專利名稱：滇北球花報春的組培快繁方法
技術領域：
本發明涉及植物組織培養，具體地說，涉及滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組織培養快速繁殖方法。
背景技術：
滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)為報春花科報春花屬植物，是一種非常美麗的園林觀賞花卉。滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)是多年生草本花卉，整個植株呈蓮座狀，根狀莖發達，向上生5到多個葉叢，以播種繁殖為主，一般于春季播種后，經過營養生長于次年2月底始花，生長較慢，且繁殖系數低。除播種繁殖外，報春花屬無性繁殖，可用的方法有分株(葉叢)繁殖，組織培養繁殖，少數多年生種類可采用扦插繁殖，然而分株繁殖的方法遠不能滿足生產需求。
組織培養是快速繁殖優良植物品種的一條重要途徑，報春花屬已有不少種進行了組織培養的相關報道，但是滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)的組織培養卻沒有相關研究與報道，因此需要研究滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組織培養，并形成一套專門的快繁技術體系。
發明內容
本發明的目的是提供一種滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組培快繁方法，提高滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)的繁殖系數、生根率及移栽成活率，并結合其它相關的技術措施，使滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的種苗生產、種質保存等能夠得到較好的的保障。
為了實現本發明目的，本發明的一種滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)組培方法包括外植體選擇、表面消毒、不定芽誘導、繼代培養、生根培養與試管苗移栽。
所述的外植體為滇北球花報春的腋芽。
所述不定芽誘導和繼代的培養基為MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/lNAA，pH為5.8～5.9。其光照條件為自然散射光2500～3000Lux加人工輔助光1500～2000Lux。Lux(勒克司)為照度的單位。
所述生根培養基為MS或MS+0.2mg/l NAA，優選為MS+0.2mg/lNAA，pH為5.8～5.9。
其光照條件為自然散射光2500～3000Lux加人工輔助光2500～3000Lux。
經在生根培養基中培養2～3周后，煉苗3～4天移栽至溫室細草炭土中培養。
外植體采用0.1％升汞溶液消毒4～5min。
組培苗適宜的培養溫度為20～23℃之間，超過25℃組培苗變黃甚至逐漸死亡。
組培苗的移栽適宜溫度為18～25℃之間，過高或過低都不利于試管苗的成活。
具體地組培快繁方法為選滇北球花報春的腋芽為外植體，經水沖洗干凈，采用0.1％升汞溶液消毒4～5min，在無菌條件下經蒸餾水反復清洗，接種至誘導培養基MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA中，pH為5.8，光照條件為自然散射光2500～3000Lux加人工輔助光1500～2000Lux；之后移至相同培養基增殖，繼代2～3次，生根培養基為MS+0.2mg/l NAA，pH為5.8，光照條件為自然散射光3000Lux以內加人工輔助光2500～3000Lux；溫度保持在20～23℃之間；生根培養2～3周，煉苗3～4天后，移至細草炭土中培養，保持濕度高于80％，每天噴水2～3次。2周后逐步揭去覆蓋膜正常培養。
一般來說以腋芽為外植體，對植株的破壞性比較大，但對于一些比較珍貴，且急需擴繁的材料，以腋芽為外植體進行擴繁，可以在短時間內獲得大量的再生植株；通過腋芽再生的滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)試管苗生長健壯，對后期的生長觀察發現，基本能保持其優良種性不變。組培快繁的試管苗，在生長過程中，不易受到病蟲害的侵染，但為了進一步防止病蟲害的產生，宜在生長季內噴施多菌靈、氧化樂果等3～4次為佳；試管苗移栽時的溫度應控制在18～25℃之間，過高或過低都不利于試管苗的成活，夏季不宜進行試管苗的移栽。
本發明的組培快繁方法繁育滇北球花報春(Primula denticulatassp.sino-denticulata)，2個月內增殖系數達到3～4，生根率達95％以上，移栽成活率幾乎為100％，極大地提高了滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)的繁殖系數，縮短成苗周期，又可降低成本，為今后大面積園林應用和工廠化育苗提供了非常有效的方法；同時，以腋芽為外植體進行增殖和快繁，能夠保持滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的種性不變，為新品種培育中出現的較為珍貴稀有變種的保存提供了保障。
與現有技術相比，本發明滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組培快繁方法的優點在于1.建立了一種滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組培快繁方法，相比傳統的報春花屬植物育苗繁殖方法，如播種繁殖和分株繁殖，極大地提高了滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的繁殖系數，為科研研究和生產栽培提供了技術支持；2.通過組培快繁得到的幼苗，生長強健，葉色濃綠，一致性強，成苗容易，適應性較強，病蟲害少，易于管理；3.利用組培快繁方法繁育滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)，解除了季節與氣候的限制，從而縮短了育苗周期，增加了繁殖量；4.利用組培快繁方法繁育滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)，可以保持優良種或品種的特性不變，從而為新品種選育研究中變異保存提供了有效的方法。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。
實施例1以滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)葉片為外植體探究不定芽誘導最適培養基選用長勢良好的幼苗葉片作為外植體探究不定芽誘導最佳培養基配方。取滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)的幼嫩葉片自來水沖洗5～6h，于水中滴一滴清潔劑震蕩15min，用軟毛刷輕輕刷去表面雜質，自來水反復沖洗干凈；表面消毒70％酒精消毒15～20s，無菌水沖洗4～5次，0.1％升汞溶液消毒4～5min，再用無菌水沖洗4～5次。然后將消毒過的葉片切成1cm2的小塊(帶部分葉脈)接種在叢生芽的誘導培養基上，每瓶接種5～6塊，每種培養基接10瓶，暗培養。其中，6-BA的濃度梯度0.5mg/l、1.0mg/l和2.0mg/l；NAA的濃度梯度0.05mg/l、0.1mg/l和0.5mg/l，培養基pH為5.8，采用兩因素完全隨機試驗設計。
不同6-BA和NAA濃度影響滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)葉片的分化。接種4～5天后，葉片開始腫脹皺縮，15天左右切口處變肥變厚，40天后，有培養基種葉片開始產生愈傷并有少量不定芽的產生。不定芽分化的最佳濃度是6-BA 2.0mg/l和NAA0.1mg/l，此培養基上滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)誘導率達到45.1％，并且部分分化成芽。
實施例2以滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)腋芽為外植體進行初培養和繼代培養選取生長健壯的植株上的腋芽，自來水沖洗5～6h，消毒滅菌過程同葉片，接種在MS+6-BA 2.0mg/l+NAA 0.1mg/l叢生芽誘導培養基上，每瓶接種2～3個；光照條件為自然散射光3000Lux加上人工輔助光源1800±200Lux，光照時間14h。
當腋芽接種在分化培養基上，不斷抽出新葉，10天開始，抽出新葉的葉柄粗壯，基部變紅，逐漸形成淺綠色愈傷組織，2周后開始有不定芽的分化；接種40天后，在腋芽新抽出的葉柄和葉片上，分化出大量的不定芽。
統計結果顯示在MS+6-BA 2mg/l+NAA 0.1mg/l的培養基上接種2個月后，平均每個腋芽能分化出不定芽的數目是40～50個，顯著多于葉片誘導的不定芽的數量。同時，溫度對于不定芽的誘導和組培苗的生長起到非常關鍵的作用，在20～23℃之間，組培苗葉色濃綠，生長健壯；超過25℃，組培苗變黃并逐漸死亡。在這樣的培養條件下，試管苗2個月的增值系數達到3～4，極大地提高了滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的繁殖系數。
實施例3滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)組培苗的生根培養當不定芽在分化培養基上長出2～3片葉子時，將其從愈傷組織上切除，轉移至生根培養基，配方MS、MS+NAA(0.1mg/l、0.2mg/l、0.5mg/l)中，pH為5.8；光照條件為自然散射光3000Lux加上人工輔助光源2500Lux，光照時間14h。
從生根所需要的時間來看，在培養基MS和MS+0.2mg/l NAA中生根所需時間最短，為8～10天，但在MS+0.2mg/l NAA中，組培苗生根量和長勢明顯好于MS基本培養基，組培苗平均高度可達4.8cm，生根率為95％以上。
實施例4滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)組培苗的移栽生根培養兩周以后，待組培苗平均每株生根4～5條，根長達到1cm時，即可開始為移栽作準備。煉苗是試管苗移栽前的過渡，可以幫助試管苗逐步適應外界環境，使試管苗更健壯，葉色更加深綠，從而提高成活率。滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)試管苗煉苗3～4天后，移栽至溫室細草炭土中，草炭土提前鋪滿穴盤，清水浸透；試管苗移栽后保持濕度80％以上，覆薄膜并每天噴水2～3次，2周以后即可逐步進行正常管理，移栽成活率幾乎為100％。
雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發明要求保護的范圍。
權利要求
1.一種滇北球花報春的組培快繁方法，包括外植體選擇、表面消毒、不定芽誘導、繼代培養、生根培養與試管苗移栽，其特征在于，所述的外植體為滇北球花報春的腋芽，所述不定芽誘導和繼代的培養基為MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA，pH為5.8～5.9，所述生根培養基為MS或MS+0.2mg/l NAA，pH為5.8～5.9。
2.根據權利要求1所述的組培快繁方法，其特征在于，所述不定芽誘導、繼代培養時，光照條件為自然散射光2500～3000Lux加人工輔助光1500～2000Lux。
3.根據權利要求1或2所述的組培快繁方法，其特征在于，所述生根培養基為MS+0.2mg/l NAA。
4.根據權利要求1～3任意一項所述的組培快繁方法，其特征在于，所述生根培養時，光照條件為自然散射光2500～3000Lux加人工輔助光2500～3000Lux。
5.根據權利要求1～4任意一項所述的組培快繁方法，其特征在于，所述組培苗的培養溫度為20～23℃。
6.根據權利要求1～5任意一項所述的組培快繁方法，其特征在于，所述組培苗的移栽溫度為18～25℃。
7.根據權利要求1～6任意一項所述的組培快繁方法，其特征在于，所述外植體采用0.1％的升汞溶液消毒4～5min。
8.根據權利要求1～7任意一項所述的組培快繁方法，其特征在于，所述的組培苗經在生根培養基中培養2～3周后，煉苗3～4天移栽至溫室細草炭土中培養。
9.根據權利要求1～8任意一項所述的組培快繁方法，其特征在于，選滇北球花報春的腋芽為外植體，經水沖洗干凈，采用0.1％的升汞溶液消毒4～5min，在無菌條件下經蒸餾水反復清洗，接種至誘導培養基MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA中，pH為5.8，光照條件為自然散射光2500～3000Lux加人工輔助光1500～2000Lux；之后移至相同培養基增殖，繼代2～3次，生根培養基為MS+0.2mg/l NAA，pH為5.8，光照條件為自然散射光2500～3000 Lux加人工輔助光2500～3000Lux；溫度保持在20～23℃之間；生根培養2～3周，煉苗3～4天后，移至細草炭土中培養，保持濕度高于80％，每天噴水2～3次。
全文摘要
本發明提供了一種滇北球花報春的組培快繁方法，包括外植體選擇、表面消毒、不定芽誘導、繼代培養、生根培養與試管苗移栽。本發明的滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino－denticulata)組培快繁方法，一個腋芽可誘導產生40～50個左右的新芽，經過繼代30～40天左右增殖系數為3～4，生根率可達到95％以上，移栽成活率幾乎為100％，實現了通過快繁技術對優良滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino－denticulata)單株的保存，同時大大提高了滇北球花報春的育苗生產能力，縮短成苗時間又可降低成本，為報春花的大面積推廣應用提供了技術支持。
文檔編號A01G7/06GK101015280SQ20071006405
公開日2007年8月15日 申請日期2007年2月16日 優先權日2007年2月16日
發明者張啟翔, 李翠娟, 潘會堂, 梁樹樂, 程堂仁, 孫明 申請人:北京林業大學