專利名稱：一種紫葉白樺的微繁方法
技術領域：
本發明涉及一種微繁方法。
背景技術：
紫葉白樺0Se^/apo;w/i/b/z'a x抓^^/w 'Royal Frost')是歐洲白樺和亞洲白 樺經過反復雜交并根據葉色特征長期選育出來的新品種，英文名為"5&w/a Royal Frost Penci-2"。紫葉白樺是適合一年四季觀賞的優良樹種，其葉片在整 個春季和夏季保持為葡萄酒紅色，秋季則變為黃色、橙黃色或橙紅色，冬季葉 片脫落后，其肉桂色至白色的片狀剝落狀的樹干同樣具有很高的觀賞價值。紫 葉白樺還具有抗蟲性強，喜光照，耐潮濕，適應性廣，易種植的特點。由于紫 葉白樺常表現為花無育性、不產生種子或產生的種子不能形成具有穩定遺傳性 狀的小植株，所以一直以嫩枝扦插或嫁接的方式進行繁殖。紫葉白樺經由試管 內無菌苗的形式引入我國，引進后經過移栽成活，但引進的數量有限，且成本 高，難實現規模化生產；如果利用嫩枝扦插或嫁接的方式進行繁殖，存在苗木 幼年期長，繁殖周期長，增殖效率低、苗木成活率不高的問題，因此很難在短 時間內實現紫葉白樺苗木的大量擴繁和規模化生產，使紫葉白樺的推廣栽培和 資源利用受到了極大的限制。
發明內容
本發明的目的是為了解決紫葉白樺的繁殖周期長、增殖效率低、成本高、 成活率低和遺傳穩定性差的問題，而提供的一種紫葉白樺的微繁方法。
紫葉白樺的微繁方法按以下步驟實現 一、將清洗后的紫葉白樺外植體在 超凈工作臺上用質量濃度為75。/。的乙醇溶液浸泡60s后再用另一份質量濃度為 75%的乙醇溶液浸泡60s，然后用無菌水沖洗3 5次，再用質量濃度為0.1% 的氯化汞溶液消毒12 15min，然后用無菌水沖洗3 5次；二、將消毒后的 外植體切割成帶有頂芽或2 3個腋芽、且長度為1.5 3cm的莖段，然后接種 于誘導培養基中，在溫度為22 26t:、濕度為70% 80%、光照強度為100 200pmohcm^s—1、每天光照12 24h、每20 30天更換新鮮的誘導培養基的條件下培養4 6個月，獲得微枝(無根試管苗)；三、將微枝的葉片去掉，切割 成帶有頂芽或1 2個腋芽、且長度為1 1.5cm的莖段，然后接種于增殖培養 基中，在溫度為22 26°C、濕度為70°/。 80%、光照強度為100 20(VmoLcm—、'1、每天光照12 24h、每20 25天更換新鮮的增殖培養基的條 件下培養至微枝生長長度為0.5 1.5cm;四、將增殖后的微枝接種于增壯培養 基中，在溫度為22 26°C、濕度為70% 80%、光照強度為100 200)amohcm'、"、每天光照12 24h的條件下培養至微枝生長長度為2.5 4.5cm，再扦插于生根基質中進行生根培養后即完成紫葉白樺的微繁；其中步 驟二中誘導培養基是以WPM培養基為基本培養基，且還包含0.2 0.5mg/L 的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)、 20 30g/L的蔗糖和6 7g/L的瓊脂，pH值為5.2; 步驟三中增殖培養基是以WPM培養基為基本培養基，且還包含0.5 1.5 mg/L 的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)、 20 30g/L的蔗糖和6 7g/L的瓊脂，pH值為5.2; 步驟四中增壯培養基是以WPM培養基為基本培養基，且還包含0.1 0.5mg/L 的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)、 20 30g/L的蔗糖和6 7g/L的瓊脂，pH值為5.2; 步驟四中生根基質按體積份數比由5份的草炭、4份的蛭石和4份的珍珠巖組 成，生根基質含水量為50% 60%。
本發明中紫葉白樺的微繁，繁殖周期短，效率高，其增殖效率為每30 40天增殖30 40倍，而且利用母株上原有的頂芽或腋芽直接進行芽的增殖， 所產生的后代遺傳穩定性好；增壯培養后的微枝在試管外不需要任何化學試劑 和植物激素可直接生根成完整的再生植株，生根和馴化同時進行，操作技術簡 單，省工省時，成本低，比現有方法節省30% 50%費用，且生根率和移苗成 活率均可達100%,實現了紫葉白樺的快速、高效繁殖及大規模推廣種植的目 標。
具體實施例方式
具體實施方式
一本實施方式紫葉白樺的微繁方法按以下步驟實現一、 將清洗后的紫葉白樺外植體在超凈工作臺上用質量濃度為75%的乙醇溶液浸
泡60s后再用另一份質量濃度為75%的乙醇溶液浸泡60s,然后用無菌水沖洗 3 5次，再用質量濃度為0.1%的氯化汞溶液消毒12 15min，然后用無菌水 沖洗3 5次；二、將消毒后的外植體切割成帶有頂芽或2 3個腋芽、且長度
5為1.5 3cm的莖段，然后接種于誘導培養基中，在溫度為22 26。C、濕度為 70% 80%、光照強度為100 200pmol'cm^s"、每天光照12 24h、每20 30天更換新鮮的誘導培養基的條件下培養4 6個月，獲得微枝(無根試管苗); 三、將微枝的葉片去掉，切割成帶有頂芽或1 2個腋芽、且長度為l 1.5cm 的莖段，然后接種于增殖培養基中，在溫度為22 26。C、濕度為70% 80%、 光照強度為100 20(Himol'cm々's'1、每天光照12 24h、每20 25天更換新鮮 的增殖培養基的條件下培養至微枝生長長度為0.5 1.5cm;四、將增殖后的微 枝接種于增壯培養基中，在溫度為22 26°C、濕度為70% 80%、光照強度 為lOONSOOiimol'cmAs^每天光照12 24h的條件下培養至微枝生長長度為 2.5 4.5cm，再扦插于生根基質中進行生根培養后即完成紫葉白樺的微繁；其 中步驟二中誘導培養基是以WPM培養基為基本培養基，且還包含0.2 0.5mg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)、 20 30g/L的蔗糖和6 7g/L的瓊脂，pH 值為5.2;步驟三中增殖培養基是以WPM培養基為基本培養基，且還包含0.5 1.5 mg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)、 20 30g/L的蔗糖和6 7g/L的瓊脂，pH 值為5.2;步驟四中增壯培養基是以WPM培養基為基本培養基，且還包含0.1 0.5mg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)、 20 30g/L的蔗糖和6 7g/L的瓊脂，pH 值為5.2;步驟四中生根基質按體積份數比由5份的草炭、4份的蛭石和4份 的珍珠巖組成，生根基質含水量為50% 60%。
本實施方式中選擇生長旺盛的幼嫩植株為采集外植體的母株，以春天新萌 發的枝條或人工催發的枝條為外植體。
本實施方式步驟一中清洗是用清水洗凈外植體(水中可加入一滴洗滌劑)， 清洗時用細毛刷輕輕刷洗枝條表面的灰塵和雜菌，注意不要損傷休眠芽，然后 將枝條在自來水下沖洗0.5 lh。
本實施方式步驟三中莖段接種于增殖培養基，是將具頂芽的莖段垂直插入 到增殖培養基中，深度為0.5cm;將具腋芽的莖段平放在增殖培養基表面。
本實施方式步驟三中微枝的增殖培養，增殖效率為每30 40天增殖30 40倍，可以轉接到新鮮的增殖培養基中繼續培養，步驟三可循環進行，直至 產生能夠滿足需求的微枝數量。
本實施方式步驟四中增壯培養使細弱微枝的直徑加粗，葉片增大且加厚，能提高微枝生根存活率。
本實施方式步驟四中生根培養室溫度為22 26°C，濕度為70% 80%， 每天光照12 24h，光照強度為100 200 nmol'cm義s"。
本實施方式步驟四中生根培養可與馴化培養同時進行，是將微枝周圍的生 根基質壓實并在生根基質表面和微枝葉面上略噴水，然后覆上保鮮膜在培養室 內培養；每天以噴灑的方式澆水2次，每天早晚揭膜2 5min通風換氣，每隔 7天左右噴施1次0.2%的多菌靈溶液預防病蟲害，培養2周時生根率可達 100%， 2周后逐步去掉保鮮膜、增強通風和光照，培養60天時生根后的微枝 生長長度可達20cm以上。
本實施方式中紫葉白樺的微繁完成后，可進行苗木移栽，即生根后的微枝 生長長度達20cm后移栽到塑料小缽中(小缽中的培養基質為草炭土和沙土的 混合物)，然后放到溫室或大棚中進行培養，培養溫度為15 30°C，濕度為60% 以上，注意通風，移栽成活率達100%。
具體實施方式
二本實施方式與具體實施方式
一的不同是步驟一中用無菌 水洗凈沖洗4次，再用質量濃度為0.1%的氯化汞溶液消毒14min，然后用無 菌水沖洗4次。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
本實施方式中氯化汞溶液可加入一滴吐溫-20。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
二的不同是步驟二中外植體 切割成帶有頂芽或2個腋芽、且長度為2cm的莖段。其它步驟及參數與具體 實施方式二相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
三的不同是步驟二中在溫度 為24"C、濕度為75%、光照強度為16(^mol'cm'、'1、每天光照16h、每25天 更換新配制誘導培養基的條件下培養5個月。其它步驟及參數與具體實施方式
三相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
四的不同是步驟三中切割成 帶有頂芽或2個腋芽、且長度為1.2cm的莖段。其它步驟及參數與具體實施方 式四相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
五的不同是步驟三中在溫度 為25。C、濕度為78%、光照強度為140frniol'cm'2's"、每天光照18h、每22天更換新配制增殖培養基的條件下培養至微枝生長長度為lcm。其它步驟及參數 與具體實施方式
五相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
六的不同是步驟四中在溫度
為23°C、濕度為76%、光照強度為180^imol'cm、"、每天光照20h的條件下 培養至微枝生長長度為3cm。其它步驟及參數與具體實施方式
六相同。
權利要求
1、一種紫葉白樺的微繁方法，其特征在于紫葉白樺的微繁方法按以下步驟實現一、將清洗后的紫葉白樺外植體在超凈工作臺上用質量濃度為75％的乙醇溶液浸泡60s后再用另一份質量濃度為75％的乙醇溶液浸泡60s，然后用無菌水沖洗3～5次，再用質量濃度為0.1％的氯化汞溶液消毒12～15min，然后用無菌水沖洗3～5次；二、將消毒后的外植體切割成帶有頂芽或2～3個腋芽、且長度為1.5～3cm的莖段，然后接種于誘導培養基中，在溫度為22～26℃、濕度為70％～80％、光照強度為100～200μmol·cm-2·s-1、每天光照12～24h、每20～30天更換新鮮的誘導培養基的條件下培養4～6個月，獲得微枝；三、將微枝的葉片去掉，切割成帶有頂芽或1～2個腋芽、且長度為1～1.5cm的莖段，然后接種于增殖培養基中，在溫度為22～26℃、濕度為70％～80％、光照強度為100～200μmol·cm-2·s-1、每天光照12～24h、每20～25天更換新鮮的增殖培養基的條件下培養至微枝生長長度為0.5～1.5cm；四、將增殖后的微枝接種于增壯培養基中，在溫度為22～26℃、濕度為70％～80％、光照強度為100～200μmol·cm-2·s-1、每天光照12～24h的條件下培養至微枝生長長度為2.5～4.5cm，再扦插于生根基質中進行生根培養后即完成紫葉白樺的微繁；其中步驟二中誘導培養基是以WPM培養基為基本培養基，且還包含0.2～0.5mg/L的6-芐基氨基嘌呤、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的瓊脂，pH值為5.2；步驟三中增殖培養基是以WPM培養基為基本培養基，且還包含0.5～1.5mg/L的6-芐基氨基嘌呤、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的瓊脂，pH值為5.2；步驟四中增壯培養基是以WPM培養基為基本培養基，且還包含0.1～0.5mg/L的6-芐基氨基嘌呤、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的瓊脂，pH值為5.2；步驟四中生根基質按體積份數比由5份的草炭、4份的蛭石和4份的珍珠巖組成，生根基質含水量為50％～60％。
2、 根據權利要求1所述的一種紫葉白樺的微繁方法，其特征在于步驟一 中用無菌水沖洗4次，再用質量濃度為0.1%的氯化汞溶液消毒14min，然后 用無菌水沖洗4次。
3、 根據權利要求2所述的一種紫葉白樺的微繁方法，其特征在于步驟二 中外植體切割成帶有頂芽或2個腋芽、且長度為2cm的莖段。
4、 根據權利要求3所述的一種紫葉白樺的微繁方法，其特征在于步驟二 中在溫度為24。C、濕度為75%、光照強度為WOpmol'cm-W每天光照16h、 每25天更換新鮮的誘導培養基的條件下培養5個月。
5、 根據權利要求4所述的一種紫葉白樺的微繁方法，其特征在于步驟三 中切割成帶有頂芽或2個腋芽、且長度為1.2cm的莖段。
6、 根據權利要求5所述的一種紫葉白樺的微繁方法，其特征在于步驟三 中在溫度為25。C、濕度為78%、光照強度為MOpmol'cm-W每天光照18h、 每22天更換新鮮的增殖培養基的條件下培養至微枝生長長度為lcm。
7、 根據權利要求6所述的一種紫葉白樺的微繁方法，其特征在于步驟四 中在溫度為23°C、濕度為76%、光照強度為180^imol'cm、"、每天光照20h 的條件下培養至微枝生長長度為3cm。
全文摘要
一種紫葉白樺的微繁方法，它涉及一種微繁方法。它解決了紫葉白樺的繁殖周期長、增殖效率低、成本高和成活率低的問題。方法1.外植體的消毒；2.將外植體切割成莖段，然后誘導培養，獲得微枝；3.將微枝切割成莖段，然后增殖培養基；4.將增殖后的微枝進行增壯培養，然后扦插于生根基質中進行生根培養后即完成紫葉白樺的微繁。本發明中紫葉白樺的微繁，繁殖周期短，效率高，遺傳穩定性好，其增殖效率為每30～40天增殖30～40倍，操作技術簡單，省工省時，成本低，比現有方法節省30％～50％費用，且生根率和移苗成活率均可達100％。
文檔編號A01H4/00GK101502237SQ20091007134
公開日2009年8月12日 申請日期2009年1月24日 優先權日2009年1月24日
發明者玲 楊, 梁立東, 沈海龍 申請人:東北林業大學;沈海龍;楊 玲