專利名稱：大彈涂魚的人工繁殖方法
技術領域：
本發明涉及一種魚類的人工繁殖方法，尤其是涉及一種大彈涂魚的人工繁殖方法。
背景技術：
大彈涂魚(Boleophthalmus pectinirostris)屬于鱸形目(Perciformes)，鰕虎魚亞目(Gobiodei)，彈涂魚科(Periophthalmidae)，大彈涂魚屬(Boleophthalmus)。大彈涂魚分布于中國、朝鮮、日本、緬甸和馬來半島，在中國主要分布于江蘇、浙江、福建、臺灣、廣東和廣西沿海。大彈涂魚棲息于河口港灣潮間帶淤泥灘涂及紅樹林區，屬暖水廣溫廣鹽性穴居魚類，其幼魚和成魚主要攝食底棲硅藻，具有食物鏈短、病害少、成活率高、養殖成本低、管理方便、不污染環境以及活魚耐運輸等特點。大彈涂魚肉味鮮美，營養豐富，具有滋補強身的功效，含有常見的16種氨基酸，其中8種為人體必需的氨基酸(王軍，蘇永全，廈門大學學報(自然科學版)，1994，33(1)96-99)，深受沿海群眾的喜愛。近幾年市場需求量很大，是一種具有市場前景的灘涂養殖經濟魚類。
我國養殖的大彈涂魚苗種一直都是采自天然海區灘涂。但由于近20多年來沿海灘涂大量圍墾，大彈涂魚的棲息地面積不斷減少，加上環境污染以及濫捕等原因，自然海區大彈涂魚野生苗數量逐年減少，菌種價格逐年上漲，苗種的供求矛盾突出，養殖成本增加，嚴重阻礙了大彈涂魚養殖業的發展。
為了解決苗種問題，我國臺灣地區最早于20世紀70年代開展大彈涂魚人工繁殖和育苗試驗，以后中斷研究(廖一久，中國水產(臺灣)，1986，39823-27)。張其永等于20世紀80年代進行大彈涂魚人工繁殖和育苗研究，利用潮間帶的親魚經激素催產后人工授精，培育出7000尾達到放養規格的苗種(張其永，洪萬樹，戴慶年等，廈門大學學報(自然科學版)，1987，26(3)366-373；張其永，洪萬樹，戴慶年等，Aquaculture，1989，83375-385)。20世紀90年代初，倪勇等進行大彈涂魚人工繁殖和育苗中間試驗，培育出7000多尾魚苗(倪勇，張其永，陳德富等，海洋漁業，1993，15(2)56-62)。在過去20年里，大彈涂魚的人工繁殖和育苗技術基本停留在一個水平上，未能取得明顯的進展。其主要原因是在親魚選擇、催產方法、人工授精、受精卵孵化以及誘導產卵等方面仍然存在一些問題。
發明內容
本發明的目的在于針對已有大彈涂魚的人工繁殖和育苗技術所存在的問題，提供一種利用大彈涂魚生殖的生理和生態特性，采用內分泌調控和模擬生殖環境的方法，提高大彈涂魚親魚的催熟率、產卵量和受精率的人工繁殖方法。
本發明的步驟為1)親魚催熟在生殖季節選取腹部膨大、尿殖乳突圓形外突呈鮮紅色的雌性親魚和尿殖乳突呈三角形突起的雄性親魚，采用激素注射催熟，所說的激素為促黃體素釋放激素類似物(LHRH-A3)和人絨毛膜促性腺激素(HCG)中的一種或二種混合物，每次注射劑量為LHRH-A30.5～1μg+HCG 100～150IU/尾，或LHRH-A31.0～2.0μg/尾，或HCG 100～150IU/尾，雌、雄親魚同等劑量，注射部位為胸鰭基部，催熟效果良好；2)性信息素誘導親魚產卵經激素催熟的親魚，按雌∶雄＝1∶1配對放入產卵池內，產卵池底部設產卵管道，在產卵管道內吊掛性類固醇激素17α-羥孕酮(17α-P)或17α，20β雙羥孕酮(17α，20β-P)等性信息素，誘導親魚進入產卵管道內交配產卵，實現生殖同步化，提高了雌魚的產卵率、產卵量和成熟卵的受精率；3)人工授精親魚經激素催熟后，采用半干法進行人工授精，人工授精前先擠出雌魚卵子檢查其成熟度，選取具有以下特征的成熟卵用于人工授精(1)卵子圓形而透明；(2)多油球且集中發亮；(3)卵膜外側的粘著絲發達；授精時解剖雌魚取出卵巢，撕開卵巢膜，分散卵子；同時解剖雄魚取出精巢和貯精囊囊，剪成小塊，置于研缽內研磨，加少許海水激活精子，然后將精液澆于卵群上，攪動讓其充分受精，然后以清潔海水洗滌3～4次，移入孵化容器中孵化。
本發明通過選擇親魚催產所需的激素種類、適宜的劑量以及有效的催產方法，同時利用大彈涂魚生殖的生理和生態特性，選擇能夠獲得高受精率的成熟卵，并采用內分泌調控和模擬生殖環境的方法，以性信息素誘導親魚交配產卵以及采用人工受精等方法，大大提高了親魚的催熟率、產卵量和受精率，使得大彈涂魚人工繁殖技術取得了突破性進展。
具體實施例方式
下面通過實施例對本發明作詳細說明。
實施例1生殖季節選取健壯活潑、性腺發育至第IV期的養殖親魚。親魚體長10.5～13.0cm，體重17.3～32.0g。雌性親魚腹部膨大，尿殖乳突圓形外突呈鮮紅色；雄性親魚尿殖乳突呈三角形突起。親魚年齡為1～2齡。產卵池面積10m2/口，池深1.5m，池底和池壁鋪設黑色瓷磚，避免親魚擦傷。池面用遮陽網遮光，保持弱光環境。產卵管道由陶瓷材料制成，管道長50cm，寬9.5cm，高7.5cm。分為上下2部分，上半部內壁粗糙，有利于受精卵附著；下半部內壁涂釉光滑，有利于親魚的活動和交配產卵。管道上下2部分可分開或組合，方便檢查親魚產卵情況。
1、親魚催熟分3組做對比實驗，每組雌魚30尾。第1組以LHRH-A3和HCG(購自寧波市激素制品有限公司)兩種激素混合注射雌、雄親魚，分兩次胸腔注射，每次注射劑量為LHRH-A31μg+HCG 100IU，雌、雄親魚注射同等劑量，兩次注射間隔48h。第2組和第3組分別單獨注射LHRH-A31μg或HCG100IU，只注射1次。結果表明(見表1)，采用混合激素和2次注射的方法，其催熟率均明顯高于單種激素1次注射。
表1不同注射方法對大彈涂魚雌魚的催熟效果
2、性信息素誘導產卵17α-P和17α，20β-P(購自美國Sigma公司)經甲醇溶解，分別取100μg裝入塑料管內(2mL)，氮氣吹干后加生理鹽水至1mL，管口塞少許棉花，吊掛在產卵管道上半部內表面，激素經棉花滲透到管道內的水體中。
經激素催熟的親魚，按雌、雄1∶1配對放入產卵池內。親魚入池后48h檢查產卵管道內親魚的產卵情況，以面積法計算產卵量，胚胎發育至原腸期計算受精率。誘導產卵期間產卵池上方覆蓋雙層遮陽網，保持弱光環境，水體不充氣，水溫25.0-27.0℃，鹽度15-20。結果表明(見表2)，管道內吊掛性信息素的實驗組，其管道產卵率、總產卵量和平均受精率均顯著高于對照組。
表2性信息素誘導大彈涂魚產卵結果
3、人工授精親魚注射激素催熟后，雌魚腹部膨大，此時就可挑選卵子發育符合受精標準的雌親魚用于人工授精。首先擠出雌魚卵子檢查其成熟度，如果卵子具有圓形而透明、多油球且集中發亮以及粘著絲發達等特征，就開始進行人工授精。
人工授精操作方法一邊解剖雌魚，選取符合受精標準的成熟卵置于大規格的培養皿(直徑12cm)內；另一邊解剖成熟雄魚，取出精巢和貯精囊，放入研缽內，用剪刀切成小塊，經研磨后加入少許海水激活精子。將激活后的精子澆在卵群上，然后用羽毛輕輕攪動卵群，使其充分受精。3-5min后用清潔海水洗滌2-3次，除去多余精子和雜質，將受精卵移入孵化容器中孵化。
將雌魚卵子的成熟度分為3類進行人工授精。第1類為卵子圓形透明、多油球且集中發亮、粘著絲發達；第2類為卵子圓形透明、多油球但分散微亮，粘著絲中等發達；第3類為卵子圓形稍透明、多油球但分散微亮，粘著絲不發達。各類卵子的親魚數為20尾。實驗結果表明，第1類卵子的平均受精率為76.6％，第2類為42.0％，第3類為4.9％。第1類卵子的平均受精率均顯著高于第2類和第3類。
實施例2生殖季節選取健壯活潑、性腺發育至第IV期的野生親魚。親魚體長10.0-12.2cm，體重17.0-28.5g。雌性親魚腹部膨大，尿殖乳突圓形外突呈鮮紅色；雄性親魚尿殖乳突呈三角形突起。親魚年齡為1-2齡。產卵池面積5m2/口，池深1.5m，池底和池壁鋪設黑色瓷磚，避免親魚擦傷。池面用遮陽網遮光，保持弱光環境。產卵管道同實施例1。
1、親魚催熟同實施例1，分3組做對比實驗，結果見表3，采用混合激素2次注射的催熟率可以達到65％，而單種激素1次注射的催熟率僅為45.0％(LHRH-A3)或40.0％(HCG)。
表3不同注射方法對大彈涂魚雌魚的催熟效果
2、信息素誘導產卵水溫26.5～29.0℃。其他同實施例1。結果見表4，管道內吊掛17α-P或17α，20β-P的實驗組，其管道產卵率、總產卵量和平均受精率分別顯著高于對照組。
表4性信息素誘導大彈涂魚產卵結果
3、人工授精 同實施例1，第1類卵子的平均受精率為86.5％，第2類為52.4％，第3類為6.1％。第1類卵子的平均受精率均顯著高于第2類和第3類。各類卵子的親魚數為25尾。
實施例3生殖季節選取健壯活潑、性腺發育至第IV期的灘涂圍網養殖親魚。親魚體長10.2-12.8cm，體重17.1-31.0g。雌性親魚腹部膨大，尿殖乳突圓形外突呈鮮紅色；雄性親魚尿殖乳突呈三角形突起。親魚年齡為1-2齡。產卵池面積10m2/口，池深1.5m，池底和池壁鋪設黑色瓷磚，避免親魚擦傷。池面用遮陽網遮光，保持弱光環境。產卵管道同實施例1。
1、親魚催熟；同實施例1，分3組做對比實驗，結果見表5，采用混合激素2次注射的催熟率可以達到70.0％，而單種激素1次注射的催熟率僅為43.3％(LHRH-A3)或40.0％(HCG)。
表5不同注射方法對大彈涂魚雌魚的催熟效果
2、性信息素誘導產卵水溫27.5～30.5℃，其他同實施例1，從表6可以看出，管道內吊掛17α-P或17α，20β-P的實驗組，其管道產卵率、總產卵量和平均受精率分別顯著高于對照組(表6)。
表6性信息素誘導大彈涂魚產卵結果
3、人工授精同實施例1。第1類卵子的平均受精率為81.4％，第2類為45.8％，第3類為5.2％。第1類卵子的平均受精率均顯著高于第2類和第3類。各類卵子的親魚數為20尾。
權利要求
1.大彈涂魚的人工繁殖方法，其特征在于其步驟為1)親魚催熟生殖季節選取腹部膨大、尿殖乳突圓形外突呈鮮紅色的雌性親魚和尿殖乳突呈三角形突起的雄性親魚，采用激素注射催熟，所說的激素為促黃體素釋放激素類似物LHRH-A3和人絨毛膜促性腺激素HCG中的一種或二種混合物，每次注射劑量為LHRH-A31μg+HCG 100IU/尾，或LHRH-A31.0～2.0μg/尾，或HCG 100～150IU/尾，雌、雄親魚同等劑量，注射部位為胸鰭基部；2)性信息素誘導親魚產卵經激素催熟的親魚，按雌∶雄＝1∶1配對放入產卵池內，產卵池底部設產卵管道，在產卵管道內吊掛性類固醇激素17α-羥孕酮17α-P或17α，20β雙羥孕酮17α，20β-P性信息素，誘導親魚進入產卵管道內交配產卵；3)人工授精親魚經激素催熟后，采用半干法進行人工授精，人工授精前先擠出雌魚卵子檢查其成熟度，選取具有以下特征的成熟卵用于人工授精a卵子圓形而透明；b多油球且集中發亮；c卵膜外側的粘著絲發達；授精時解剖雌魚取出卵巢，撕開卵巢膜，分散卵子；同時解剖雄魚取出精巢和貯精囊囊，剪成小塊，置于研缽內研磨，加少許海水激活精子，然后將精液澆于卵群上，攪動讓其充分受精，然后以清潔海水洗滌3～4次，移入孵化容器中孵化。
2.如權利要求1所述的大彈涂魚的人工繁殖方法，其特征在于產卵池池底和池壁鋪設黑色瓷磚，池面用遮陽網遮光，保持弱光環境。
3.如權利要求1所述的大彈涂魚的人工繁殖方法，其特征在于產卵管道由陶瓷材料制成，分為上下2部分，上半部內壁粗糙，下半部內壁涂釉光滑。
4.如權利要求3所述的大彈涂魚的人工繁殖方法，其特征在于產卵管道上下2部分分開或組合。
全文摘要
大彈涂魚的人工繁殖方法涉及一種魚類的人工繁殖方法，尤其是涉及一種大彈涂魚的人工繁殖方法。提供一種利用大彈涂魚生殖的生理和生態特性，采用內分泌調控和模擬生殖環境的方法，提高大彈涂魚親魚的催熟率、產卵量和受精率的人工繁殖方法。步驟為采用激素注射催熟親魚，所說的激素為促黃體素釋放激素類似物(LHRH－A
文檔編號A01K61/00GK1751666SQ20051011836
公開日2006年3月29日 申請日期2005年10月28日 優先權日2005年10月28日
發明者洪萬樹, 張其永, 蔡珠金, 江國強, 陳仕璽, 葉啟旺 申請人:廈門大學