專利名稱：海南粗榧種子種苗快速高效繁育方法
技術領域：
本發明涉及一種植物的種子種苗快速高效繁育方法，特別涉及海南粗榧種子種苗快速高 效繁育方法。
背景技術：
海南粗榧(C印/w/otoow /w!'n朋e"^ Li)為三尖杉科植物，別名紅殼松、薄葉蓖子杉， 為多年生高大常綠喬木。是我國特有的珍稀樹種，其分布范圍極為狹窄，僅見于海南及廣東、 云南等局部地區。研究表明，海南粗榧不僅有效生物堿含量為三尖杉科中最高，而且療效最 顯著，是目前公認的最好抗癌樹種之一。再加之該樹種因材質優良而屢遭砍伐，加之種群數 量少，是我國最重要的珍稀瀕危植物之一。但該樹種自然資源十分有限，很難滿足日益增長 的需求。由于該樹種為雌雄異株、種子產量和萌發率很低(每年每雌株僅數十粒，種子萌發 率野外約10% (—方面是因為海南粗榧種子萌發需要低溫解除休眠，海南難以滿足；另一方 面海南粗榧種子在野外很易被動物啃食、傳統人工萌發約20%)，而且海南粗榧種子野外和傳 統的萌發方法需要約1年以上時間才能成苗，再加之受其生態和人為破壞等因素而導致海南 粗榧瀕臨滅絕(王獻溥,王有生.海南粗榧瀕危的原因和保護措施.廣西植物，1994， 14 (4): 369-372)。雖然也有人研究采用扦插繁殖，但是在種質資源瀕臨滅絕的情況下，通過扦插提 供大量苗木的難度很大，遠遠滿足不了制藥行業對海南粗榧的需求，而且會對海南粗榧的有 限資源造成更大的破壞；而且資料表明扦插幼嫩莖段來源直接影響到扦插幼苗的生長態勢， 只有來源于主莖頂端的幼嫩枝條扦插產生的幼苗能正常直立良好生長；而主莖頂端幼嫩莖段 取材會直接毀滅該株植物的正常生長。所以，扦插繁殖基本不能推廣(符文英，潘學峰,陳秀蕙， 劉國民，李任珠.海南粗榧扦插與生根試驗研究.海南大學學報(自然科學版)，
1997,15(3) :239-244;潘學峰，符文英，陳秀蕙,劉國民,李任珠.海南粗榧扦插繁殖研究.熱帶農 業科學，1996， (3): 25-30;杜道林，符文英.珍稀瀕危植物海南粗榧種群保護生物生態學.湖 南科技出版社，2003.11)。另外也有人研究采用傳統的組織培養方法對海南粗榧進行幼苗繁 殖，但是基本不能出苗，或者出苗率很低，不能進行應用推廣(符文英,杜道林，符木均.海南 粗榧愈傷組織的誘導和培養.植物生理學通訊，2004， 40(1): 34-36;李志英，王祝年，徐立.海 南粗榧的離體快速繁殖.植物生理學通訊，2005, 41(5): 786)。
鑒于此，海南粗榧的物種保護引起植物學研究機構的高度重視。所以，本發明提供了一種直接以海南粗榧種子進行快速高效育苗的系統方法，可以實現提高種子萌發出芽率到90% 以上(提高了約70%),幼苗成活超過90% (提高了約60%),成苗時間比傳統方法縮短2/3 以上，并生產整齊一致的優質海南粗榧幼苗，還最大限度利用了極為有限的海南粗榧種子資 源，為解決珍稀瀕危植物海南粗榧快繁和恢復保護與資源開發利用提供技術保障，以滿足海 南粗榧這一珍稀瀕危植物種苗迫切需求。
發明內容
本發明解決的關鍵技術問題是直接以海南粗榧種子進行快速髙效育苗，提高種子萌發出 芽率到90%以上，幼苗成活超過90%，成苗時間比傳統方法縮短2/3以上，并生產整齊一致 的優質海南粗榧幼苗，為解決珍稀瀕危植物海南粗榧快繁和恢復保護與資源開發利用提供技 術保障。
本發明要解決的技術問題是用海南粗榧種子為繁殖體，提供整套海南粗榧種苗快速繁殖 方法。解決上述問題的技術方案包括如下步驟
(1) 種子收集收集發育接近成熟或成熟的海南粗榧種子；
(2) 種子的洗凈與滅菌將海南粗榧種子沖水1-3 h.，并用蒸鎦水清洗干凈，濾紙吸干 后放入約0.5-2.0X次氯酸鈉溶液中真空抽濾滅菌約3-8min ，然后無菌水反復沖洗3-6次；
(3) 種子低溫解除休眠將滅菌好的海南粗榧種子置于l-6'C的低溫保藏1-3周，解除 種子的休眠；
(4) 種子無菌萌發解除休眠的種子再放入約0.5-2.0%次氯酸鈉溶液中真空抽濾滅菌約 3-8 min ，然后無菌水反復沖洗2-5次；然后將種子接種到如下培養基上培養0.5-1 MS(Murashige and Skoog Stock培養基)+ 0.01-0.1 mg'I/1 6-BA (6-節基嘌呤)+ 0-100 mg-L/1 肌醇+0.2-0.6%瓊脂+1-5%蔗糖+1-5%椰子乳^11值5.0-6.0;暗培養2d后再置于光照周 期16h.d—1、光照強度2000-3000 Lux的冷光燈下、環境溫度25 士 2 °C中繼續培養15-25 d， 便獲得新綠色的生有根的實生苗，出苗率超過90%;
(5) 馴化移栽將生根良好的幼苗移至馴化室、光照強度10000-3000 Lux 、馴化1-2 周，將苗從試管取出，用溫水沖洗苗根部培養基，再用冷水沖洗，移栽至體積比為椰糠:河沙 =1-3:1或蛙石:珍珠巖:泥炭=1-3:1-3:1混合而成的盆裝人工基質中，每盆苗套上透明塑料袋， 隔3天將袋子剪一小口， 9-12 d去盆苗透明塑料袋移至溫室培養；1-2周后分別移入花盆 或裝袋制成袋苗，基質主要成分為從野外海南粗榧群落所取土壤和腐殖質，再培養1-2周， 即可轉入室外大棚培養生長；幼苗成活率達卯％以上。
本發明的有益效果是直接以海南粗榧種子進行快速高效育苗，提高種子萌發出芽率到90%以上(提高了約70%)，幼苗成活超過90% (提高了約60%)，成苗時間比傳統方法縮短 2/3以上，并生產整齊一致的優質海南粗榧幼苗，為解決珍稀瀕危植物海南粗榧快繁和恢復保 護與資源開發利用提供技術保障。
具體實施例方式
本發明具體實施方式
下面結合實例予以闡明培養基中所需各種藥品試劑均可市售獲得， 按商品說明書所示常規方法配用，為行業所通用。 實施例1:
(1) 種子收集收集發育接近成熟或成熟的海南粗榧種子20粒；
(2) 種子的洗凈與滅菌將海南粗榧種子沖水1 h.，并用蒸餾水清洗干凈，濾紙吸干后 放入0.5X次氯酸鈉溶液中真空抽濾滅菌8min ，然后無菌水反復沖洗3次；
(3) 種子低溫解除休眠將滅菌好的海南粗榧種子置于約rc的低溫保藏1周，解除種
子的休眠；
(4) 種子萌發解除休眠的種子再放入0.5M次氯酸鈉溶液中真空抽濾滅菌3min ，然 后無菌水反復沖洗3次；然后將種子接種到如下培養基上培養0.5MS(MurashigeandSkoog Stock培養基)+ 0.01 mg.1/1 6-BA (6-芐基嘌呤)+ 0,2%瓊脂+ 1%蔗糖+ 1%椰子乳,pH值 5.0;暗培養2d后再置于光照周期16h，cT1、光照強度2000Lux的冷光燈下、環境溫度25 士2'C中繼續培養15 4獲得新綠色的生有根的實生苗19株，出苗率超過95%;
(5) 馴化移栽將幼苗移至馴化室、光照強度10000Lux 、別l化1周，將苗從試管取出， 用溫水沖洗苗根部培養基，再用冷水沖洗，移栽至體積比為椰糠:河沙-l:l混合而成的盆裝人 工基質中，每盆苗套上透明塑料袋，隔3天將袋子剪一小口， 9 d去盆苗透明塑料袋移至 溫室培養；1周后分別移入花盆制成盆苗，基質主要成分為從野外海南粗榧群落所取土壤和 腐殖質，再培養1周，即轉入室外大棚培養生長；幼苗成活率達100%。
實施例2:
(1) 種子收集收集發育接近成熟或成熟的海南粗榧種子20粒；
(2) 種子的洗凈與滅菌將海南粗榧種子沖水3h.,并用蒸餾水清洗干凈，濾紙吸干后
放入2M次氯酸鈉溶液中真空抽濾滅菌3min ,然后無菌水反復沖洗6次；
(3) 種子低溫解除休眠將滅菌好的海南粗榧種子置于約6'C的低溫保藏2周，解除種 子的休眠；
(4) 種子萌發解除休眠的種子再放入2^次氯酸鈉溶液中真空抽濾滅菌8min ,然后 無菌水反復沖洗6次；然后將種子接種到如下培養基上培養1 MS(Murashige and Skoog
5Stock培養基)+ 0.1 mg'r1 6-BA (6-節基嘌呤)+ 100 mg'l/1肌醇+ 0.6%瓊脂+ 5%蔗糖+ 5。/。椰子乳,pH值6.0;暗培養2d后再置于光照周期16bcT1、光照強度3000 Lux的冷光燈 下、環境溫度25士2'C中繼續培養25d,獲得新綠色的生有根的實生苗20株,出苗率100%;
(5)馴化移栽將幼苗移至馴化室、光照強度30000 Lux 、馴化2周，將苗從試管取出， 用溫水沖洗苗根部培養基，再用冷水沖洗，移栽至體積比為椰糠:河沙=3:1混合而成的盆裝人 工基質中，每盆苗套上透明塑料袋，隔3天將袋子剪一小口， 12 d去盆苗透明塑料袋移至 溫室培養；2周后分別移入花盆制成盆苗，基質主要成分為從野外海南粗榧群落所取土壤和 腐殖質，再培養2周，即轉入室外大棚培養生長；幼苗成活率達100%。
按本發明的技術方法實施，培養基中成分相對比例差異會導致生根率、壯弱程度上的差 異，總的說，數值越接近最佳值，實施結果越理想。
權利要求
1、海南粗榧種子種苗快速高效繁育方法，其特征在于按照下述步驟進行(1)種子收集收集發育接近成熟或成熟的海南粗榧種子；(2)種子的洗凈與滅菌將海南粗榧種子沖水1-3h.，并用蒸餾水清洗干凈，濾紙吸干后放入0.5-2.0％次氯酸鈉溶液中真空抽濾滅菌3-8min，然后無菌水反復沖洗3-6次；(3)種子低溫解除休眠將滅菌好的海南粗榧種子置于1-6℃的低溫保藏1-3周，解除種子的休眠；(4)種子無菌萌發解除休眠的種子再放入約0.5-2.0％次氯酸鈉溶液中真空抽濾滅菌3-8min，然后無菌水反復沖洗2-5次；然后將種子接種到培養基上培養；暗培養2d后再置于光照周期16h·d-1、光照強度2000-3000Lux的冷光燈下、環境溫度25±2℃中繼續培養15-25d；(5)馴化移栽將生根良好的幼苗移至馴化室、光照強度10000-3000Lux、馴化1-2周，將苗從試管取出，用溫水沖洗苗根部培養基，再用冷水沖洗，移栽盆裝人工基質中，每盆苗套上透明塑料袋，隔3天將袋子剪一小口，9-12d去盆苗透明塑料袋移至溫室培養；1-2周后分別移入花盆或裝袋制成袋苗，基質主要成分為從野外海南粗榧群落所取土壤和腐殖質，再培養1-2周，即可轉入室外大棚培養生長。
2、 根據權利要求所述的海南粗榧種子種苗快速高效繁育方法，其特征在于培養基的組成如下 0.5-1 Murashige and Skoog Stock培養基+ 0.01-0.1 mg-I/1 6-節基嘌呤+ 0-100 mg'I^肌醇'+ 0.2-0.6%瓊脂+ 1-5%蔗糖+ 1-5°/0椰子乳，調pH值5.0-6.0。
3、 根據權利要求所述的海南粗榧種子種苗快速高效繁育方法，其特征在于盆裝人工基質組成 如下以體積比計為椰糠:河沙=1-3:1或蛙石:珍珠巖鄰炭-l-3:l-3:l。
全文摘要
本發明海南粗榧種子種苗快速高效繁育方法，屬于植物的種子種苗快速高效繁育方法，按照下述步驟進行(1)種子收集；(2)種子的洗凈與滅菌；(3)種子低溫解除休眠；(4)種子無菌萌發；(5)馴化移栽。本發明能提高種子萌發出芽率到90％以上(提高了約70％)，幼苗成活超過90％(提高了約60％)，成苗時間比傳統方法縮短2/3以上，并生產出整齊一致的優質海南粗榧幼苗，為解決珍稀瀕危植物海南粗榧快繁和恢復保護與資源開發利用提供技術保障。
文檔編號A01G1/00GK101637096SQ20091018420
公開日2010年2月3日 申請日期2009年8月14日 優先權日2009年8月14日
發明者宋經元, 杜道林, 楊冬華, 英 林, 王有生, 祁珊珊, 魏建和 申請人:江蘇大學