專利名稱：中國塊菌和印度塊菌菌根苗培育方法
技術領域：
本發明涉及一種食用菌菌根苗的人工培育方法，尤其是涉及中國塊菌和印度塊菌菌根苗的培育方法。
背景技術：
塊菌(T.ruffles)為子囊菌類塊菌目(Tuberales)塊菌科(Tuberaceae)塊菌屬(Tuber)，是一類與維管束植物形成共生關系，具有很高經濟及營養價值的地下名貴食用真菌。中國塊菌和印度塊菌為我國特產，主要分布于我國西南各省，出產季節為每年的10月-第2年2月，孢體中實，幼時白色至灰白色，成熟呈黑色，具有清晰的乳白色菌脈，食之味美，含有豐富的蛋白質及多種維生素，尤其是維生素A、維生素B2含量極高。由于中國塊菌和印度塊菌的生長必需與合適的宿主植物根系營共生生活，否則將無法形成子囊果，這就意味著人工栽培塊菌離不開活體宿主植物，因而塊菌人工栽培比較困難，技術含量高，要實現塊菌的人工栽培必須首先突破菌根苗的培育技術。目前國外主要在黑孢塊菌和夏塊菌的菌根苗培育和人工栽培技術方面較為成熟，國內雖然對我國特產的中國塊菌和印度塊菌在生理生態方面的研究較多，但至今卻未見有關對塊菌菌根苗合成培育技術的報道。
發明內容
本發明的目的在于提供一種中國塊菌和印度塊菌菌根苗的人工培育方法，以滿足人類日益增長的高品質的物質生活的需求，具有廣闊的市場前景。
本發明是通過實施如下的技術方案來實現本發明目的。
中國塊菌和印度塊菌菌根苗的培育方法，其特征在于包括如下的工藝步驟A、塊菌菌種的收集在塊菌成熟的季節收集成熟、個頭大、外型好、無損傷、香味相對較濃的中國塊菌和印度塊菌子實體，先用牙刷輕輕洗凈表面泥土，再在75％的酒精中浸泡3min對其表面滅菌，同時再在酒精燈火焰上快速灼燒后與121-126℃高溫高壓下滅菌2小時的河沙混合，并于3-5℃的溫度下冷藏保存備用。
B、供試宿主植物種子的收集收集優質的云南松、華山松及板栗植物種子，云南松和華山松用水選去除空殼后晾干，裝在玻璃罐中常溫儲藏備用；板栗種子水選去除霉爛和不飽滿的種子，晾干表面水分，與濕度為25-35％的潔凈河沙按體積比種子∶河沙＝1∶2的比例混合，裝入紙箱中并置于5℃的冰箱中保存備用。
C、宿主植物種子的處理將步驟B收集的種子用0.1％的高錳酸鉀液浸泡處理30min后，用自來水沖洗去表面殘留的高錳酸鉀溶液，然后再用清水浸泡1-4天，在這期間每天換一次清水。
D、宿主植物的培育將經步驟C處理后的植物種子播入混合基質中，用清水將基質澆透后放置于25℃的恒溫室中進行催芽，待80％以上的種子發芽后再移入溫度為10-35℃的大棚中進行植株培育，同時將基質的濕度保持在50-80％。
所述植物種子播入的混合基質為蛭石與珍珠的混合物，其體積比為蛭石∶珍珠巖＝1∶1。
所述云南松或華山松種子經培育發芽后2-3個月可以進行接種。
所述板栗種子經培育發芽后2個月可以進行接種。
E、塊菌的接種選擇一張潔凈的不銹鋼工作臺，用75％的酒精將桌面擦干凈后，再將滅菌接種基質倒在桌上或已用5％的甲酚皂液浸泡3小時的塑料筐中；選擇長勢好，根系發達的宿主植株，用剪刀剪去主根，放在已滅菌處理過的容器中備用；選擇一只黑色的育苗杯，先在杯中裝入占杯體積1/3的滅菌土，再將植株放入杯中央，用小勺將配制好的塊菌菌劑撒在根上，最后加入滅菌接種基質至距育苗杯邊緣0.5cm處。
所述滅菌接種基質的制備方法為將腐殖土、蛭石、河沙按1∶1∶2的比列混合均勻后，在121-126℃下滅菌2小時即可。
所述塊菌菌劑的配制方法為先稱取一定量的塊菌，將其粉碎成粒徑小于1mm的粉末，再將上述制得的滅菌接種基質用1mm的篩網過篩，然后按塊菌與基質的質量比為1∶9的比例混合均勻。
所述塊菌菌劑一般應現用現配，如果配制好的塊菌菌劑未用完，可暫時存放于3-5℃的冰箱中備用。
所述育苗杯的大小為10*15cm。
所述塊菌菌劑的接種量為0.5-2g/株。
F、接種菌根苗的培育將經步驟E已接種過塊菌的植株放置于溫度為10-35℃的潔凈大棚中，每隔2-4天澆一次自來水，并使育苗基質的濕度保持在50-80％，經6個月的培育后即可形成塊菌菌根苗。
所述塊菌菌根苗的檢測結果如下采用正交抽樣檢測的方式，每個樹種重復檢測三次，統計塊菌菌根的合成情況和生長情況，塊菌檢測結果顯示接種塊菌的菌根感染率最低為95％，最高可達100％，接種塊菌合成菌根后能明顯促進植物的生長。接種塊菌的菌根形態多為棒狀、二叉狀、多叉狀和珊瑚狀，菌根初期，端部呈白色或淺色，之后顏色逐漸變深呈淺肉色或淺棕色；在顯微鏡下可清晰看到表面有半透明的晶狀體的結構，晶狀體不分叉無序地長在菌根表面；菌根表層形成哈蒂氏網層的鞘細胞組織。
本發明培育方法清楚、簡單，且成本低，接種塊菌的菌根感染率高，從而解除了野生中國塊菌和印度塊菌因大量采挖可能瀕臨滅絕的后患，同時還滿足了人類日益增長的高品質的物質生活需求，具有廣闊的市場前景。
具體實施例方式
實施例1一種中國塊菌的培育方法，其特征在于包括如下的工藝步驟A、塊菌菌種的收集在塊菌成熟的季節收集成熟、個頭大、外型好、無損傷、香味相對較濃的中國塊菌和印度塊菌子實體，先用牙刷輕輕洗凈表面泥土，再在75％的酒精中浸泡3min對其表面滅菌，同時再在酒精燈火焰上灼燒后與121℃下滅菌2小時的河沙混合，并于3-5℃的溫度下冷藏保存備用。
B、供試宿主植物種子的收集收集優質的云南松種子用水選去除空殼后晾干，裝在玻璃罐中常溫儲藏備用。
C、宿主植物種子的處理將步驟B收集的種子用0.1％的高錳酸鉀液浸泡處理30min后，用自來水沖洗去表面殘留的高錳酸鉀溶液，然后再用清水浸泡3天，每天換一次清水。
D、宿主植物的培育將經步驟C處理后的植物種子播入蛭石與珍珠(體積比1∶1)混合基質中，用清水將基質澆透后放置于25℃的恒溫室中進行催芽，待80％以上的種子發芽后再移入溫度為10-35℃的大棚中進行植株培育，同時將基質的濕度保持在50-80％。
E、塊菌的接種用75％的酒精將不銹鋼桌面擦干凈后，再將滅菌接種基質倒在桌上；選擇長勢好，根系發達已發芽3個月的云南松植株，用剪刀剪去主根，放在已滅菌處理過的容器中備用；選擇一只黑色的育苗杯(10*15cm)，先在杯中裝入占杯體積1/3的滅菌土，再將植株放入杯中央，用小勺將配制好的塊菌菌劑按0.5g/株的接種量撒在根上，最后加入滅菌接種基質至距育苗杯邊緣0.5cm處。
所述滅菌接種基質的制備方法為將腐殖土、蛭石、河沙按1∶1∶2的比列混合均勻后，在121℃下滅菌2小時即可。
所述塊菌菌劑的配制方法為先稱取一定量的中國塊菌，將其粉碎成粒徑小于1mm的粉末，再將上述制得的滅菌接種基質用1mm的篩網過篩，然后按塊菌與基質的質量比1∶9混合。
F、接種菌根苗的培育將經步驟E已接種過塊菌的植株放置于溫度為35℃的潔凈大棚中，每隔2-4天澆一次自來水，并使育苗基質的濕度保持在50-80％，經6個月的培育后即可形成塊菌菌根苗。
所述中國塊菌菌根苗的檢測結果如下采用正交抽樣檢測的方式，每個樹種重復檢測三次，統計塊菌菌根的合成情況和生長情況，塊菌檢測結果顯示接種塊菌的菌根感染率最低為95％，最高可達100％，接種塊菌合成菌根后能明顯促進植物的生長。接種塊菌的菌根形態多為棒狀、二叉狀、多叉狀和珊瑚狀，菌根初期，端部呈白色或淺色，之后顏色逐漸變深呈淺肉色或淺棕色；在顯微鏡下可清晰看到表面有半透明的晶狀體的結構，晶狀體不分叉無序地長在菌根表面；菌根表層形成哈蒂氏網層的鞘細胞組織。
實施例2一種印度塊菌菌根苗的培育方法，其特征在于包括如下的工藝步驟A、塊菌菌種的收集(同實施例1)B、供試宿主植物種子的收集收集優質的華山松種子用水選去除空殼后，晾干裝在玻璃罐中常溫儲藏備用。
C、宿主植物種子的處理(同實施例1)D、宿主植物的培育將經步驟C處理后的華山松植物種子播入蛭石與珍珠(體積比1∶1)的混合基質中，用清水將基質澆透后放置于25℃的恒溫室中進行催芽，待80％以上的種子發芽后再移入溫度為10-35℃的大棚中進行植株培育，同時將基質的濕度保持在50-60％E、塊菌的接種用75％的酒精將不銹鋼桌面擦干凈后，再將滅菌接種基質倒在已用5％的甲酚皂液浸泡3小時的塑料筐中；選擇長勢好，根系發達已發芽2個月的華山松植株，用剪刀剪去主根，放在已滅菌處理過的容器中備用；選擇一只黑色的育苗杯(10*15cm)，先在杯中裝入占杯體積1/3的滅菌土，再將植株放入杯中央，用小勺將配制好的塊菌菌劑按1g/株的接種量撒在根上，最后加入滅菌接種基質至距育苗杯邊緣0.5cm處。
所述滅菌接種基質的制備方法為將腐殖土、蛭石、河沙按1∶1∶2的比列混合均勻后，在125℃下滅菌2小時即可。
所述塊菌菌劑的配制方法為先稱取一定量的印度塊菌，將其粉碎成粒徑小于1mm的粉末，再將上述制得的滅菌接種基質用1mm的篩網過篩，然后按塊菌與基質的質量比1∶9混合。
F、接種菌根苗的培育將經步驟E已接種過塊菌的植株放置于溫度為10-35℃的潔凈大棚中，每隔2-4天澆一次自來水，并使育苗基質的濕度保持在50-60％，經6個月的培育后即可形成塊菌菌根苗。
所述印度塊菌菌根苗的檢測結果同實施例1。
實施例3一種中國塊菌菌根苗的培育方法，其特征在于包括如下的工藝步驟A、塊菌菌種的收集(同實施例1)B、供試宿主植物種子的收集收集優質的板栗植物種子，水選去除霉爛和不飽滿的種子，晾干表面水分，與濕度為30％的潔凈河沙按體積比種子∶河沙＝1∶2的比例混合，裝入紙箱中并置于5℃的冰箱中保存備用。
C、宿主植物種子的處理(同實施例1)D、宿主植物的培育將經步驟C處理后的板栗植物種子播入蛭石與珍珠(體積比1∶1)的混合基質中，用清水將基質澆透后放置于25℃的恒溫室中進行催芽，待80％以上的種子發芽后再移入溫度為10-35℃的大棚中進行植株培育，同時將基質的濕度保持在60-80％。
E、塊菌的接種用75％的酒精將不銹鋼桌面擦干凈后，再將滅菌接種基質倒在桌上；選擇長勢好，根系發達已發芽2個月的板栗植株，用剪刀剪去主根，放在已滅菌處理過的容器中備用；選擇一只黑色的育苗杯(10*15cm)，先在杯中裝入占杯體積1/3的滅菌土，再將植株放入杯中央，用小勺將配制好的塊菌菌劑按2g/株的接種量撒在根上，最后加入滅菌接種基質至距育苗杯邊緣0.5cm處。
所述滅菌接種基質的制備方法為將腐殖土、蛭石、河沙按1∶1∶2的比列混合均勻后，在126℃下滅菌2小時即可。
所述塊菌菌劑的配制方法為先稱取一定量的塊菌，將其粉碎成粒徑小于1mm的粉末，再將上述制得的滅菌接種基質用1mm的篩網過篩，然后按塊菌與基質的質量比1∶9混合。
F、接種菌根苗的培育(同實施例1)所述中國塊菌菌根苗的檢測結果同實施例1。
權利要求
1.中國塊菌和印度塊菌菌根苗的培育方法，其特征在于包括如下工藝步驟A、塊菌菌種的收集在塊菌成熟的季節收集成熟、個頭大、外型好、無損傷、香味相對較濃的中國塊菌和印度塊菌子實體，先用牙刷輕輕洗凈表面泥土，再在75％的酒精中浸泡3min對其表面滅菌，同時再在酒精燈火焰上快速灼燒后與121-126℃下滅菌2小時的河沙混合，并于3-5℃的溫度下冷藏保存備用；B、供試宿主植物種子的收集收集優質的云南松、華山松及板栗植物種子，云南松和華山松用水選去除空殼后晾干，裝在玻璃罐中常溫儲藏備用；板栗種子水選去除霉爛和不飽滿的種子，晾干表面水分，與濕度為25-35％的潔凈河沙按體積比種子∶河沙＝1∶2的比例混合，裝入紙箱中并置于5℃的冰箱中保存備用。C、宿主植物種子的處理將步驟B收集的種子水選去出空殼，用0.1％的高錳酸鉀液浸泡處理30min后，用自來水沖洗去表面殘留的高錳酸鉀溶液，然后再用清水浸泡1-4天，在這期間每天換一次清水；D、宿主植物的培育將經步驟C處理后的植物種子播入混合基質中，用清水將基質澆透后放置于25℃的恒溫室中進行催芽，待80％以上的種子發芽后再移入溫度為10-35℃的大棚中進行植株培育，同時將基質的濕度保持在50-80％。E、塊菌的接種選擇一張潔凈的工作臺，用75％的酒精將桌面擦干凈后，再將滅菌接種基質倒在桌上或已用5％的甲酚皂液浸泡3小時的塑料筐中；選擇長勢好，根系發達的宿主植株，用剪刀剪去主根，放在已滅菌處理過的容器中備用；選擇一只黑色的育苗杯，先在杯中裝入占杯體積1/3的滅菌土，再將植株放入杯中央，用小勺將配制好的塊菌菌劑撒在根上，最后加入滅菌接種基質至距育苗杯邊緣0.5cm處；F、接種菌根苗的培育將經步驟E已接種過塊菌的植株放置于溫度為10-35℃的潔凈大棚中，每隔2-4天澆一次自來水，并使育苗基質的濕度保持在50-80％，經6個月的培育后即長出塊菌菌根苗。
2.根據權利要求1所述的中國塊菌和印度塊菌菌根苗的培育方法，其特征在于步驟D中所述植物種子播入的混合基質為蛭石與珍珠的混合物，其體積比為蛭石∶珍珠巖＝1∶1。
3.根據權利要求1所述的中國塊菌和印度塊菌菌根苗的培育方法，其特征在于所述云南松或華山松種子經培育發芽后2-3個月進行接種。
4.根據權利要求1所述的中國塊菌和印度塊菌菌根苗的培育方法，其特征在于所述板栗種子經培育發芽后2個月進行接種。
5.根據權利要求1所述的中國塊菌和印度塊菌菌根苗的培育方法，其特征在于步驟E中所述滅菌接種基質的制備方法為將腐殖土、蛭石、河沙按1∶1∶2的比例混合均勻后，在121-126℃下滅菌2小時。
6.根據權利要求1或5所述的中國塊菌和印度塊菌菌根苗的培育方法，其特征在于步驟E中所述塊菌菌劑的配制方法為先稱取一定量的塊菌，將其粉碎成粒徑小于1mm的粉末，再將滅菌接種基質用1mm的篩網過篩，然后按塊菌與基質的質量比為1∶9的比例混合均勻。
7.根據權利要求1所述的中國塊菌和印度塊菌菌根苗的培育方法，其特征在于步驟E中所述塊菌菌劑的接種量為0.5-2g/株。
8.根據權利要求1所述的中國塊菌和印度塊菌菌根苗的培育方法，其特征在于植株經接種塊菌后所長出的菌根的形態為棒狀、二叉狀、多叉狀及珊瑚狀。
全文摘要
本發明公開了一種中國塊菌和印度塊菌菌根苗培育方法，工藝步驟包括塊菌菌種的收集、供試宿主植物種子云南松、華山松和板栗的收集、宿主植物種子的處理、宿主植物的培育、塊菌的接種、接種菌根苗的培育及檢測。本發明培育方法清楚、簡單，且成本低，接種塊菌的菌根感染率，從而解除了野生中國塊菌和印度塊菌因大量采挖可能瀕臨滅絕的后患，同時還滿足了人類日益增長的高品質的物質生活需求，具有廣闊的市場前景。
文檔編號A01G31/00GK101061781SQ20071004894
公開日2007年10月31日 申請日期2007年4月23日 優先權日2007年4月23日
發明者唐平, 楊榮喜, 柳成益, 蔣祺, 蘭海, 孫克燕, 顧國棟, 安杰, 張奎 申請人:攀枝花市農林科學研究院