專利名稱：大規模生產辣椒核雄性不育植株的方法
技術領域：
本發明主要涉及一種利用植物組織培養技術大規模生產辣椒核雄性不育兩用系
不育株的方法，特別涉及一種提高再生植株數量的方法。
背景技術：
辣椒是一種十分重要的茄果類蔬菜，它不僅被大量用作調味品，還被開發用于健 康食品和藥物。辣椒雜交優勢十分明顯，用核雄性不育兩用系做母本生產雜交一代種子是 辣椒雜交優勢利用的主要手段，用辣椒核雄性不育兩用系做母本進行雜交辣椒的生產，播 種的辣椒核雄性不育兩用系中有50%的可育株，需要在花期拔除所有的可育株，有時因為 拔除可育株不完全，容易造成雜交種子的純度低。 到目前為止，用于制種的辣椒核雄性不育兩用系的不育株主要還是通過在花期將 核雄性不育兩用系中的50%的可育株拔除而獲得，需要花費大量的人力；另外獲得用于制 種的辣椒核雄性不育兩用系的不育株也有通過葉片等進行組織培養獲得再生植株，但辣椒 通過葉片等進行組織培養獲得再生植株難度十分大，且變異比較嚴重，不具備實用性；還有 一種獲得用于制種的辣椒核雄性不育兩用系不育株的方法是通過扦插繁殖的方式，但扦插 繁殖的繁殖系數小，多代繁殖還有退化的現象。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術的不足，利用植物組織培養技術，提供一種大規 模生產辣椒核雄性不育植株的方法。 本發明通過下列技術方案完成一種大規模生產辣椒核雄性不育植株的方法，它 包括下述步驟 A、由辣椒核雄性不育兩用系不育株帶腋芽的莖段，接種在腋芽誘導培養基上，在 人工控制的環境條件下，誘導腋芽的萌發伸長，形成叢生苗； B、由叢生苗分割成帶腋芽的莖段，接種在腋芽誘導培養基上，在人工控制的環境
條件下，誘導腋芽的萌發伸長，形成次級叢生苗； C、在相同的條件下，通過重復的繼代培養擴增叢生苗； D、分割叢生苗，接種到不定根誘導培養基上，在人工控制的環境條件下，誘導不定 根的形成； E、選取生根多且健壯的植株去掉封口膜煉苗7 10d，然后洗凈根系上的培養基，移 入含有珍珠巖和草炭土混合基質的營養缽并置于溫室中，用塑料薄膜覆蓋，5d后逐步揭去 薄膜通風，增加光照，及時補足營養缽水分，15 20d后將營養缽移至露地，10 15d后將幼苗 移到大田中。 本發明所說的叢生苗是在一個苗擴增培養基上通過重復繼代培養大規模擴增生 產的。 所說A、 B、 C步驟中的腋芽萌發生長至具有4個以上節的叢生苗，叢生苗切割成具有單個節的莖段，將各個莖段移入腋芽誘導培養基，并在該培養基上進行腋芽誘導培養，通 過重復的莖段切割誘導培養來擴增叢生苗，將形成的叢生苗切割成單株，將各個單株移入 不定根誘導培養基，并在此培養基上進行不定根的誘導，形成完整的再生植株。
所述的E步驟的混合基質中珍珠巖與草炭土體積比為i : i 2 : i。 所說的腋芽誘導培養基為MS基礎培養基，并在該培養基中添加質量比為3%的 蔗糖、0. 6 %的瓊脂，0. 5 2. 0 %的芐基腺嘌呤，和0. 01 0. 1 %的a-萘乙酸，控制培養基pH 5. 8，在12TC下滅菌20min。所說的叢生芽不定根誘導培養基為1/2MS基礎培養基，其中亞鐵鹽的含量與MS 培養基相同，在1/2MS基礎培養基中還含有質量比為3%的蔗糖，0.6%的瓊脂，0. 02 0. 1% 的a-萘乙酸，和0.02 0. 1X的吲哚丁酸，控制培養基pH 5.8，于12rC下滅菌20min。
所說的人工控制的環境條件為每天連續光照12 14h，溫度24 26t:，光照強度 40 50翻l.m—2. s—、 和現有技術相比，本發明有如下優點或積極效果。 1、利用腋芽再生植株，接種材料不需要經過脫分化和再分化的過程，產生的再生 植株性狀穩定、一致。 2、所接種的材料已經有帶有腋芽，在培養時只需腋芽的萌發，技術難度較小。
3、通過將再生植株分割成帶腋芽的莖段進行擴繁，繁殖系數大，每年能夠產生大 量的再生植株。 4、所獲得的植株都為雄性不育株，栽入大田后不需篩選可育株的過程，可以直接 用于雜交制種。
具體實施例方式
下面通過實施例對本發明作進一步說明。
實施例1 辣椒核雄性不育兩用系2003A大田植株的大規模組織培養，其步驟是 1.將市購的辣椒核雄性不育兩用系2003A種植于露地農田中； 2.在花期，選其中的不育株，切取生長旺盛、無病蟲害的枝條，去掉葉片，留下來的
枝條切成帶單個莖節的莖段，用75%的酒精滅菌20秒，再用漂白粉處理25分鐘，再用無菌
水漂洗4次； 3.將經過上述2步驟處理獲得的無菌莖段接種到人工控制環境條件下的腋芽誘 導培養基上，培養30d，誘導腋芽的萌發生長；其中，腋芽誘導培養基為MS，并在其中添加 質量比為3%的蔗糖、0.6%的瓊脂，0.5%芐基腺嘌呤(BA)，和0.01X的a-萘乙酸(NAA)， 控制培養基PH5. 8，在12rC下滅菌20min ;人工控制的環境條件為每天連續光照12h，溫 度24°C ，光照強度40umol. m—2. s-1 ; 4.將萌發的腋芽繼續培養30d，使其長成具有4個以上莖節的叢生苗，培養基配方 與環境條件與步驟3相同； 5.將具有4個以上莖節的叢生苗切割成帶有一個莖節的莖段，將帶有一個莖節的 莖段接種在腋芽誘導培養基上，培養30d，誘導次級腋芽的萌發，培養基配方與環境條件與 步驟3相同；的叢生苗，培養基配方 與環境條件與步驟3相同； 7.重復上述培養環節(每次繼代的擴繁系數為10倍，每60天繼代一次，單個莖段 每年可提供辣椒核雄性不育植株100萬株)； 8.將具有4個以上莖節的辣椒核雄性不育植株的叢生苗分割成單個苗，并將各 個單苗接種到人工控制環境條件的不定根誘導培養基上，培養25d，誘導不定根的產生；其 中，不定根誘導培養基為1/2MS，而其中的亞鐵鹽的含量與MS培養基相同，并且該1/2MS培 養基中，還含有質量比為3%的蔗糖、0. 6%的瓊脂、0. 02%的a-萘乙酸和0. 02%的吲哚丁 酸，控制培養基pH 5.8，在12rC下滅菌20min;環境條件與步驟3相同；
9.選取生根多且健壯的植株去掉封口膜煉苗7d，然后洗凈根系上的培養基，移入 含有珍珠巖和草炭土 (珍珠巖和草炭土的體積比為1 : 1)混合基質的營養缽并置于溫室 中，用塑料薄膜覆蓋，5d后逐步揭去薄膜通風，增加光照，及時補足營養缽水分，15d后將營 養缽移至露地，10d后將幼苗移到大田中，即可得辣椒核雄性不育兩用系不育株。
實施例2 辣椒核雄性不育兩用系0908A大田植株的大規模組織培養，其步驟是
本例與實施例1基本相同，不同的僅僅是所用材料為市購的辣椒核雄性不育兩 用系0908A;腋芽誘導培養基為，MS，并在其中添加質量比為2.0%的芐基腺嘌呤，和0. 1% 的a-萘乙酸；叢生芽不定根誘導培養基為1/2MS，而其中的亞鐵鹽的含量與MS培養基相 同，并且該1/2MS培養基中，還含有質量比為0. 1%的3-萘乙酸和0. 1%的吲哚丁酸；人工
控制的環境條件為每天連續光照14h，溫度26t:，光照強度50umol.m—2. s—、去掉封口膜煉
苗時間為10d，營養缽中的混合基質為珍珠巖和草炭土的體積比2 : 1，20d后將營養缽移
至露地，15d后將幼苗移到大田中，即可得辣椒核雄性不育兩用系不育株。 發明人使用該辦法對露天農田的植株進行了培養，生產出大量的無菌苗用于雜交
種子的生產，效果良好。
權利要求
一種大規模生產辣椒核雄性不育植株的方法，其特征在于，它包括下述步驟A、由辣椒核雄性不育兩用系不育株帶腋芽的莖段，接種在腋芽誘導培養基上，在人工控制的環境條件下，誘導腋芽的萌發生長，形成叢生苗；B、由叢生苗分割成帶腋芽的莖段，接種在腋芽誘導培養基上，在人工控制的環境條件下，誘導腋芽的萌發生長，形成次級叢生苗；C、在相同的條件下，通過重復的繼代培養擴增叢生苗；D、分割叢生苗，接種到不定根誘導培養基上，在人工控制的環境條件下，誘導不定根的形成；E、選取生根多且健壯的植株去掉封口膜煉苗7~10d，然后洗凈根系上的培養基，移入含有珍珠巖和草炭土混合基質的營養缽并置于溫室中，用塑料薄膜覆蓋，5d后逐步揭去薄膜通風，增加光照，及時補足營養缽水分，15~20d后將營養缽移至露地，10~15d后將幼苗移到大田中。
2. 根據權利1所述的方法，其特征在于，所說A、 B、 C步驟中的腋芽萌發生長至具有4 個以上節的叢生苗，將具有4個以上節的叢生苗切割成具有單個節的4段莖段，將各個莖段 再移入腋芽誘導培養基，并在該培養基上進行腋芽誘導培養，通過重復的莖段切割誘導培 養來擴增叢生苗，將形成的叢生苗切割成單株，移入不定根誘導培養基中，并在此培養基上 進行不定根的誘導，形成完整的再生植株。
3. 根據權利要求1至3所述的方法，其特征在于，所說的腋芽誘導培養基為MS基礎培 養基，并在該培養基中添加質量比為3%的蔗糖、0. 6%的瓊脂，0. 5 2. 0%的芐基腺嘌呤，和 0. 01 0. 1%的a-萘乙酸，控制培養基pH5. 8，在121。C下滅菌20min。
4. 根據權利要求1至2所述的方法，其特征在于，所說的叢生芽不定根誘導培養基為 1/2MS基礎培養基，其中亞鐵鹽的含量與MS培養基相同，在1/2MS基礎培養基中還含有質量 比為3%的蔗糖，0. 6%的瓊脂，0. 02 0. 1 %的a-萘乙酸，和0. 02 0. 1 %的吲哚丁酸，控制培 養基pH 5. 8，于12TC下滅菌20min。
5. 根據權利1所述的方法，其特征在于所述的E步驟的混合基質中珍珠巖與草炭土的 體積比為1 : 1 2 : 1。
6. 根據權利要求1至2所述的方法，其特征在于，所說的人工控制的環境條件為每天 連續光照12 14h，溫度24 26。C，光照強度4(T50umo1. m—2. s—全文摘要
本發明提供一種大規模生產辣椒核雄性不育植株的方法，它包括由辣椒核雄性不育兩用系不育株的帶腋芽的莖段誘導不定芽萌發，由不定芽形成叢生苗；再由叢生苗帶腋芽的莖段誘導不定芽萌發，由不定芽形成次級叢生苗；通過反復繼代培養誘導腋芽形成叢生苗；通過組織培養形成大量的叢生苗；將叢生苗分割進行誘導不定根的形成；最后通過將再生植株種植于露天農田來形成大量的辣椒核雄性不育兩用系不育株。
文檔編號A01G31/00GK101731146SQ20091016321
公開日2010年6月16日 申請日期2009年12月23日 優先權日2009年12月23日
發明者文錦芬 申請人:昆明理工大學