCCrTAnGTyTTnAC-3’，條件為使用1μL第一輪PCR反應液，于95℃變性5分鐘，其它反應同第一輪。PCR產物經1.0％瓊脂糖凝膠電泳，采用GlassMAXDNA Isolation試劑盒(Gibco公司，GrandIsland，NY，USA)純化電泳產物。純化后連接在pGEM-T Easy載體上(Promega公司，Madison，USA)。連接條件為16℃ 12小時。轉化受體菌為E.coli DH5α，感受態細胞的制備采用CaCl2處理方法(Sambrook，J.等(eds)，Molecular cloningA laboratory manual，2nded.，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1989)。將連接產物加入到感受態細胞中，冰浴30分鐘，42℃熱激90秒，加入LB液體培養基，37℃保溫45分鐘，涂布在含氨芐青霉素(100ug/ml)和X-Gal(20ug/ml)的LB平板上，37℃培養過夜。白色克隆接種于LB液體培養基上(含氨芐青霉素100ug/ml)，37℃培養過夜，提取質粒，進行酶切分析后，以ABI 377 DNA序列分析儀進行序列分析，確定小麥的茉莉酸誘導蛋白基因探針。
序列分析的結果表明，所分離的探針具有623個核苷酸，與大麥(Hordeum vulgare L.)中分離出的一個未鑒定功能的茉莉酸誘導蛋白基因具有同源性。
實施例二、小麥茉莉酸誘導蛋白基因的篩選和序列分析以小麥莖Poly(A)+RNA為模板，以ZAP載體(Stratagene公司，La Jolla，CA，USA)合成cDNA，經過體外包裝，構建成小麥莖的cDNA文庫。取50ng探針DNA，加50uCi32P-dCTP進行標記，37℃保溫1小時，加EDTA至終濃度10mM終止反應。探針通過Sephadex G-50柱后，于100℃煮沸10分鐘，立即在冰上冷卻，進行雜交。
取50000pfu鋪平板，并將其轉移到硝酸纖維素膜上，于0.5M NaOH加1.5M NaCl變性2分鐘，1.5M NaCl加0.5M Tris-HCl(pH8.0)復性5分鐘，0.2M Tris-HCl(pH7.5)加2 x SSC漂洗30秒，將膜夾在兩層Whatman濾紙中，80℃真空烘烤2小時，之后加入雜交液(6 x SSC，5 x Denhardt，0.5％SDS，100μg/mL魚精DNA，50％甲酰胺)，42℃保溫2小時，加入標記的探針，42℃雜交過夜，經過6 x SSC加0.1％ SDS室溫下洗兩次，每次30分鐘，再用0.1 x SSC加0.1％ SDS于65℃洗兩次，每次20分鐘，之后于-80℃下放射自顯影，確定陽性克隆后，將噬菌斑取下，于SM溶液中4℃提取過夜，再按同樣的程序進行兩輪篩選。
對于獲得的陽性噬菌斑，按Stratagene公司提供的方法將其轉化為質粒DNA，經過酶切分析后，采用ABI 377 DNA序列分析儀進行序列分析。
測得的DNA序列如SEQ ID NO1所示，將其命名為Ta-JA1。它是小麥中茉莉酸誘導蛋白基因，是迄今小麥中尚未報道的新基因。
實施例三、小麥茉莉酸誘導蛋白基因編碼蛋白質的翻譯人工合成一對引物5’-引物5’-CACAAGCTTATGGCCAATTTCCAGATAAC-3’，3’-引物5’-AATTGAATGCGGCCGCTTAGAGAGGGTGCACGTAG-3’。
在引物兩端分別引入HindIII及NotI酶切位點，以Ta-JA1基因為模板，進行PCR擴增，擴增條件10ng DNA，1μmol/L引物，0.4mmol/L dNTP，2.5U Taq DNA聚合酶(Gibco公司，Grand Island，NY，USA)。于95℃變性5分鐘，然后進行30個循環(95℃ 1分鐘，55℃ 1分鐘，72℃1.5分鐘)，最后72℃延伸10分鐘。
PCR產物經1.0％瓊脂糖凝膠電泳，采用GlassMAXDNA Isolation試劑盒(Gibco公司，Grand Island，NY，USA)純化電泳產物，用HindIII及NotI雙酶切后，連接在載體pET-29b(Novagen Company，USA；Cat No.69872-3)上，轉化大腸桿菌BL21感受態細胞，轉化細胞冰浴30分鐘后，42℃熱激50秒，加入LB液體培養基，37℃保溫45分鐘，涂布在含卡那霉素(50ug/ml)的LB平板上。將抗性菌落于LB液體培養基(含卡那霉素50ug/ml)中37℃震蕩培養過夜，再進行1/100稀釋后，37℃震蕩培養2小時，加入IPTG至終濃度1mM，繼續培養3小時，12000g離心10分鐘，收集菌體，菌體加入100ul裂解液(50mM Tris-HCl pH6.8，100mM二硫蘇糖醇，2％SDS，0.1％溴酚藍，10％甘油)，100℃煮沸5分鐘，菌體蛋白按常規方法進行SDS-PAGE電泳(凝膠濃度12％)，以常規電轉移法將蛋白轉移到硝酸纖維素膜上(轉移時間4小時)，膜在磷酸生理鹽緩沖液(加0.05％ Tween20，5％脫脂奶粉)洗滌過夜，然后加入S-Tag抗體(Novagen，USA)，震蕩2小時，再用磷酸生理鹽緩沖液(加0.05％ Tween20)洗滌6次，每次10分鐘，再加入過氧化物酶標記的羊抗兔抗體(Bio-Rad，USA)，在磷酸生理鹽緩沖液(加0.05％ Tween20)中保育1小時，用磷酸生理鹽緩沖液(加0.05％ Tween20)洗滌6次，每次10分鐘，加入顯色劑(ECL，Amersham)進行顯色，結果顯示小麥茉莉酸誘導蛋白基因能在細菌中表達出預期的蛋白質，其序列如SEQ ID NO 2所示。
實施例四、小麥組織中Ta-JA1基因表達產物的檢測采用Northern blot雜交檢測小麥不同組織中的Ta-JA1基因的表達產物，從不同小麥組織中分離的總RNA樣品，按常規方法在1.4％瓊脂糖/甲醛變性凝膠電泳上分離，以20 x SSC按毛細管法轉移到尼龍膜上(轉移時間12小時)，尼龍膜夾在兩層Whatman濾紙中，80℃真空烘烤2小時，將膜放在雜交瓶中，之后加入雜交液(6 x SSC，5 x Denhardt，0.5％ SDS，100μg/mL魚精DNA，50％甲酰胺)10ml，42℃預雜交2小時，加入標記的茉莉酸誘導蛋白基因探針，42℃雜交過夜，經過6 x SSC加0.1％ SDS室溫下洗兩次，每次30分鐘，再用0.1 x SSC加0.1％ SDS于65℃洗兩次，每次10分鐘，于-80℃下放射自顯影一周。顯影后的膜加入0.1 x SSC加0.1％ SDS于95℃洗兩次，每次15分鐘，之后加入含有18S rRNA探針的雜交液，42℃雜交過夜。將膜取出，按相同的程序洗膜，于-80℃下放射自顯影1小時。
結果顯示Ta-JA1基因在正常小麥植株中只在莖中表達，在根和葉中不表達。
實施例五、Ta-JA1蛋白的結構和功能分析對Ta-JA1所編碼的蛋白質進行結構和構象分析，結果表明這種蛋白主要有β折片(extend strand)和無規則的卷曲(random coil)組成，很少有α螺旋結構。整個蛋白質分為兩個結構域，在45至145位的氨基酸殘基組成一個對病害反應的結構域，在170至300位的氨基酸殘基組成一個植物凝集素(jacalin-related domain)的結構域，在其164位的甘氨酸，285位的甘氨酸和295位的天門冬氨酸構成了與甘露糖結合的結合位點。Ta-JA1蛋白質的這些特點，使其可以在對病蟲害侵襲做出反應的同時，發揮其抵御病蟲害在植物細胞中進一步擴散的功能。因此，在各種植物組織中過量表達這種蛋白質，可以明顯增強這些組織抵御病蟲害侵襲的能力，所以此基因和蛋白質在禾本科作物的抗性育種方面具有重要意義。
序列表<110>中國科學院植物研究所<120>小麥茉莉酸誘導蛋白、其編碼基因及培育抗逆植物的方法<130>IB050696<160>2<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>915<212>DNA<213>小麥<400>1atggccaatt tccagataac tccccgcgca gcgttcgtgg agagcaatga gctcaacttc 60cgcagcctgt accttttcca cactcccctt ggttcaaacc agaatcagtc aggcataata120gactcgaatg ttactaccgg tttgggtgcg acagtcgtta acaactggcc gatatgtgat180ggccctagcc ccggcgccac cgttattgcg cgtgcacaag gcctgcatat ctatgccggt240aactggcaga atactttcag cataacattc gaggttgaaa ggtttaaggg atcaacgctt300caagtgatgg ggatatccgt cgaagaaggt gagtgggcta ttgttggtgg gacaggacag360ttcgctatgg cgatcggtgt catctacaaa aagttccatg aacaaaggag cgatggtaac420atcatagaac tcactgtcca tggattttgt cccatgctga aaggttcaca gagccttcgc480acaaaggttg gaccatgggg tggaaatgga ggctcagata aagacatcgt cgaggcacca540agacgtctag agagcatcac agttagcagc ggcactatca ttgattcaat caaattttct600tatgtcgacc aagctggtca gaagcgcact gttggaccct ggggaggttc tggaggaaaa660caaaatacgt tcgtactcgg cacttctgag tttgtgaagg aagtttctgg aacattcggc720ctttatggca gagacaacca caacataata acatcactga aatttgtcac caacgtgaag780acatacgggc ctttcggaca agcgaaggga accactttca ccataccagt gcaaaagaat840agcagcatcg tgggcttctt cggacgcagt gggatatatc tcgatgcact tggtgtctac900gtgcaccctc tctaa 915<210>2<211>304
<212>PRT<213>小麥<400>2Met Ala Asn Phe Gln Ile Thr Pro Arg Ala Ala Phe Val Glu Ser Asn1 5 10 15Glu Leu Asn Phe Arg Ser Leu Tyr Leu Phe His Thr Pro Leu Gly Ser20 25 30Asn Gln Asn Gln Ser Gly Ile Ile Asp Ser Asn Val Thr Thr Gly Leu35 40 45Gly Ala Thr Val Val Asn Asn Trp Pro Ile Cys Asp Gly Pro Ser Pro50 55 60Gly Ala Thr Val Ile Ala Arg Ala Gln Gly Leu His Ile Tyr Ala Gly65 70 75 80Asn Trp Gln Asn Thr Phe Ser Ile Thr Phe Glu Val Glu Arg Phe Lys85 90 95Gly Ser Thr Leu Gln Val Met Gly Ile Ser Val Glu Glu Gly Glu Trp100 105 110Ala Ile Val Gly Gly Thr Gly Gln Phe Ala Met Ala Ile Gly Val Ile115 120 125Tyr Lys Lys Phe His Glu Gln Arg Ser Asp Gly Asn Ile Ile Glu Leu130 135 140Thr Val His Gly Phe Cys Pro Met Leu Lys Gly Ser Gln Ser Leu Arg145 150 155 160Thr Lys Val Gly Pro Trp Gly Gly Asn Gly Gly Ser Asp Lys Asp Ile165 170 175Val Glu Ala Pro Arg Arg Leu Glu Ser Ile Thr Val Ser Ser Gly Thr180 185 190Ile Ile Asp Ser Ile Lys Phe Ser Tyr Val Asp Gln Ala Gly Gln Lys195 200 205Arg Thr Val Gly Pro Trp Gly Gly Ser Gly Gly Lys Gln Asn Thr Phe
210 215 220Val Leu Gly Thr Ser Glu Phe Val Lys Glu Val Ser Gly Thr Phe Gly225 230 235 240Leu Tyr Gly Arg Asp Asn His Asn Ile Ile Thr Ser Leu Lys Phe Val245 250 255Thr Asn Val Lys Thr Tyr Gly Pro Phe Gly Gln Ala Lys Gly Thr Thr260 265 270Phe Thr Ile Pro Val Gln Lys Asn Ser Ser Ile Val Gly Phe Phe Gly275 280 285Arg Ser Gly Ile Tyr Leu Asp Ala Leu Gly Val Tyr Val His Pro Leu290 295 300
權利要求
1.一種編碼小麥中與抵御病蟲害侵襲相關的茉莉酸誘導蛋白的DNA序列，其特征在于具有(1)編碼SEQ ID NO2的氨基酸序列的DNA序列或(2)與(1)的DNA序列能夠雜交，并能夠編碼完整的茉莉酸誘導蛋白的DNA序列。
2.按照權利要求1所述的DNA序列，它具有SEQ ID NO1所示的序列。
3.一種由權利要求1或2所述的DNA序列編碼的氨基酸序列。
4.按照權利要求3所述的氨基酸序列，它具有SEQ ID NO2所示的序列。
5.一種含有權利要求1或2所述的DNA序列的表達載體。
6.按照權利要求5所述的表達載體，它是含有權利要求1或2所述的DNA序列的表達載體pET-29b。
7.按照權利要求5所述的表達載體，它是一種植物表達載體。
8.按照權利要求7所述的表達載體，它是表達載體pTa-JAl。
9.一種培育抗病蟲害的轉基因植株的方法，包括用權利要求1或2所述的DNA序列構建植物表達載體；用構建的植物表達載體轉化植物細胞；和將轉化的植物細胞培育成植株。
10.按照權利要求9的轉基因植株的方法，其中所述植物表達載體是pTa-JAl。
全文摘要
本發明提供了一種與抵御病蟲害侵襲相關的茉莉酸誘導蛋白、編碼該蛋白的基因和含有該基因的植物表達載體。本發明還提供了利用本發明的基因培育抗病蟲害的轉基因植株的方法。
文檔編號A01H4/00GK1657624SQ20051005269
公開日2005年8月24日 申請日期2005年3月3日 優先權日2005年3月3日
發明者馬慶虎, 田斌 申請人:中國科學院植物研究所